Page 43 - 《中国药房》2026年1期
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proteins （p-AKT， AKT，  SKP2，  MTH1），  along  with  the  upstream  and  downstream  proteins  of AKT  phosphatidylinositol  3-kinase
         （PI3K），  cyclin-dependent  kinase  inhibitor  1 （P21）  and  cyclin-dependent  kinase  inhibitor  1B （P27）.  RESULTS  Compared  with
          control  group，  the  cell  viability，  colony  number，  and  the  phosphorylation  levels  of  AKT  and  PI3K  proteins  as  well  as  protein
          expressions  of  SKP2，  MTH1  and  Bcl-2  were  significantly  decreased （P＜0.05），  while  ROS  level，  apoptosis  rate，  and  the
          expression  levels  of  Bax，  cleaved  caspase-3，  P21  and  P27  proteins  were  significantly  increased （P＜0.05）.  Moreover，  the  effects
          of  Esc  exhibited  concentration-dependence （P＜0.05）.  Compared  with  H-Esc  group，  above  indexes  of  high-concentration  of  Esc+
          SC79  group  were  reversed  significantly （P＜0.05）.  CONCLUSIONS  Esc  may  promote  massive  ROS  production  and  induce
          activation of apoptosis in HL-60 cells by inhibiting the AKT/SKP2/MTH1 pathway， thus inhibiting the proliferation of HL-60 cells.
          KEYWORDS    esculetin； acute myeloid leukemia； HL-60 cells； protein kinase B； cell apoptosis； AKT/SKP2/MTH1 pathway



              急性髓系白血病（acute myeloid leukemia，AML）是           缓AML进展，尚需进一步探索。基于此，本研究拟探讨
          一种髓系前体细胞的遗传改变，导致肿瘤克隆性髓系干                           Esc 通过调控 AKT/SKP2/MTH1 通路诱导 AML HL-60
          细胞过度生成而引起的造血干细胞疾病，其特征是恶性                           细胞凋亡的作用，以期为临床治疗AML提供参考。
          骨髓干细胞无节制增殖并伴有感染、贫血和出血；患者                           1 材料
          初发时表现多样，部分患者通过常规血液检查发现，另                           1.1 主要仪器
          有部分患者则因感染、出血或弥散性血管内凝血等并发                               本研究所用的主要仪器有 Spectra Max M5 型多功
                    [1]
          症就诊发现 。近年来，随着AML检测技术的进步以及                          能酶标仪（美国 Molecular Devices 公司）、BX63 型荧光
          个体化疗法的发展，AML 患者的诊断和预后得以明显                          显微镜（日本 Olympus 公司）、GelDoc Go 型凝胶成像系
          改善，但其临床有效治疗仍面临挑战，且部分患者经规                           统（上海伯乐生命医学产品有限公司）、NovoCyte Advan‐
                                [2]
          范化治疗后预后仍不理想 。因此，亟须探索AML发病                          teon型流式细胞仪（美国Agilent公司）等。
          机制，找寻可靠靶点并确定更加有效的治疗策略。                             1.2 主要药品与试剂
                                                                 本研究所用的主要药品与试剂有：Esc对照品、AKT
              蛋白激酶 B（protein kinase B，AKT）参与细胞周期
                                                             激动剂 SC79 对照品（美国 MedChemExpress 公司，批号
          进程和凋亡，通过转录、翻译和翻译后修饰对 S 期激酶
                                                             分 别 为 305-01-1、305834-79-1，纯 度 分 别 为 99.79%、
          相关蛋白2（S-phase kinase associated protein 2，SKP2）起
                                                             98.0%），IMDM培养基、胎牛血清（美国Gibco公司，批号
          正向调节作用；而SKP2是F-Box蛋白的成员之一，可促
                                                             分别为12200036、10099141），100×青霉素-链霉素双抗
                                  [3]
          进多种恶性肿瘤的发生发展 。据报道，在多种类型的
                                                            （厦门泰京生物技术有限公司，批号ABK0005C），4%多
          恶性肿瘤中均观察到SKP2过表达和AKT活性升高，且
                                                             聚甲醛、结晶紫、MTT试剂盒、ROS检测试剂盒（上海碧
                                          [4]
          活化的 AKT 可诱导 SKP2 进入细胞质 。此外，MutT 同
                                                             云天生物技术有限公司，批号分别为 P0099、C0121、
          源酶1（MutT homolog 1，MTH1）可通过清除氧化性嘌呤
                                                             C0009M、S0035S），Annexin Ⅴ-FITC/PI细胞凋亡检测试
          核苷酸，保护癌细胞免受高水平活性氧（reactive oxygen
                                                             剂 盒 [ 翌 圣 生 物 科 技（上 海）股 份 有 限 公 司 ，批 号
          species，ROS）诱导的DNA损伤；抑制MTH1活性可促进
                                                             40302ES60]，SDS-PAGE 凝胶制备试剂盒、ECL 化学发
                                   [5]
          氧化损伤，进而抑制肿瘤生长 。
                                                             光试剂盒（北京索莱宝科技有限公司，批号分别为
              秦皮乙素（esculetin，Esc）是一种二羟基香豆素衍生
                                                             P1200、PE0010），RIPA裂解液、BCA蛋白定量试剂盒（江
          物，具有抗氧化、抗炎、抗肿瘤等多种药理活性 。近年
                                                  [6]
                                                             苏 康 为 世 纪 生 物 科 技 股 份 有 限 公 司 ，批 号 分 别 为
          来研究发现，Esc 可通过瓦解肿瘤细胞氧化防御，在
                                                             CW2333S、CW0014S），兔 源 磷 酸 化 AKT（p-AKT）、
          AML细胞中发挥显著的抗增殖作用；同时，其可通过介                          AKT、SKP2、MTH1、B细胞淋巴瘤2（B-cell lymphoma 2，
          导 Wnt 信号通路的“轴移”效应，有效解除 AML 细胞的                     Bcl-2）、Bcl-2 相 关 X 蛋 白（Bcl-2-associated  X  protein，
          阻滞状态，并激活白血病祖细胞向中性粒细胞分化的潜                           Bax）、裂解的胱天蛋白酶 3（cleaved caspase-3）、磷脂酰
          力 。然而，Esc 在 AML 细胞凋亡中的具体作用途径尚                      肌醇3激酶（phosphatidylinositol 3-kinase，PI3K）、磷酸化
            [7]
          不完全清楚。既往研究报道，一种美罗萜类真菌次级代                           PI3K（p-PI3K）、周期蛋白依赖性激酶抑制剂 1（cyclin-
          谢物——Neosetophomone B 可通过使 AKT 失活，下调                dependent kinase inhibitor 1，P21）、周期蛋白依赖性激酶
          致癌基因 SKP2 和 MTH1 表达，最终降低肿瘤细胞活                      抑制剂 1B（cyclin-dependent kinase inhibitor 1B，P27）抗
            [8]
          力 。然而，Esc 是否可通过调控 AKT/SKP2/MTH1 通                  体（美国 Cell Signaling Technology 公司，批号分别为
          路，瓦解肿瘤细胞氧化防御，进而诱导肿瘤细胞凋亡，减                          4060、9272、2652、43918、3498、2772、9661、4249、17366、


          中国药房  2026年第37卷第1期                                                  China Pharmacy  2026 Vol. 37  No. 1    · 37 ·
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