Page 52 - 《中国药房》2026年3期

expression level of mitochondrial superoxide， the opening degree of MPTP， protein and its mRNA expressions of CypD as well as
protein expressions of TfR1 and MCU were increased or up-regulated significantly （P＜0.01）； however， GSH content，
mitochondrial membrane potential， protein and mRNA expressions of GPX4， and protein expressions of FTH1， ANT and CytC
were decreased or down-regulated significantly （P＜0.01）. Compared with the si-GPX4 group， the cells in the DXQ-M， DXQ-H
groups showed a general improvement in the above quantitative indicators （P＜0.01 or P＜0.05）. CONCLUSIONS DXQ can
enhance antioxidant capacity by activating the GSH/GPX4 pathway， regulate the expressions of TfR1 and FTH1 protein to correct
iron ion homeostasis， inhibit excessive opening of MPTP to improve mitochondrial function， and ultimately suppress microglial
ferroptosis.
KEYWORDS Dianxianqing granules； mitochondrial permeability transition pore； GSH/GPX4 pathway； ferroptosis； microglia

铁死亡是一种铁依赖性程序性细胞死亡方式，以细 Tecan 公司）、041BR118462 型垂直电泳槽湿转膜系统
胞内铁离子蓄积、脂质过氧化反应增强为核心特征，与 （美国 Bio-Rad 公司）、Azure 300 型化学发光成像仪和
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多种神经退行性疾病的发生发展密切相关 。小胶质细 Azure Cielo 6型实时荧光定量聚合酶链式反应（PCR）仪
胞作为中枢神经系统固有的免疫细胞，具有较强的铁储 （美国Azure Biosystems公司）等。
存能力；但在疾病状态下，其内部会出现大量铁离子异 1.2 主要药品与试剂
常沉积，这一现象可诱发小胶质细胞自身铁死亡，是加 癫痫清颗粒[批号20210310，规格为每包装8 g（每1
[2]
速神经损伤的关键环节 。线粒体作为细胞能量代谢的 g 颗粒相当于生药 5.12 g）]由辽宁中医药大学附属第二
枢纽，其功能稳定性对抑制小胶质细胞铁死亡至关重 医院提供；CsA 对照品（阳性对照药，批号 S2286，纯度
[3]
要 。线粒体通透性转换孔（mitochondrial permeability 99.98%）购自美国Selleck公司；汉克平衡盐溶液（Hank’s
transition pore，MPTP）是线粒体内外膜之间的非选择性 balanced salt solution，HBSS；批号H1025）购自北京索莱
通道，在维持线粒体正常功能中起关键作用 。谷胱甘 宝科技有限公司；总铁离子（比色法）检测试剂盒（批号
[4]
肽（glutathione，GSH）/谷胱甘肽过氧化物酶 4（glutathi‐ E1042）购自北京普利莱基因技术有限公司；GSH（微板
one peroxidase 4，GPX4）通路是调控铁死亡的核心信号 法）检测试剂盒（批号A006-2-1）购自南京建成生物工程
通路：当氧化应激发生时，MPTP过度开放会导致线粒体 研究所有限公司；线粒体超氧化物红色荧光探针（Mito‐
功能障碍，进而引起 GSH 合成减少、活性氧（reactive SOX Red）试剂盒、Lipofectamine 3000 转染试剂（批号
TM
oxygen species，ROS）分泌增加、GPX4表达下调，最终诱 分别为 M36007、L3000015）均购自赛默飞世尔科技（中
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发细胞铁死亡 。 国）有限公司；鼠抗 GSH 单克隆抗体、鼠抗细胞色素 C
癫痫清颗粒为辽宁中医药大学附属第二医院的中 （cytochrome C，CytC）单克隆抗体、兔抗亲环蛋白 D（cy‐
药复方专利药（专利号 ZL201110069494），由熟地黄、制 clophilin D，CypD）多克隆抗体、兔抗线粒体钙单向转运
何首乌、芍药（白芍）、石菖蒲、柴胡、郁金、知母等10味中 体（mitochondrial calcium uniporter，MCU）多克隆抗体、
药组成，具有熄风豁痰、通畅血脉、消散瘀滞、益智醒脑 兔抗转铁蛋白受体1（transferrin receptor 1，TfR1）多克隆
等功效 [6―7] 。本课题组前期研究已证实，该药可通过调 抗体、兔抗铁蛋白重链1（ferritin heavy chain 1，FTH1）多
控小胶质细胞免疫微环境、抑制铁死亡、保护神经元来 克 隆 抗 体 、兔 抗 腺 苷 酸 转 运 蛋 白（adenine nucleotide
发挥改善神经退行性疾病的作用，且 GPX4 是其潜在作 translocator，ANT）多克隆抗体、鼠抗 β-肌动蛋白（β-ac‐
用靶点之一 。基于 MPTP 与 GSH/GPX4 通路的关联， tin）单克隆抗体（批号分别为 67736-1-IG、66264-1-IG、
[8]
本研究拟采用铁死亡诱导剂Erastin诱导并联合GPX4基 12716-1-AP、 26312-1-AP、 10084-2-AP、 11682-1-AP、
因沉默转染构建小胶质细胞铁死亡模型，以MPTP抑制 30631-1-AP、66009-1-Ig）均购自武汉三鹰生物技术有限
剂——环孢素A（cyclosporine A，CsA）为阳性对照药，采 公司；BV2细胞专用培养基、DMEM基础培养基（批号分
用不同浓度癫痫清颗粒含药血清（简称“DXQ”）进行干 别为CM-0493A、WHB824K221）均购自武汉普诺赛生命
预，探究该药通过调控GSH/GPX4通路抑制小胶质细胞 科技有限公司；增强型线粒体膜电位检测试剂盒（JC-
铁死亡的潜在机制，以期为癫痫清颗粒治疗铁死亡相关 1）、MPTP 检测试剂盒、异硫氰酸荧光素（FITC）标记的
神经退行性疾病提供新的理论依据和作用靶点。 山羊抗兔免疫球蛋白G（IgG）（H+L）二抗、免疫荧光试剂
1 材料 盒[含AF555标记的驴抗鼠IgG（H+L）二抗]、焦碳酸二乙
1.1 主要仪器 酯（批号分别为 C2003S、C2009S、A0562、P0190、R0021）
本研究所用仪器主要包括 CLM-170B-8-NF 型恒温 均购自上海碧云天生物技术股份有限公司；辣根过氧化
培养箱（新加坡 ESCO 公司）、DMI3000B 型倒置荧光显 物酶标记的山羊抗兔、山羊抗鼠 IgG（H+L）（亲和纯化）
®
微镜（德国Leica公司）、Infinite 200 PRO型酶标仪（瑞士 二抗（批号分别为 ZB2301、ZB2305）均购自北京中杉金

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