Page 103 - 2019年1月第30卷第2期

表2 10批样品HPLC图谱共有峰相对保留时间 在225、235 、254 nm波长处吸收较强。采用多波长进样
Tab 2 Relative retention time of common peaks in 分析，结果在235 nm波长下所得基线较稳定、色谱峰较
HPLC fingerprints of 10 batches of samples 多、信息丰富，故选择235 nm为检测波长。
峰号 S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 RSD，％ 3.2 提取方法的选择
1 0.151 0.150 0.152 0.153 0.152 0.150 0.152 0.150 0.152 0.151 0.152 以甲醇为提取溶剂，分别考察超声提取、回流提取、
2 0.280 0.281 0.283 0.282 0.284 0.282 0.283 0.282 0.283 0.281 0.131
3 0.345 0.343 0.342 0.341 0.346 0.343 0.340 0.341 0.342 0.341 0.071 浸渍提取这3种提取方法。分别进样后，从色谱图信息
4 0.370 0.371 0.372 0.370 0.372 0.370 0.371 0.372 0.373 0.371 0.111 分析，3 种提取法制备的供试品溶液图谱信息未见明显
5 0.410 0.412 0.413 0.411 0.412 0.411 0.413 0.414 0.413 0.410 0.137 差异。综合考虑，选定操作更简便的超声提取方法来制
6 0.498 0.499 0.497 0.499 0.499 0.498 0.488 0.489 0.497 0.497 0.428
7 0.660 0.661 0.660 0.661 0.662 0.661 0.660 0.662 0.661 0.660 0.707 备供试品溶液。
8 0.768 0.769 0.768 0.767 0.768 0.769 0.767 0.769 0.769 0.767 0.894 3.3 流动相的选择
9 0.916 0.917 0.918 0.919 0.918 0.916 0.917 0.915 0.918 0.914 0.235 在对供试品溶液进行 HPLC 分析时，本课题组分别
10 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 0.000
11 1.266 1.265 1.265 1.264 1.266 1.265 1.267 1.266 1.265 1.264 0.654 考察了甲醇-水、乙腈-水、甲醇-磷酸溶液、乙腈-磷酸溶
12 1.332 1.331 1.332 1.333 1.332 1.331 1.332 1.333 1.332 1.331 0.957 液等流动相体系对色谱分离过程的影响 [3-6] 。结果显示，
表3 10批样品HPLC图谱共有峰相对保留峰面积 乙腈-0.20％磷酸溶液的分离度高，峰形对称，基线稳定。
Tab 3 Relative peak area of common peaks in HPLC 3.4 梯度洗脱的时间确定
fingerprints of 10 batches of samples 以乙腈-0.20％磷酸溶液为流动相进行梯度洗脱，分
[7]
峰号 S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 RSD，％ 别考察了样品在40、50、60、70 min洗脱时间的色谱图 。
1 0.115 0.150 0.153 0.151 0.154 0.156 0.155 0.154 0.152 0.153 0.262 结果显示，45 min后图谱基线稳定，无其他峰出现，故选
2 0.941 0.942 0.944 0.946 0.947 0.945 0.943 0.942 0.944 0.946 0.222 择梯度洗脱时间为45 min为宜。
3 0.276 0.274 0.277 0.275 0.276 0.274 0.275 0.274 0.275 0.276 0.212
4 0.964 0.966 0.965 0.966 0.967 0.968 0.965 0.963 0.965 0.964 0.577 3.5 产地的选择
5 0.187 0.185 0.183 0.184 0.188 0.182 0.184 0.185 0.186 0.184 0.153 通过查询全国中草药资源普查信息和课题组成员
6 2.410 2.412 2.415 2.416 2.412 2.413 2.415 2.416 2.417 2.414 0.134
7 0.501 0.503 0.504 0.505 0.501 0.503 0.504 0.505 0.504 0.502 0.126 到贵州各地区药材采集信息情况，发现对坐叶药材主要
8 0.521 0.522 0.524 0.523 0.525 0.521 0.524 0.523 0.522 0.526 0.154 分布在贵州安顺、黔东南州、黔南州、铜仁地区。由于药
9 1.612 1.611 1.613 1.614 1.612 1.615 1.614 1.613 1.612 1.616 0.100 材生长受环境、气候、地理条件等影响，以及指纹图谱研
10 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 0.000 究要求样本应在10批次以上，所以本试验研究采集样品
11 0.112 0.113 0.114 0.113 0.112 0.114 0.113 0.111 0.112 0.113 0.141
12 0.124 0.125 0.126 0.125 0.126 0.123 0.124 0.126 0.125 0.123 0.130 10批，其中有2批是在同一个县不同乡镇采集。
表4 10批样品相似度评价结果 3.6 参照峰的选择
Tab 4 Results of similarity evaluation for 10 batches 对坐叶药材主要成分为黄酮类 [8-10] ，而黄酮类主要
of samples 包括槲皮素、熊果酸、木犀草素、芦丁。通过色谱定位，

