Page 76 - 2019年2月第30卷第4期

37 ℃、5％CO2条件下培养 24 h。各孔细胞经 RIPA 裂解 Ibr 组，差异均有统计学意义（P＜0.05 或 P＜0.01）；Ibr-7
液裂解后，采用 BCA 法以蛋白定量检测试剂盒测定其 的 IC50 值为（2.3±0.2）μmol/L，显著低于 Ibr 的（20.4±
总蛋白浓度。蛋白经上样缓冲液稀释后，于100 ℃沸水 1.1）μmol/L，差异有统计学意义（P＜0.01），详见表1。
中变性 5 min，冷却，1 000 r/min 离心 5 min，将沉淀置 表 1 Ibr、Ibr-7 对 Capan-2 细胞存活率的影响（x±±s，
于－80 ℃保存，备用。以β-actin为内参进行十二烷基硫 n＝3）
酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE），随后转移至 Tab 1 Effects of Ibr and Ibr-7 on survival rates of Ca-
PVDF 膜上，脱脂奶粉室温封闭 1 h 后，分别加入 PARP、 pan-2 cells（x±±s，n＝3）
Noxa、Bax、Bcl-2、Mcl-1、Bcl-xL、β-actin一抗（1 ∶ 1 000）， 组别 细胞存活率，％ 组别 细胞存活率，％
于 4 ℃孵育过夜；用 TBST 溶液洗膜 3 次，每次 10 min， 空白对照组 100.0±4.3 1 μmol/L Ibr-7组 77.0±1.8 ＊#
1 μmol/L Ibr组 80.9±1.5 ＊ 2 μmol/L Ibr-7组 31.1±2.0 ＊##
加入 HRP 标记的二抗（1 ∶ 5 000），室温孵育 1 h，再用 2 μmol/L Ibr组 75.9±1.2 ＊ 4 μmol/L Ibr-7组 5.7±1.1 ＊##
TBST溶液洗膜3次，每次10 min。以ECL显色后，置于 4 μmol/L Ibr组 73.3±1.2 ＊ 8 μmol/L Ibr-7组 5.1±0.8 ＊##
8 μmol/L Ibr组 67.3±1.1 ＊
凝胶成像系统上成像并采用 ImageJ 1.46r 软件进行分
注：与空白对照组比较，P＜0.01；与同剂量Ibr组比较，P＜0.05，
#
＊
析。以目标蛋白条带与内参条带的灰度值之比表示目
## P＜0.01
标蛋白的相对表达量。
Note：vs. blank control group， P＜0.01；vs. same-dose Ibr group，
＊
2.6 统计学方法
P＜0.05，P＜0.01
##
#
采用SPSS 19.0软件对数据进行统计分析。计量资 3.1.2 细胞的药物敏感性 与空白对照组比较，经不同
料以x±s表示，组间比较采用t检验。P＜0.05为差异有 剂 量 吉 西 他 滨（0.125、0.25、0.5、1 μ mol/L）、紫 杉 醇
统计学意义。 （0.062 5、0.125、0.25、0.5、1 μmol/L）分别作用 48 h 后，
3 结果 Capan-2 细胞的存活率均显著降低，差异均有统计学意
3.1 Ibr、Ibr-7 对 Capan-2 细胞增殖活性和药物敏感性 义（P＜0.05 或 P＜0.01）；联用 Ibr 或 Ibr-7 后，Capan-2 细
的影响 胞的存活率均显著低于同剂量吉西他滨、紫杉醇单用
3.1.1 细胞的增殖活性 与空白对照组比较，经不同剂 组，且联用Ibr-7组的细胞存活率均显著低于同剂量联用
量 Ibr、Ibr-7 作用 48 h 后，Capan-2 细胞的存活率均显著 Ibr 组，差异均有统计学意义（P＜0.05 或 P＜0.01），详见
下降，且各剂量Ibr-7组的细胞存活率均显著低于同剂量 表2、表3。

表2 Ibr、Ibr-7与吉西他滨联用对Capan-2细胞存活率的影响（x±±s，n＝3）
Tab 2 Effects of Ibr and Ibr-7 combined with gemcitabine on survival rates of Capan-2 cells（x±±s，n＝3）

