Page 80 - 《中国药房》2026年5期
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metabolic pathways 2.1.3 实验动物与细胞
pathways in cancer
MAPK signaling pathway
PI3K-Akt signaling pathway 本研究选用 SPF 级健康雄性昆明小鼠，共 50 只，鼠
pathways of neurodegeneration-multiple diseases
neuroactive ligand-receptor interaction 龄 4～6 周，体重（20±2）g，小鼠均购自广东省医学实验
lipid and atherosclerosis
proteoglycans in cancer －lgP
Alzheimer disease 动物中心，动物生产许可证号为 SCXK（粤）2022-0002。
microRNAs in cancer
chemical carcinogenesis-reactive oxygen species 30
hepatitis B 所有小鼠饲养于深圳市药品检验研究院动物实验室，饲
chemical carcinogenesis-receptor activation 20
calcium signaling pathway 10
Ras signaling pathway 养条件控制为温度 20～24 ℃、相对湿度 50%～60%、12
human papillomavirus infection
human cytomegalovirus infection 数量 h 光照/黑暗循环。本实验方案经北京中医药大学深圳
kaposi sarcoma-associated herpesvirus infection 75
human T-cell leukemia virus l infection
Rapl signaling pathway 100 医院（龙岗）实验动物伦理委员会批准（批准号为 KY-
viral carcinogenesis 125
human immunodeficiency virus I infection 150
focal adhesion 2023-047）。
fluid shear stress and atherosclerosis
cAMP signaling pathway
chemokine signaling pathway 小鼠肝癌细胞 H22 购自广州剪刀手基因科技有限
Epstein-Barr virus infection
apoptosis 公司。
yersinia infection
shigellosis
10 15 20 2.2 方法
基因比例 2.2.1 造模、分组与给药
图1 KEGG富集分析图
选取处于指数生长期的H22细胞，将细胞密度标准
2 动物实验验证柴芪益肝颗粒改善 HCC 的作用 化为1×10 个/mL，制备成细胞悬液。随后，采用皮下注
7
机制 射法在50只小鼠左腋下接种H22细胞悬液，每只小鼠注
2.1 材料 射剂量为0.2 mL，以构建肝癌移植瘤小鼠模型。接种后
2.1.1 主要仪器 5～7 d，若在小鼠左腋下检测到黄豆粒大小的结节，即确
FDE30086FV-ULTS型超低温冰箱、Multiskan FC型 认模型复制成功。本次实验中，50只小鼠的造模成功率
酶标仪购自美国Thermo Fisher Scientific公司，5430R型 为100%。
高 速 冷 冻 离 心 机 购 自 德 国 Eppendorf 公 司 ，iBright 采用随机数字表法将造模成功的小鼠分为 5 组，分
FL1500型蛋白组学分子成像系统购自美国Invitrogen公 别为模型组、索拉非尼组（50 mg/kg，阳性对照，该剂量基
司，Bullet Blender Storm Pro 型快速高效组织细胞破碎 于临床等效剂量换算）和柴芪益肝颗粒低、中、高剂量组
仪购自北京百晶生物技术有限公司，Milli-Q Direct Q5 （24.83、49.66、99.32 g/kg，其中低剂量为临床等效剂量），
型超纯水系统购自法国Millipore公司。 每组 10 只。各给药组小鼠灌胃相应药液，灌胃量为 1.0
2.1.2 主要药品与试剂 mL/g，模型组小鼠灌胃等体积生理盐水，每天1次，连续
柴芪益肝颗粒购自北京中医药大学深圳医院（龙 14 d。
岗）中药房；1640培养基、青霉素-链霉素双抗、磷酸盐缓 2.2.2 小鼠肿瘤组织病理学形态观察
冲 液（PBS）（批 号 分 别 为 C11875500BT、15140-122、 末次给药24 h后，各组小鼠禁食不禁水，以1%戊巴
C10010500BT）购自美国 Gibco 公司；胎牛血清（批号 比妥钠溶液（50 mg/kg）腹腔注射麻醉，无菌剥离腋下肿
F7524）购 自 美 国 Sigma 公 司 ；兔 源 N- 钙 黏 蛋 白（N- 瘤组织并保存备用。取适量肿瘤组织经4%多聚甲醛固
cadherin）、E-钙黏蛋白（E-cadherin）、波形蛋白（Vimen‐ 定、梯度乙醇脱水、二甲苯透明后进行石蜡包埋、切片；
tin）、基 质 金 属 蛋 白 酶 7（matrix metalloproteinase 7， 取部分切片经脱蜡复水、HE 染色、中性树胶封片后，置
MMP7）、p38 MAPK、磷酸化 p38 MAPK（phosphorylated 于光学显微镜下观察肿瘤组织病理学形态并采集典型
p38 MAPK，p-p38 MAPK）、细胞核增殖抗原Ki-67、细胞 视野图像。
外 调 节 蛋 白 激 酶 1/2（extracellular signal‑regulated ki‐ 2.2.3 小鼠肿瘤组织中Ki-67蛋白表达检测
nases 1/2，ERK1/2）、磷 酸 化 ERK1/2（phosphorylated 取“2.2.2”项下切片（每组取3只小鼠的切片）置于二
ERK1/2，p-ERK1/2）、c-Jun 氨 基 末 端 激 酶（c-Jun N- 甲苯中脱蜡，再进行梯度乙醇脱水；经抗原修复后，以
terminal kinase，JNK）、磷酸化 JNK（p-JNK）、GAPDH 抗 10% 山羊血清封闭，室温孵育 15 min；滴加 Ki-67 一抗，
体和辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔免疫球蛋白G（批 于 4 ℃孵育过夜；以 PBS 洗涤后加入相应二抗，室温孵
号分别为 22018-1-AP、20874-1-AP、10366-1-AP、10374- 育 2 h；以 PBS 洗涤后加入链霉亲和素-过氧化物酶复合
2-AP、14064-1-AP、28796-1-AP、27309-1-AP、11257-1- 物于 37 ℃孵育 30 min，再滴加 DAB 显色液孵育 8 min；
AP、80031-1-RR、66210-1-Ig、80024-1-RR、10494-1-AP、 以 PBS 洗涤后加入苏木素染液复染 1 min，自来水冲洗
SA00001-2）均购自美国 Proteintech 公司；苏木素-伊红 后，以盐酸乙醇分化30 s，再进行梯度乙醇脱水；最后用
（HE）试剂盒（批号 G1076）购自武汉赛维尔生物科技有 中性树脂胶封片，置于显微镜下观察阳性表达（呈棕色）
限公司；索拉非尼（批号 S5080）购自北京索莱宝科技有 并采集图像，采用 Image J 软件对阳性面积占比进行定
限公司。 量分析，阳性面积占比越高，Ki-67蛋白表达水平越高。
· 622 · China Pharmacy 2026 Vol. 37 No. 5 中国药房 2026年第37卷第5期
