Page 59 - 2019年2月第30卷第4期

腹腔注射1％STZ溶液（30 mg/kg，以0.1 mol/L柠檬酸缓 表1 引物序列
冲液配制）以建立糖尿病模型。注射STZ溶液后第3、7、 Tab 1 Primer sequence
14、21 天时，称量大鼠体质量并检测随机血糖。当随机 基因 序列
[5]
血糖≥16.7 mmol/L则认为糖尿病模型建立成功 （自此 β-catenin 正向5′-CTGACCAAACTGCTAAATGACG-3′
反向5′-GTGGTGATGGCGTAGAACAGTA-3′
开始，模型组大鼠换用普通饲料进行喂养；同时为防止
GSK-3β 正向5′-CACCAACAAGGGAGCAAA-3′
大鼠死亡，当血糖≥25 mmol/L 时给予适量胰岛素控制 反向5′-GCGTGAGGAGGGATAAGG-3′
血糖）。取成功建立糖尿病模型的大鼠以10％水合氯醛 Rspo3 正向5′-CTCCAAACCTTTGCTGTCAGA-3′
溶液腹腔注射麻醉后，制作溃疡创面：采用钕铁硼磁铁 反向5′-CAGCGAGACAAGAACGTGTA-3′
β-actin 正向5′-TCTGAACCCTAAGGCCAACC-3′
在大鼠背部左右两侧压出直径为 1 cm 的圆形全层皮肤
反向5′-CAGAGGCATACAGGGACAACA-3′
组织缺失，可深至筋膜层，达到实验动物创面溃疡的慢 长速度略快；注射 STZ 后，空白组大鼠体质量仍稳步增
[5]
性损伤程度 即为DFU模型成功建立。
长，而模型组大鼠体质量未见明显增长甚至有所下降。
2.2.2 DFU 模型大鼠的创面干预治疗 取 DFU 模型大
鼠60只，随机分为A组（空白组，即生理盐水纱布组）、B 注射 STZ 前，与空白组比较，模型组大鼠的随机血糖水
平差异无统计学意义（P＞0.05）；注射STZ后，与空白组
组（凡士林纱布组）、C组（明胶海绵组）、D组（三七/白及
比较，模型组大鼠随机血糖水平显著升高，差异有统计
胶海绵组），每组15只。各组大鼠先分别以相应纱布/敷
学意义（P＜0.05）。造模过程中大鼠体质量变化见表2，
料覆盖创面后，再在上面覆盖无菌纱布，然后最外层以
绷带包扎，每 1～2 天换药一次。干预治疗后，大鼠单笼 血糖水平变化见表3（注：由于模型组大鼠在造模过程中
饲养，保持饲养环境通风良好、环境温度和湿度适宜，每 时有死亡，因此数量有不同程度的减少）。
日明暗交替各 12 h；给予纯净水、普通饲料喂养。密切 表2 造模过程中大鼠体质量变化（x±±s，g）
观察大鼠有无撕咬纱布/敷料等情况，并及时处理。 Tab 2 Changes of body weight of rats during mode-
2.3 大鼠创面愈合情况及组织病理学观察 ling（x±±s，g）
干预治疗后第 3、7 天时，肉眼观察各组大鼠的创面 时期 空白组（n＝10） 模型组（n＝62～70）
愈合情况，包括创面色泽、渗出、组织水肿程度等情况。 第1周 190.4±9.2 193.0±8.8
第2周 200.6±5.2 210.0±2.9
然后将带有网格的透明膜贴在大鼠创面处，采用扫描仪
第3周 214.8±2.8 227.6±2.1
扫描并以 Adobe Photoshop CS6 软件测算创面面积，计 第4周 227.2±8.9 241.2±7.4
算创面愈合率[愈合率＝（DFU 造模时创面面积－干预 第5周 240.0±9.5 263.8±6.1
第6周 255.0±10.2 278.2±10.3
治 疗 后 第 n 天 创 面 面 积）/DFU 造 模 时 创 面 面 积 ×
第7周 270.6±9.4 253.0±10.7 ＊
100％]。同时，每组取5只大鼠，采集创缘组织，在4％多 第8周 280.0±11.1 251.4±9.3 ＊
聚甲醛溶液中固定后，制作苏木精-伊红（HE）染色切片， 注：第 1 周为适应性饲养，第 2～5 周为模型组高糖高脂饲养，第
然后在显微镜下观察创面组织中炎细胞、毛细血管和肉 6～8周为注射STZ至干预治疗前；与空白组比较，P＜0.05
＊
芽组织等情况。 Note：adaptive feeding in the first week，high-glucose and high-lip-
2.4 大 鼠 创 面 组 织 中 β-catenin、GSK-3 β 、Rspo3 的 id diet for model group during the 2nd to 5th week，STZ injection during
＊
mRNA表达水平检测 the 6th to 8th week until intervention treatment；vs. blank group， P＜
干预治疗后第3、7天时，每组取5只大鼠，采集创面 0.05
边缘组织，迅速用生理盐水冲洗干净，滤纸吸干水分，放 表3 造模过程中大鼠血糖水平变化（x±±s，mmol/L）
入无菌无酶的 EP 管中，置入冰盒并于－80 ℃条件下保 Tab 3 Changes of glucose blood levels in rats during
存待测。采用RT-PCR法检测。首先按照试剂（盒）说明 modeling（x±±s，mmol/L）
书步骤提取组织总 RNA 并反转录成 cDNA，再以 cDNA 时期 空白组（n＝10） 模型组（n＝62～70）
STZ注射前 5.88±0.33 6.08±0.15
为模板进行PCR扩增（引物序列见表1）。扩增条件（反
注射STZ后第3天 6.10±0.43 28.20±2.56 ＊
应体系为 25 μL）：95 ℃预变性 15 min；95 ℃变性 10 s， 注射STZ后第7天 6.39±0.29 26.56±2.71 ＊
55 ℃退火 30 s，72 ℃延伸 32 s，40 个循环。PCR 产物用 注射STZ后第14天 6.25±0.28 27.88±2.01 ＊
1.0％琼脂糖凝胶进行电泳、染色、成像。 注：与空白组比较，P＜0.05
＊
2.5 统计学方法 Note：vs. blank group， P＜0.05
＊
采用SPSS 21.0软件对数据进行统计分析。计量资 3.2 各组DFU模型大鼠的创面愈合率
料以 x±s表示，多组间比较采用单因素方差分析，组间 干预治疗后第3、7天时，与A组（空白组）比较，其余
两两比较采用t检验。P＜0.05为差异有统计学意义。 各组大鼠创面愈合率均显著升高；与B组比较，C组和D
3 结果 组大鼠的创面愈合率均显著升高；与C组比较，D组大鼠
3.1 造模过程中大鼠体质量和血糖水平变化 的创面愈合率显著升高，以上差异均有统计学意义（P＜
注射 STZ 前，与空白组比较，模型组大鼠体质量增 0.05）。各组DFU模型大鼠的创面愈合率见表4。

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