Page 58 - 《中国药房》2026年9期

membrane remodeling.
KEYWORDS Yigan huayu formula； liver fibrosis； proteomics； ECM-receptor interaction； biological mechanism

肝纤维化是肝脏在慢性损伤刺激下，细胞外基质 四氯化碳（CCl4 ）、橄榄油购自上海麦克林生化科技
（extracellular matrix，ECM）过度沉积的病理修复反应， 股份有限公司；羟脯氨酸（hydroxyproline，HYP）试剂盒、
常继发于病毒性肝炎、酒精性肝病、非酒精性脂肪性肝 辣根过氧化物酶（HRP）标记的山羊抗鼠免疫球蛋白 G
[1]
病等慢性肝病，是肝硬化甚至肝癌发生的关键环节 。 （IgG）二抗、HRP标记的山羊抗兔IgG二抗、ECL化学发
我国肝纤维化的患病率约为 2.85%，已成为重要的公共 光 超 敏 显 色 试 剂 盒（批 号 分 别 为 MPC2503061、
卫生负担 [2―3] 。因此，探寻肝纤维化的有效防治策略、揭 AC2504239020、AC2506211138、2511F002）均购自武汉
示其干预机制具有重要意义。 赛维尔生物科技有限公司；丙氨酸氨基转移酶（alanine
目前西医对肝纤维化的治疗手段有限，而中医药具 aminotransferase，ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（aspartate
有多成分、多靶点、多通路协同作用，在延缓甚至逆转肝 aminotransferase，AST）生 化 试 剂 盒（批 号 分 别 为
纤维化方面展现出独特优势。益肝化瘀方为北京中医 20250326、20250506）均购自深圳雷杜生命科学有限公
药大学深圳医院（龙岗）抗肝纤维化治疗的医疗机构制 司；鼠源甘油醛-3-磷酸脱氢酶（glyceraldehyde-3-phos‐
剂，由广东省名中医胡世平教授经多年临床实践创制。 phate dehydrogenase，GAPDH）抗体、兔源玻连蛋白（vit‐
该方由经典名方四君子汤合逍遥散化裁而来，由黄芪、 ronectin，VTN）抗体（批号分别为 10049290、10025607）
党参、白术、茯苓、丹参、鳖甲等多味药材组成，具有运脾 均购自武汉三鹰生物技术有限公司；兔源β-类微管蛋白
疏肝、利湿化瘀之功效，临床应用广泛。本课题组在前 （β-tubulin）抗体、兔源Ⅳ型胶原 α1 链（collagen type Ⅳ
期临床研究中已证实，该方可降低患者肝脏硬度值，改 alpha1 chain，COL4A1）抗体、兔源富含半胱氨酸的酸性
[4]
善患者胁痛、乏力等症状，治疗总有效率达 90% 。然 分 泌 蛋 白（secreted protein acidic and rich in cysteine，
而，其发挥疗效的具体分子机制尚未完全阐明。 SPARC）抗体（批号分别为 11、1、2）均购自美国 Cell
蛋白质组学技术能够系统揭示疾病或药物干预下 Signaling Technology 公 司 ；兔 源 层 粘 连 蛋 白 亚 基 α5
蛋白质表达的动态变化 。因此，本研究拟通过建立肝 （laminin subunit alpha5，LAMA5）抗体（批号 L780609P）
[5]
纤维化小鼠模型，结合蛋白质组学技术，系统分析益肝 购自湖南远泰生物技术有限公司。
化瘀方干预后小鼠肝脏蛋白质表达谱的变化，从蛋白调 1.3 实验动物
控层面深入揭示该方抗肝纤维化的作用机制，为该方的 本研究所用动物为 6 周龄 SPF 级雄性 C57BL/6J 小
临床应用提供更充分的实验依据。 鼠，体重 18～22 g，购于广州维通利华实验技术有限公
1 材料 司，实验动物生产许可证号为SCXK（粤）2022-0063。动
1.1 主要仪器与软件 物饲养于深圳市众循精准医学研究院，实验动物使用许
本研究所用的主要仪器与软件有：Chemray 240 型 可证号为SYXK（粤）2025-0380，饲养环境符合SPF级实
全自动生化仪（深圳雷杜生命科学股份有限公司），Epoch 验室标准。本研究通过深圳市众循精准医学研究院的
型酶标仪（美国Bio-Tek公司），Vanquish Neo型色谱分离 伦理审批（批号为AP-SZZX-2025-07-004）。
系统、Astral型高分辨质谱仪（美国Thermo Fisher Scien‐ 2 方法
tific 公 司），DIA-NN 软 件 、DYY-6C 型 电 泳 仪 、Mini- 2.1 药液制备
PROTEAN Tetra Cell 型小型垂直电泳槽（美国 Bio-Rad 按益肝化瘀方组成（黄芪、党参、白术、茯苓、泽泻、
公司）。 苍术、当归、丹参、赤芍、醋鳖甲、醋莪术、醋香附、白芍、叶
1.2 主要药品与试剂 下珠各10 g，北柴胡、陈皮、醋青皮各6 g，垂盆草15 g）称
生药饮片黄芪、党参、北柴胡、当归（产地均为甘肃， 取相应饮片，加10倍量纯水煎煮1 h，过滤，取药液；药渣
批号分别为 20250905、J2508236、25090227、251209），白 再次加8倍量纯水煎煮30 min，过滤。合并2次煎煮所得
术、青皮（产地均为浙江，批号分别为2508018、251113）， 药液，用旋转蒸发仪于 60 ℃条件下浓缩成生药质量浓
茯苓（产地云南，批号 250903J1），泽泻（产地四川，批号 度为2.88 g/mL的药液，分装后于4 ℃冰箱中保存备用。
J25110229），苍术、赤芍（产地均为内蒙古，批号分别为 2.2 实验动物分组、造模与给药
250701H2、C2625112），丹参（产地山西，批号A241114）， 将32只小鼠适应性饲养1周后，按随机数字表法分
醋鳖甲（产地湖北，批号 251113），醋莪术（产地广西，批 为空白组、模型组和益肝化瘀方低、高剂量组，每组8只。
号A250614），陈皮（产地广东，批号250704），香附（产地 除空白组小鼠腹腔注射等体积橄榄油外，其余各组小鼠
海南，批号2505223），白芍（产地安徽，批号B4125911），叶 均腹腔注射 15%CCl₄橄榄油溶液（5 mL/kg），每周 2 次，
下 珠、垂盆草（产地均为湖南，批号分别为 A240823、 连续 6 周，以建立肝纤维化模型 。造模成功判定标准
[6]
251013）均购自北京中医药大学深圳医院（龙岗）中 为：小鼠一般情况欠佳，血清 AST、ALT 水平显著升高，
药房。 肝组织病理学检查可见明显炎症细胞浸润及胶原纤维

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