Page 58 - 2019年2月第30卷第4期

the wound for intervention treatment，changing dressing once every 1-2 days. On the 3rd and 7th day after intervention，the wound
healing of rats in each group was observed with naked eyes，and the wound healing rate was calculated. The wound margin tissue
was collected to obtain HE staining section，and histopathological observation was conducted under microscope. mRNA expression
of β-catenin，GSK-3 β and Rspo3 in wound tissue were determined by RT-PCR. RESULTS：On the 3rd and 7th day after
intervention，compared with group A，B，C，healing rate of group D was increased significantly（P＜0.05）；inflammatory cell
infiltration，collagen deposition，capillary and granulation tissue growth in wound tissue increased significantly. The mRNA
expression levels of β-catenin and Rspo3 all increased，and those of GSK-3β all decreased；except for the difference of β-catenin at
the 3rd day and GSK-3β at the 7th day after intervention between group D and group C were not significant，the difference of other
indicators was statistically significant（P＜0.05）. CONCLUSIONS：P. notoginseng-B. striata gum sponge can effectively promote
the wound healing in DFU model rats，the mechanism of which may be associated with up-regulating the expression of β-catenin
and Rspo3 mRNA and down-regulating the expression of GSK-3β mRNA.
KEYWORDS Panax notoginseng-Bletilla striata gum sponge；Diabetic foot ulcer；Wound；Healing promotion；Wnt/β-catenin
pathway；Mechanism；Rat

糖尿病足溃疡（Diabetic foot ulcer，DFU）是糖尿病 1.2 药品与试剂
的严重并发症之一。据统计，约有12％～25％的糖尿病 明胶、白及胶、三七粉、甘油、戊二醇、25％戊二醇溶
患者可能在病程中出现足部溃疡，而因DFU导致的截肢 液（本院药剂科提供）；明胶海绵、凡士林纱布、生理盐水
率约比普通患者高出14倍，严重时可引发脓毒血症导致 纱布（本院设备科提供）；链脲佐菌素（STZ，美国 Sigma
患者死亡 。DFU 诊疗的关键在于及早给予干预治疗、 公司）；TRNzol 总 RNA 提取试剂、FastKing cDNA 第一
[1]
避免病情恶化，而在糖尿病早期促进DFU创面修复是目 链合成试剂盒、SuperReal 荧光定量预混试剂[天根生化
前临床上亟待解决的难题。 科技（北京）有限公司] ；0.1 mol/L柠檬酸钠缓冲液（西安
祖国医学采用生肌止血类药物治疗创面愈合性疾 市索欧实验器材销售公司）；本实验用水符合三级水
病的历史久远、疗效独特。《疮疡科纲要》中指出：“疮疡 标准。
[2]
为病，发见于外，外治药尤为重要”。临病辨证运用中 1.3 动物
药外敷于 DFU，可使药物直接作用于创面，在其周围形 健康 SD 大鼠 80 只，雌雄各半，体质量（200±20）g，
成平衡湿润的环境，可改善溃疡局部的血液循环，增加 购于西安交通大学实验动物中心，动物生产许可证号：
局部血供，加快机体代谢，促进肉芽组织生长和肌纤维 SCXK（陕）2012-002。动物在陕西中医药大学基础医学
组织增生，从而促进创面愈合。我院自制制剂三七/白及 院动物中心清洁级动物房进行饲养；标准饲料由河南天
胶海绵是一种新型的创面敷料，在前期临床实践中发 驰实验动物饲料有限公司提供，高糖高脂饲料由西安灏
现，该敷料能够促进早期 DFU 创面血管增生、使局部组 洋生物技术有限公司提供。
织血管内皮生长因子（VEGF）表达水平升高 ，但其具体 2 方法
[3]
作用机制和治疗靶点尚不明确。已有研究证实，Wnt/β- 2.1 三七/白及胶海绵的制备
连环素（β-catenin）信号通路在 DFU 的肉芽组织增生阶 取明胶3 g溶于装有100 mL纯水的烧杯中，在50 ℃
段起关键作用 。因此，本课题组通过观察 Wnt 信号通 水浴条件下使其充分溶解；加入白及胶1 g，置于磁力搅
[4]
路中β-catenin、糖原合成激酶3β（GSK-3β）、R-脊椎蛋白3 拌器上进行搅拌，使白及胶在明胶溶液中溶解混匀；再
（Rspo3）调控基因的表达来探讨三七/白及胶海绵治疗 依次加入三七粉1 g、甘油（保湿剂）3 mL、25％戊二醛溶
DFU的作用机制，为该敷料用于临床提供更可靠的理论 液（交联剂）4 mL，继续搅拌混匀。将溶液倒入金属冻干
依据。 圆盘（直径20 cm，高4 cm），放置待冷却，以保鲜膜覆盖，
1 材料 置于－20 ℃冰箱中预冻 24～36 h 后放入真空冷冻干燥
1.1 仪器 机中冷冻（≥48 h）。冷冻完毕后取出，裁剪成 1.0 cm×
BSA822 型电子天平[赛多利斯（中国）有限公司]； 1.0 cm大小，密封包装，以钴60射线辐照灭菌消毒即得。
DF-101型实验室恒温磁力加热搅拌器（巩义市科瑞仪器 2.2 分组、造模和干预治疗
有限公司）；稳豪型血糖测试仪（强生中国医疗器械有限 2.2.1 大鼠DFU模型建立 大鼠适应性喂养1周后，自
公司）；CM1950型冷冻切片机（德国LEICA公司）；R104 第2周开始实验。随机选取10只大鼠作为空白组；其余
型快速匀浆器（德国 IKA 公司）；QQMK-10 型干式恒温 70 只大鼠作为模型组，建立 DFU 模型。空白组大鼠给
器（上海启前电子科技有限公司）；qTOWER 2.2 型实时 予普通饲料喂养，模型组大鼠给予高糖高脂饲料喂养。
荧光定量聚合酶链式反应（RT-PCR）仪（德国 JENA 公 每周称量各组大鼠体质量，并于大鼠尾静脉采血检测大
司）；－80 ℃低温冰箱（美国 Thermo Fisher Scientific 公 鼠随机血糖。第5周起，除空白组大鼠一次性腹腔注射
司）；钕铁硼磁铁（上海健茨商贸有限公司）。 等体积0.1 mol/L柠檬酸钠缓冲液外，其余组大鼠一次性

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