Page 70 - 2019年2月第30卷第4期

表3 正交试验设计与结果 量浓度为 2 000 g/L（按生药量计；剂量设置参考文献
Tab 3 Design and results of orthogonal tests [12]）的大黄水煎液。
编号 A B C D 多糖提取率，％ 2.5.2 分组、造模和给药 将 80 只雄性 SD 大鼠随机分
1 1. 1. 1. 1. 4.47 为8组，即空白组，模型组，生脉饮低、中、高剂量组以及
2 1. 2. 2. 2. 5.47
3 1. 3. 3. 3. 5.58 生脉饮多糖低、中、高剂量组，每组10只。空白组大鼠灌
4 2. 1. 2. 3. 6.21 胃水10 mL/kg，其余各组大鼠均灌胃大黄水煎液10 mL/kg
5 2. 2. 3. 1. 7.27 以复制大鼠脾虚模型，每天 1 次，连续 15 d。自第 16 天
6 2. 3. 1. 2. 3.92 起，空白组和模型组大鼠均灌胃水 10 mL/kg，其余各组
7 3. 1. 3. 2. 5.42
8 3. 2. 1. 3. 4.69 大鼠均灌胃相应药液10 mL/kg，每天1次，连续10 d。
9 3. 3. 2. 1. 7.58 2.5.3 一般状况 观察各组大鼠的皮毛、大便排泄情况
15.52 16.10 13.08 19.32
K1 以及活动状态，并分别于造模前、造模后（给药前）及末
17.40 17.43 19.26 14.81
K2
17.69 17.08 18.27 16.48 次给药后称定其体质量。采用SPSS 20.0软件对数据进
K3
R 0.72 0.44 2.06 1.50 行统计分析。计量资料以x±s表示，组间比较采用单因
表4 方差分析结果 素方差分析。P＜0.05为差异有统计学意义。
Tab 4 Results of variance analysis 结果显示，造模前，各组大鼠体质量比较，差异均无
因素 偏差平方和 自由度 均方差 F P 统计学意义（P＞0.05）。造模后（给药前），除空白组外，
A 0.93 2 0.46 0.27 ＞0.05 其余各组大鼠均出现大便溏稀、体形消瘦、食量减小、皮
B 0.32 2 0.16 0.09 ＞0.05
C 7.35 2 3.67 2.12 ＜0.05 毛枯槁、精神萎靡、蜷缩、拱背以及不同程度的脱肛。造
D 3.47 2 1.73 1.00 ＞0.05 模后（给药前），空白组大鼠的体质量较同组造模前显著
注：F0.05 （2，2）＝19.00 增加，差异有统计学意义（P＜0.01）；与空白组比较，其
Note：F0.05 （2，2）＝19.00 余各组大鼠的体质量均显著降低，差异均有统计学意义
由表 2、表 3 可见，各因素影响大小依次为 C＞D＞ （P＜0.01）。末次给药后，各给药组大鼠上述症状均有
A＞B，即提取温度＞提取次数＞料液比＞提取时间。 不同程度的改善，空白组、生脉饮各剂量组及生脉饮多
方差分析结果显示，提取温度对生脉饮多糖的提取具有 糖各剂量组大鼠的体质量均较同组造模前显著增加，差
显著影响（P＜0.05）；其最优提取工艺为 A3B2C2D1，即料 异均有统计学意义（P＜0.05 或 P＜0.01）；与空白组比
液比1∶10、提取时间45 min、提取温度80 ℃、提取1次。 较，模型组大鼠的体质量显著降低，差异有统计学意义
2.4.3 验证试验 按质量比 1 ∶ 2 ∶ 1 的比例精密称取红 （P＜0.01）；与模型组比较，生脉饮中剂量组及生脉饮多
参、麦冬、五味子饮片各适量，混合，按“2.4.2”项下最优 糖低、高剂量组大鼠体质量均显著增加，差异均有统计
工艺平行提取3次，提取液均按“2.1.2”项下方法处理后， 学意义（P＜0.05或P＜0.01），详见表5。
按“2.2”项下方法测定多糖含量，再按“2.3”项下方法计 2.5.4 血清 D-木糖含量 测定各组大鼠造模后（给药
算 多 糖 提 取 率 ，结 果 分 别 为 7.43％ 、7.64％ 、7.80％ 前）及末次给药后血清中D-木糖的含量。所有大鼠均禁
（RSD＝1.01％，n＝3），表明该工艺稳定、可行。 食、不禁水 12 h 后，自眼眶取血 0.5 mL 至 1.5 mL EP 管
2.5 生脉饮及生脉饮多糖对脾虚模型大鼠相关指标的 中；随后每只大鼠灌胃10％D-木糖溶液10 mL/kg，1 h后
影响 再自眼眶取血0.5 mL于另一1.5 mL EP管内。血液样品
2.5.1 给药样品的制备 （1）生脉饮药液：按质量比 1 ∶ 静置 1 h 后，以 3 500 r/min 离心 10 min，分离血清，采用
2 ∶ 1 的比例精密称取红参、麦冬、五味子饮片各适量，混 间苯三酚法以紫外-可见分光光度计于554 nm波长处测
合，加入 8 倍量水，浸泡 30 min，煎煮 2 次，每次 30 min， 定光密度（OD）值，并计算大鼠血清中D-木糖含量[血清
合并2次提取液，浓缩即得。上述提取物经水稀释后，制 D-木糖含量＝（测定OD值－测定空白OD值）/（标准OD
得低、中、高剂量（350、700、1 400 g/L，按生药量计；剂量 值－试剂空白OD值）×标准品浓度（式中，“测定OD值”
设置参考文献[10-11]及本课题组前期预实验结果）的生 为各组大鼠灌胃 D-木糖溶液后血浆样品的 OD 值，“标
脉饮药液。（2）生脉饮多糖药液：按“2.4.2”项下最优工艺 准 OD 值”为检测试剂盒中 1.33 mmol/L D-木糖标准品
提 取 生 脉 饮 多 糖 ，临 用 前 用 0.5％ 羧 甲 基 纤 维 素 钠 溶液的 OD 值，“测定空白 OD 值”为各组大鼠灌胃 D-木
（CMC-Na）溶液溶解，制得低、中、高剂量（24.5、49、98 g/L， 糖溶液前血浆样品的 OD 值，“试剂空白 OD 值”为测定
按生药量计；剂量设置依据同“生脉饮”）的生脉饮多糖 试剂即间苯三酚的 OD 值，“标准品浓度”为检测试剂盒
药液。（3）大黄水煎液：取大黄饮片适量，第1次加6倍量 中D-木糖标准品溶液的浓度）]，严格按照检测试剂盒说
水，浸泡 30 min，80 ℃温浸提取 60 min；第 2 次加 4 倍量 明书方法操作。统计学方法同“2.5.3”项。
水，80 ℃温浸提取 45 min；合并 2 次浸提液，浓缩，得质 结果显示，造模后（给药前），模型组及各给药组大

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