Page 107 - 2019年1月第30卷第2期
P. 107

（B2 ）。正常基质效应＝B1/B2×100％。结果显示，氟康唑                    对照品溶液和内标工作液，进样分析，得峰面积（C1），
        的正常基质效应为92.7％～100.4％，内标的正常基质效                       在－4 ℃贮存 7 d 以及室温放置 8 h 后进样分析，得峰面
        应为（96.2±4.6）％，RSD均小于5％（n＝3），提示正常血                   积（C2 ）。结果，上述样品峰面积的偏差[（C2－C1 ）/C1]均
        浆的基质效应不影响待测物的测定，详见表2。                               在±5％范围内，提示其在上述条件下稳定性良好。
                      表2 基质效应试验结果                           2.10  稀释效应考察
                 Tab 2 Results of matrix effect tests           取“2.3.2”项下氟康唑质量浓度为 25 000 ng/mL 的

             理论质  正常血浆，％   溶血血浆，％         高脂血浆，％            质控血浆样品适量，用空白血浆稀释 10 倍，平行配制 6
        待测物 量浓度， 基质   RSD  基质  RSD 5％高脂血浆 10％高脂 15％高脂 RSD   份，按“2.3.3”项下方法处理后，再按“2.1”项下色谱与质
             ng/mL  效应 （n＝3）  效应 （n＝3） 基质效应  基质效应 基质效应（n＝9）
        氟康唑   30  95.9±3.2 3.3  97.9±4.0 4.1  93.7±1.2  89.2±2.9 87.8±2.3 2.5  谱条件进样分析，以随行标准曲线计算各样品的精密度
            3 750  97.6±2.8 2.9  100.1±3.7 3.7  95.1±4.3  92.2±3.5 88.7±5.1 4.6  与准确度。结果显示，经稀释后血浆样品的日内、日间
        内标  1 000  96.2±4.6 4.8  101.7±3.9 3.8  92.9±3.5  90.5±3.1 85.8±6.3 4.8
                                                            RSD 及准确度分别为 6.5％、7.7％、96.1％，符合生物样
        2.8.2  溶血基质效应        取冻存全血样品适量，加至空白
                                                            品定量分析的相关要求 ，提示稀释效应不会影响待测
                                                                                [13]
        血浆中，混匀，得5％（V/V）溶血血浆，按“2.3.3”项下方法
                                                            物的测定。
        处理，制得溶血基质，以该溶血基质为溶剂，平行配制氟
                                                            2.11  残留效应考察
        康唑低、高质量浓度（30、3 750 ng/mL）的溶血基质质控
                                                                在测定最高质量浓度（5 000 ng/mL）标准曲线血浆
        样品各3份，进样分析，得峰面积（B3 ）。以乙腈为溶剂配
                                                            样品后，同法测定空白血浆样品以考察方法的残留效
        制相应质量浓度（30、3 750 ng/mL）的氟康唑对照品溶
                                                            应。结果显示，在待测物及内标对应的保留时间处，空
        液，进样分析，得峰面积（B2 ）。溶血基质效应＝B3/B2×
                                                            白血浆样品相应色谱峰峰面积与定量下限质量浓度（10
        100％。结果显示，氟康唑的溶血基质效应为 93.9％～
                                                            ng/mL）血浆样品相应色谱峰峰面积的比值小于 1％，视
        103.8％，内标的溶血基质效应为（101.7±3.9）％，RSD
                                                            为基线平齐 ，表明残留效应不影响后续血浆样品的
                                                                       [13]
        均小于5％（n＝3），提示5％溶血血浆的基质效应不影响
                                                            测定。
        待测物的测定，详见表2。
        2.8.3  高脂基质效应        取20％脂肪乳注射液各适量，分                3 讨论
        别加至空白血浆中，混匀，得 5％、10％、15％（V/V）高脂                     3.1  内标的选择
        血浆，按“2.3.3”项下方法处理，制得高脂基质，以该高脂                           本研究采用氟康唑的氘代同位素氟康唑-d4作为内
        基质为溶剂，平行配制氟康唑低、高质量浓度（30、3 750                       标，其与氟康唑具有相同的色谱保留时间、相似的提取
        ng/mL）的高脂基质质控样品各 3 份，进样分析，得峰面                       回收率和离子化效率，与其他内标相比，能最大程度地
                                                                                               [12]
        积（B4）。以乙腈为溶剂配制相应质量浓度（30、3 750                       避免或减少其他物质及基质效应的干扰 ，有助于提高
        ng/mL）的氟康唑对照品溶液，进样分析，得峰面积                           分析方法的准确度与精密度。
        （B2 ）。高脂基质效应＝B4/B2×100％。结果显示，氟康唑                    3.2  前处理方法及色谱、质谱条件优化
        在 5％ 、10％ 、15％ 高 脂 血 浆 中 的 基 质 效 应 分 别 为                本法进样量少（3 μL），且分析时间短（3.1 min），优

        90.8％～99.4％、86.3％～95.7％、83.6％～93.8％，内标              于现有文献报道        [7-10] ，能满足临床大样本同时检测的需
        的高脂基质效应分别为（92.9±3.5）％、（90.5±3.1）％、                  求。与液-液萃取法或固相萃取法比较，本法所采用的
        （85.8±6.3）％，RSD均小于5％（n＝9），提示高脂血浆的                   乙腈沉淀蛋白前处理方法具有简便易行、操作快速的特
                                                                                 [14]
        基质效应不影响待测物的测定，详见表2。                                 点，可显著提高分析效率 。
        2.9 稳定性试验                                               在色谱条件优化方面，本课题组前期考察了乙腈、
            取“2.3.2”项下氟康唑低、高质量浓度（30、3 750                   0.1％甲酸溶液-甲醇、水-乙腈等流动相体系的分离效
                                                                                 +
        ng/mL）质控血浆样品各 6 份，按“2.3.2”项下方法处理                    果。有研究指出，在 ESI 检测模式下，在水相中加入酸
        后，再按“2.1”项下色谱与质谱条件进样分析，分别考察                         性溶剂，可有助于增强化合物的离子化效率，提高检测
        其冻融 3 次（－80 ℃～25 ℃）、－80 ℃冻存 7 d、－20 ℃               灵敏度，并有助于改善色谱峰峰形               [15-16] 。前期预试验结
        冻存 7 d、室温放置 8 h 的稳定性。结果显示，各样品实                      果也显示，以 0.1％甲酸溶液-乙腈为流动相进行梯度洗
        测质量浓度与理论质量浓度的偏差均在±15％范围内，                           脱时，可获得良好的峰形及较快的分析速度，故最终以
        提示其在上述条件下稳定性良好。另按“2.2.2”“2.2.3”                     此作为色谱流动相。
        项下方法分别配制质量浓度均为 1.0 μg/mL 的氟康唑                           在质谱条件优化方面，本课题组前期分别考察了氟


        ·238  ·  China Pharmacy 2019 Vol. 30 No. 2                                   中国药房    2019年第30卷第2期
   102   103   104   105   106   107   108   109   110   111   112