Page 106 - 2019年1月第30卷第2期

2.2.3 内标贮备液和内标工作溶液 取内标对照品 2 各适量，按“2.3.3”项下方法处理后，再按“2.1”项下色谱
mg，精密称定，用 DMSO 溶解并稀释，配制成质量浓度 与质谱条件进样分析，记录峰面积。以待测物质量浓度
为 1.0 mg/mL 的内标贮备液。取上述内标贮备液适量， （x，ng/mL）为横坐标、待测物与内标的峰面积比值（y）为
2
用 50％乙腈稀释，配制成质量浓度为 1 000 ng/mL 的内 纵坐标，采用加权最小二乘法（权重系数ω＝1/x）进行线
标工作溶液。 性回归，得回归方程为 y＝5.11×10 x+1.82×10 （r＝
－3
－4
2.3 血浆样品的制备及处理 0.998 1）。结果表明，氟康唑血药浓度检测的线性范
2.3.1 标准曲线血浆样品的制备 取空白血浆190 μL， 围为 10～5 000 ng/mL，定量下限为10 ng/mL。
置于1.5 mL离心管中，精密加入“2.2.2”项下标准曲线工 2.6 准确度与精密度试验
作溶液各10 μL，配制成质量浓度分别为10、20、50、150、 取“2.5”项下氟康唑定量下限质量浓度（10 ng/mL）
500、1 500、4 000、5 000 ng/mL的标准曲线血浆样品。 血浆样品以及“2.3.2”项下低、中、高质量浓度（30、2 000、
2.3.2 质控血浆样品的制备 取空白血浆190 μL，精密 3 750 ng/mL）质控血浆样品各 6 份，按“2.3.3”项下方法
加入“2.2.2”项下质控工作溶液各 10 μL，配制成质量浓 处理后，再按“2.1”项下色谱与质谱条件进样分析，考察
度依次为10、30、375、2 000、3 750、25 000 ng/mL的质控 日内精密度；连续测定3 d，考察日间精密度。将实测质
血浆样品。 量浓度与理论质量浓度进行比较，考察准确度。结果显
2.3.3 待测血浆样品的处理 精密吸取待测血浆样品 示，各质控血浆样品日内、日间RSD均低于8％，准确度
及内标工作溶液各 30 μL，加入乙腈 180 μL，以 2 000 为 95.8％～106.7％，符合生物样品定量分析的相关要
r/min 涡旋 5 min 沉淀蛋白后，以 12 000 r/min 高速离心 求 ，详见表1。
[13]
10 min，取上清液 30 μL，加入 50％乙腈 270 μL，混匀， 表1 准确度与精密度试验结果
备测。 Tab 1 Results of accuracy and precision tests
2.4 专属性考察 理论质量浓度， 精密度，％ 准确度（x±s，n＝6），
取6个不同来源的空白血浆及质量浓度为10 ng/mL ng/mL 日内（n＝6） 日间（n＝18） ％
10 5.7 7.4 98.9±3.1
的质控血浆样品，按“2.3.3”项下方法处理后，再按“2.1” 30 3.2 5.2 104.2±2.5
项下色谱与质谱条件进样分析，记录色谱图。结果显 2 000 1.8 2.5 97.4±1.5
3 750 2.8 3.0 99.5±2.2
示，不同来源空白血浆中的内源性物质均不影响待测物
2.7 提取回收率试验
及内标的测定，两者的保留时间约为2.0 min，详见图2。
取“2.3.2”项下氟康唑低、中、高质量浓度（30、2 000、
1
40 400
3 750 ng/mL）质控血浆样品各 6 份，按“2.3.3”项下方法
cps 30 cps 300 处理后，进样分析，得峰面积（A1 ）。取空白血浆适量，按
intensity， 20 intensity， 200 “2.3.3”项下方法处理，制得空白基质，以该空白基质为

10
100
溶剂，平行配制基质质控样品各6份，使最终质量浓度与
0 0
1.0 2.0 1.0 2.0 前者对应，进样分析，得峰面积（A2）。提取回收率＝
t，min t，min
2
150 A1/A2×100％。结果显示，低、中、高质量浓度质控血浆样
4.0×10 4
品的提取回收率分别为（102.1±1.3）％、（99.7±2.4）％、
cps 100 cps 3.0×10 4
intensity， 50 intensity， 2.0×10 4 4 （104.5±2.8）％（结果范围为 97.3％～107.3％），RSD 分
别 为 1.3％ 、2.4％ 、2.7％（n＝6）；内 标 提 取 回 收 率 为
1.0×10
0 0 （96.8±4.2）％，RSD为4.3％（n＝6），符合生物样品定量
1.0 2.0 1.0 2.0
[13]
t，min t，min 分析的相关要求 。
A.空白血浆 B.血浆样品（10 ng/mL）
2.8 基质效应
注：1.氟康唑；2.内标 2.8.1 正常基质效应 取 6 个不同来源的空白血浆适
Note：1. fluconazole；2. internal standard
图2 典型MRM图 量，按“2.3.3”项下方法处理，制得空白基质，以该空白基
Fig 2 Typical MRM chromatograms 质为溶剂，平行配制氟康唑低、高质量浓度（30、3 750
2.5 标准曲线的绘制与定量下限的考察 ng/mL）的基质质控样品各 3 份，进样分析，得峰面积
取“2.3.1”项下氟康唑质量浓度分别为 10、20、50、 （B1）。以乙腈为溶剂配制相应质量浓度（30、3 750
150、500、1 500、4 000、5 000 ng/mL的标准曲线血浆样品 ng/mL）的氟康唑对照品溶液，进样分析，得峰面积

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