编号 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 相似度 14号峰为芦丁，其峰面积大，且为所有药材样品共有，故
S1 0.959 0.984 0.955 0.956 0.915 0.915 0.999 0.958 0.956 0.998 确定其为参照峰。
S2 1 0.965 0.955 0.956 0.914 0.915 0.999 0.964 0.956 0.998 3.7 指纹图谱分析
S3 0.958 1 0.957 0.958 0.913 0.913 0.998 0.987 0.958 0.998
S4 0.955 0.957 1 0.967 0.902 0.903 0.955 0.957 0.999 0.952 通过建立该指纹图谱，对10批对坐叶药材HPLC图
S5 0.956 0.958 0.962 1 0.782 0.921 0.956 0.958 0.999 0.953 谱进行比较，结果发现药材HPLC图谱的共有峰保留时
S6 0.914 0.913 0.954 0.782 1 0.999 0.913 0.913 0.782 0.929 间、相对峰面积非常吻合，与共有模式R比较，相似度均
S7 0.915 0.913 0.781 0.783 0.999 1 0.915 0.913 0.783 0.931
S8 0.999 0.998 0.955 0.956 0.913 0.915 1 0.998 0.955 0.998 大于 0.90。从各峰面积大小来看，峰面积有很大的差
S9 0.988 0.984 0.957 0.958 0.913 0.913 0.998 1 0.958 0.998 异，可能与药材生长环境有关。从共有峰可以确定10批
S10 0.956 0.958 0.999 0.999 0.782 0.783 0.955 0.958 1 0.953
对坐叶药材有效成分具有一致性。
2.4.3 HPLC 指纹图谱相关分析 采用《中药色谱指纹
综上，本研究所建 HPLC 指纹图谱可为对坐叶药材
图谱相似度评价系统》（2004A 版），对 10 批药材样品的
的鉴别和质量评价提供参考。
HPLC指纹图谱进行比较分析。结果显示，10批药材样 参考文献
品有12个共有峰，其中14号峰（芦丁）峰面积大，且为所
[ 1 ] 贵州省食品药品监督管理局.贵州省中药材、民族药材质
有药材样品共有，确定其为参照峰。
量标准：2003年版[S].贵阳：贵州科技出版社，2003：149.
3 讨论 [ 2 ] 周建良，齐炼文，李萍.色谱指纹图谱在中药质量控制中
3.1 检测波长的选择 的应用[J].色谱，2008，26（2）：153-159.
采用HPLC仪的二极管阵列检测器在200～400 nm [ 3 ] 冯华，邓丽娟，吴林菁，等.酢浆草高效液相色谱指纹图谱
波长范围内进行扫描，以确定样品的吸收波长。结果， 的鉴别研究[J].时珍国医国药，2014，25（10）：2414-2416.

·234 · China Pharmacy 2019 Vol. 30 No. 2 中国药房 2019年第30卷第2期