组别 细胞存活率，％ 组别 细胞存活率，％ 组别 细胞存活率，％
空白对照组 100.0±1.8 1 μmol/L Ibr单用组 82.3±5.4 ＊ 1 μmol/L Ibr-7单用组 78.2±0.8 ＊
0.062 5 μmol/L吉西他滨单用组 96.4±1.3 1 μmol/L Ibr+0.062 5μmol/L吉西他滨联用组 80.3±3.6 ＊# 1 μmol/L Ibr-7+0.062 5 μmol/L吉西他滨联用组 69.0±2.5 ＊＊##Δ
0.125 μmol/L吉西他滨单用组 88.4±2.8 ＊ 1 μmol/L Ibr+0.125 μmol/L吉西他滨联用组 73.3±1.4 ＊# 1 μmol/L Ibr-7+0.125 μmol/L吉西他滨联用组 56.5±0.6 ＊＊##ΔΔ
0.25 μmol/L吉西他滨单用组 58.9±4.4 ＊＊ 1 μmol/L Ibr+0.25 μmol/L吉西他滨联用组 45.1±2.6 ＊＊## 1 μmol/L Ibr-7+0.25 μmol/L吉西他滨联用组 32.0±3.9 ＊＊##ΔΔ
0.5 μmol/L吉西他滨单用组 39.8±2.1 ＊＊ 1 μmol/L Ibr+0.5 μmol/L吉西他滨联用组 31.6±1.3 ＊＊## 1 μmol/L Ibr-7+0.5 μmol/L吉西他滨联用组 18.4±2.5 ＊＊##ΔΔ
1 μmol/L吉西他滨单用组 28.1±1.4 ＊＊ 1 μmol/L Ibr +1 μmol/L吉西他滨联用组 24.0±0.2 ＊＊## 1 μmol/L Ibr-7+1 μmol/L吉西他滨联用组 14.5±1.1 ＊＊##ΔΔ
Δ
##
＊
＊＊
#
注：与空白对照组比较，P＜0.05， P＜0.01；与同剂量吉西他滨单用组比较，P＜0.05，P＜0.01；与 Ibr+同剂量吉西他滨联用组比较，P＜
ΔΔ
0.05，P＜0.01
#
＊
＊＊
##
Note：vs. blank control group， P＜0.05， P＜0.01；vs. same-dose gemcitabine alone group，P＜0.05，P＜0.01；vs. Ibr+same-dose gemcitabine
Δ
group，P＜0.05，P＜0.01
ΔΔ
表3 Ibr、Ibr-7与紫杉醇联用对Capan-2细胞存活率的影响（x±±s，n＝3）
Tab 3 Effects of Ibr and Ibr-7 combined with paclitaxel on survival rates of Capan-2 cells（x±±s，n＝3）
组别 细胞存活率，％ 组别 细胞存活率，％ 组别 细胞存活率，％
空白对照组 100.0±1.9 1 μmol/L Ibr单用组 85.2±3.0 ＊ 1 μmol/L Ibr-7单用组 78.7±4.3 ＊
0.062 5 μmol/L紫杉醇单用组 55.1±1.7 ＊＊ 1 μmol/L Ibr+0.062 5 μmol/L紫杉醇联用组 46.7±2.4 ＊＊## 1 μmol/L Ibr-7+0.062 5 μmol/L紫杉醇联用组 30.1±2.1 ＊＊##ΔΔ
0.125 μmol/L紫杉醇单用组 49.1±0.7 ＊＊ 1 μmol/L Ibr+0.125 μmol/L紫杉醇联用组 40.7±5.9 ＊＊## 1 μmol/L Ibr-7+0.125 μmol/L紫杉醇联用组 24.8±2.1 ＊＊##ΔΔ
0.25 μmol/L紫杉醇单用组 44.0±0.7 ＊＊ 1 μmol/L Ibr+0.25 μmol/L紫杉醇联用组 43.5±3.4 ＊＊## 1 μmol/L Ibr-7+0.25 μmol/L紫杉醇联用组 22.0±1.6 ＊＊##ΔΔ
0.5 μmol/L紫杉醇单用组 44.0±0.8 ＊＊ 1 μmol/L Ibr+0.5 μmol/L紫杉醇联用组 41.6±3.0 ＊＊## 1 μmol/L Ibr-7+0.5 μmol/L紫杉醇联用组 23.1±1.8 ＊＊##ΔΔ
1 μmol/L紫杉醇单用组 43.8±1.4 ＊＊ 1 μmol/L Ibr+1 μmol/L紫杉醇联用组 41.6±2.4 ＊＊## 1 μmol/L Ibr-7+1 μmol/L紫杉醇联用组 24.4±1.3 ＊＊##ΔΔ
ΔΔ
＊
注：与空白对照组比较，P＜0.05， P＜0.01；与同剂量紫杉醇单用组比较，P＜0.01；与Ibr+同剂量紫杉醇联用组比较，P＜0.01
＊＊
##
ΔΔ
＊
＊＊
##
Note：vs. blank control group， P＜0.05， P＜0.01；vs. same-dose paclitaxel alone group， P＜0.01；vs. Ibr+same-dose paclitaxel group， P＜
0.01
·502 · China Pharmacy 2019 Vol. 30 No. 4 中国药房 2019年第30卷第4期