Page 45 - 《中国药房》2026年5期
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京索莱宝科技有限公司；鼠源动力相关蛋白1（dynamin-                      2.1.3 小鼠海马组织中氧化应激指标检测
          related protein 1，Drp1）抗体（批号9023580）购自美国BD             Morris 水迷宫实验结束后，各组小鼠经麻醉后处
          公司；兔源磷酸化 Drp1（phospho-Drp1，p-Drp1）抗体（批             死，迅速分离海马组织，保存于－80 ℃超低温冰箱，用于
          号4867s）购自美国CST公司；兔源β-肌动蛋白（β-actin）                 后续检测。取6只小鼠海马组织适量，加入预冷的生理
          抗体、辣根过氧化物酶（HRP）标记的山羊抗兔免疫球蛋                         盐水研磨制成匀浆，将匀浆置于 4 ℃条件下以 5 000
          白 G 二抗、HRP 标记的山羊抗鼠免疫球蛋白 G 二抗（批                     r/min 离心 10 min，收集上清液。取上清液适量，根据相
          号分别为 10074508、SA00001-2、SA00001-1）均购自武             应试剂盒说明书方法检测小鼠海马组织中MDA、SOD、
          汉三鹰生物技术有限公司 ；PKA 抑制剂 H89（批号                        GSH水平（分别采用硫代巴比妥酸法、黄嘌呤氧化法、二
          HY15974202403，纯度≥99%）购自美国MCE公司。                    硫代二硝基苯甲酸进行比色法测定）。
          1.3 实验动物                                           2.1.4 小鼠海马组织中cAMP、PKA水平检测
              本研究所用实验动物为7周龄雄性SPF级自发性糖                            取 6 只小鼠海马组织适量，加入预冷的生理盐水研
          尿病 db/db 小鼠及同背景正常对照 db/m 小鼠，均购自常                   磨制成匀浆，将匀浆置于4 ℃条件下以5 000 r/min离心
          州卡文斯实验动物有限公司，动物生产许可证号为                             10 min，收集上清液。取上清液适量，根据 ELISA 试剂
          SCXK（苏）2021-0013。所有小鼠均饲养于 SPF 级环境                  盒说明书方法处理，采用酶标仪于450 nm波长处测定吸
          中，饲养条件为温度（22±2）℃、相对湿度（55±10）%、                     光度，并根据标准曲线计算海马组织中cAMP、PKA水平。
          昼夜12 h光暗交替。小鼠适应性喂养1周后，开展后续                         2.2 细胞实验
          实验。本研究动物实验均严格按照徐州医科大学实验                            2.2.1 细胞培养
          动物委员会制定的管理使用细则进行，且已获得徐州医                               将小鼠海马神经元HT22细胞接种于含10%胎牛血
          科大学实验动物伦理委员会批准（伦理号为 202211-                        清和 1% 青霉素-链霉素双抗的 DMEM 培养基中，置于
          S022）。                                             37 ℃、5%CO2恒温培养箱中常规培养，待细胞生长至对
          1.4 细胞                                             数期后进行后续实验。

              本研究所用的小鼠海马神经元传代细胞系HT22购                        2.2.2 分组、造模与给药
          自中国科学院上海生命科学研究院。                                       将细胞分为对照组（采用含 25 mmol/L 葡萄糖的
          2 方法                                               DMEM 培养基培养）、高糖组（采用含 125 mmol/L 葡萄

                                                                                  [3]
          2.1 动物实验                                           糖的 DMEM 培养基培养 ）、高糖+艾塞那肽组（采用含
                                                                                                [10]
          2.1.1 分组、造模与给药                                     125 mmol/L葡萄糖和20 nmol/L艾塞那肽 的DMEM培
              将 db/db 小鼠随机分为模型组和艾塞那肽组（50                     养基培养）、高糖+艾塞那肽+H89组（在给予艾塞那肽前
                                                                                                  [11]
          μg/kg，给药剂量参考文献[9]设置），另将db/m小鼠作为                    15 min，先加入 10 μmol/L PKA 抑制剂 H89 ，再采用含
          正常对照组，每组8只。艾塞那肽组小鼠每天2次（9：00、                       125 mmol/L 葡萄糖和 20 nmol/L 艾塞那肽的 DMEM 培
          16：00各1次）皮下注射相应药液，正常对照组和模型组                        养基培养）、高糖+H89 组（采用含 125 mmol/L 葡萄糖和
          小鼠同法皮下注射等体积生理盐水，连续8周。实验期                           10 μmol/L H89 的 DMEM 培养基培养，用于排除 H89 本
          间，每周固定时间称量小鼠体重，尾静脉采血检测空腹                           身的影响，以验证结果的特异性），加入相应药液/培养基
          血糖。                                                干预48 h后，进行后续指标检测。
          2.1.2 Morris水迷宫实验                                  2.2.3 细胞中氧化应激指标和cAMP、PKA水平检测
              末次给药后，所有小鼠进行 Morris 水迷宫实验（包                        取HT22细胞，按“2.2.2”项下方法分组、造模与给药
          括定位巡航实验和空间探索实验）。（1）定位巡航实验：                         干预（cAMP、PKA水平检测时，不设置高糖+艾塞那肽+
          实验前1 d让小鼠在水池中自由游泳2 min以适应环境。                       H89 组、高糖+H89 组），每组设 3 个复孔；干预 48 h 后收
          随后连续4 d进行定位巡航实验，每天将小鼠从4个不同                         集细胞，根据前面动物实验中的相应方法，分别检测细
          入水点随机放入水池，记录其找到隐藏平台的时间（即                           胞中氧化应激指标和cAMP、PKA水平。实验重复4次。
          逃避潜伏期）；若90 s内小鼠未找到平台，则需引导其至                        2.2.4 细胞中线粒体呼吸酶活性检测
          平台并停留20 s，此时逃避潜伏期记为90 s。（2）空间探索实                       取HT22细胞，按“2.2.2”项下方法分组、造模与给药
          验：第5天将平台移除，进行空间探索实验，记录小鼠在原                         干预，每组设3个复孔；干预48 h后收集细胞，根据线粒
          平台象限的停留时间（即目标象限停留时间）、穿越目标                          体提取试剂盒说明书方法操作，提取细胞中的线粒体；
          平台次数及游泳速度，以此评估小鼠的空间记忆能力。                           再根据线粒体呼吸酶Ⅱ及Ⅳ活性检测试剂盒说明书方


          中国药房  2026年第37卷第5期                                                 China Pharmacy  2026 Vol. 37  No. 5    · 591 ·
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