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mg/mL），再精密加入新配制的硫酸-蒽酮溶液 6 mL，于 察。（2）提取时间：按质量比 1 ∶ 2 ∶ 1 的比例精密称取红
沸水浴中静置20 min后，取出，放至冷水中冷却至室温， 参、麦冬、五味子饮片5份，混合，以水为提取溶剂按料液
采用紫外-可见分光光度计于 625 nm 波长处测吸收度。 比 1 ∶ 8 提取 2 次，每次提取时间分别为 30、45、60、75、90
以葡萄糖质量浓度（x，mg/mL）为横坐标、吸收度（y）为 min，提取温度为80 ℃。提取液按“（1）”项下处理、测定
纵坐标进行线性回归，得回归方程为 y＝8.36x－0.042 并计算多糖提取率，结果见图1B。由图1B可知，生脉饮
（R ＝0.999 3），结果表明葡萄糖检测质量浓度线性范围 多糖提取率随着提取时间的延长而升高，当提取时间为
2
为0.021 0～0.094 5 mg/mL。
60 min后趋于平稳，故选择提取时间30、45、60 min进行
2.2.2 精密度试验 精密量取“2.1.1”项下葡萄糖对照
后续考察。（3）提取温度：按质量比1 ∶ 2 ∶ 1的比例精密称
品溶液 1.2 mL 至离心管中，加水至 2.0 mL，按“2.2.1”项
取红参、麦冬、五味子饮片5份，混合，以水为提取溶剂按
下方法处理并重复测定其吸收度6次。结果，葡萄糖吸
料液比 1 ∶ 8 提取 2 次，每次 45 min，提取温度分别为 60、
收度的RSD为1.25％（n＝6），表明仪器精密度良好。
70、80、90、100 ℃。提取液按“（1）”项下处理、测定并计
2.2.3 稳定性试验 精密量取“2.1.2”项下供试品溶液
算多糖提取率，结果见图1C。由图1C可知，生脉饮多糖
1.2 mL，加水至 2.0 mL，按“2.2.1”项下方法处理并于处
提取率随着温度的升高先升后降，故选择提取温度 70、
理后的 1、2、3、4、5、6 h 时测定其吸收度。结果，葡萄糖
吸收度的 RSD 为 1.35％（n＝6），表明供试品溶液在 6 h 80、90 ℃进行后续考察。（4）提取次数：按质量比 1 ∶ 2 ∶ 1
内稳定性良好。 的比例精密称取红参、麦冬、五味子饮片 5 份，混合，以
2.2.4 重复性试验 取各药材饮片适量，共 6 份，按 水为提取溶剂按料液比 1 ∶ 8分别提取1、2、3、4、5次，每
“2.1.2”项下方法制备供试品溶液，精密量取 1.2 mL，加 次 45 min，提取温度为 80 ℃。提取液按“（1）”项下处
水至2.0 mL，按“2.2.1”项下方法处理后测定其吸收度并 理、测定并计算多糖提取率，结果见图 1D。由图 1D 可
计算质量浓度。结果，葡萄糖质量浓度的RSD为1.83％ 知，生脉饮多糖提取率随着提取次数的增加而升高，当
（n＝6），表明本方法重复性良好。 提取次数为4次后趋于平稳，综合考虑试验效率后，最终
2.2.5 加样回收率试验 精密量取“2.1.2”项下已知质 选择提取次数1、2、3次进行后续考察。
量浓度的供试品溶液0.5 mL，共6份，分别加入葡萄糖对 7.0 8.5
照品溶液 0.5 mL，加水至 2.0 mL，按“2.2.1”项下方法处 ％ 6.0 ％ 7.5
6.5
理并测定其吸收度，计算加样回收率，结果见表1。 多糖提取率， 5.0 多糖提取率， 5.5
4.0
4.5
表1 加样回收率试验结果（n＝6） 3.0 3.5
2.5
Tab 1 Results of recovery tests（n＝6） 1∶4 1∶6 1∶8 1∶10 1∶12 20 30 40 50 60 70 80 90 100
料液比（g/mL） 时间，min
样品含量，mg 加入量，mg 测得量，mg 加样回收率，％ 平均加样回收率，％ RSD，％ A.料液比 B.提取时间
0.043 1 0.050 0 0.091 5 96.80 7.5 7.5
％ 6.5 ％ 6.5
0.043 1 0.050 0 0.089 4 92.60 5.5 5.5
0.043 1 0.050 0 0.088 5 90.80 多糖提取率， 4.5 多糖提取率， 4.5
0.043 1 0.050 0 0.090 2 94.20 93.70 2.10 3.5 3.5
0.043 1 0.050 0 0.091 1 96.00 2.5 2.5
50 60 70 80 90 100 0 1 2 3 4 5 6
0.043 1 0.050 0 0.089 0 91.80 温度，℃ 提取次数，次
2.3 生脉饮多糖提取率计算 C.提取温度 D.提取次数
图1 各因素对生脉饮多糖提取率的影响
取生脉饮多糖适量，按“2.2”项下方法测定含量后，
Fig 1 Effects of each factor on the extraction rate of
按如下公式计算多糖提取率：多糖提取率＝c1V1n/m×
polysaccharide
100％（式中，c1为葡萄糖质量浓度，V1为待测样品溶液体
积，n为稀释倍数，m为药材质量）。 2.4.2 正交试验 根据“2.4.1”项下单因素试验考察结
2.4 生脉饮多糖提取工艺筛选 果，以多糖提取率为评价指标，对料液比（A）、提取时间
2.4.1 单因素试验 （1）料液比：按质量比 1 ∶ 2 ∶ 1 的比 （B）、提取温度（C）、提取次数（D）这4个因素进行考察，
4
例精密称取红参、麦冬、五味子饮片5份，混合，以水为提 采用 L9 （3）正交试验优选多糖提取工艺，其因素与水平
取溶剂按料液比1 ∶ 4、1 ∶ 6、1 ∶ 8、1 ∶ 10、1 ∶ 12提取2次，每 见表2，试验设计与结果见表3，方差分析结果见表4。
次 45 min，提取温度为 80 ℃。提取液按“2.1.2”项下方 表2 因素与水平
法（从“提取液滤过后，合并”开始操作，下同）处理后，按 Tab 2 Factors and levels
“2.2”项下方法测定多糖含量，再按“2.3”项下方法计算 水平 因素
多糖提取率，结果见图 1A。由图 1A 可知，生脉饮多糖 A，g/mL B，min C，℃ D，次
1 1∶6 30 70 1
提取率随着水加入量的增加而升高，当料液比为1∶10后 2 1∶8 45 80 2
趋于平稳，故选择料液比 1 ∶ 6、1 ∶ 8、1 ∶ 10 进行后续考 3 1∶10 60 90 3

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