Page 59 - 《中国药房》2025年23期
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夜循环12 h/12 h的环境中，自由饮食摄水。本研究获得                      于显微镜下观察肺上皮细胞凋亡情况（凋亡细胞经
          张家口怀信生物科技有限责任公司动物伦理委员会批                            TUNEL染色后为红色荧光，细胞核经DAPI染色后为蓝
          准（批号为2024-04-082）。                                 色荧光），并计算细胞凋亡率（细胞凋亡率＝TUNEL 阳
          2 方法                                               性染色细胞数/DAPI阳性细胞数×100%）。
          2.1 造模、分组与给药                                       2.6 肺组织中JNK/p38 MAPK信号通路相关蛋白表达
              采 用 烟 熏 法 联 合 气 管 内 注 射 LPS 的 方 法 建 立          检测
                      [10]
          AECOPD模型 ：将68只大鼠置于有机玻璃密闭的熏箱                            取“2.4”项下大鼠左肺组织适量，加入蛋白裂解液提
          内，每次点燃20根红梅香烟，每天2次，每次持续1 h，于                       取蛋白，采用 BCA 法检测蛋白浓度后进行变性处理。
          烟熏后第 7、14、21 天时对大鼠气管注入 LPS 溶液（1                    取 30 μg 变性后的蛋白进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰
          mg/kg），共持续8周，作为造模组。取剩余17只大鼠，不                      胺凝胶电泳，然后转移至PVDF膜上；经封闭处理后，加
          进行烟熏，仅气管注入等量生理盐水，作为对照组（即                           入 p-JNK、JNK、p-p38 MAPK、p38 MAPK、β-actin 抗体
          Control组）。造模结束后，随机处死Control组和造模组                  （稀释度均为1∶1 000），于4 ℃下孵育过夜；次日，加入相
          大鼠各 5 只，剖取肺组织进行 HE 染色；与 Control 组比                 应二抗（稀释度为 1∶5 000）孵育 1 h；采用化学发光试剂
          较，造模组大鼠肺组织病理损伤明显，肺泡壁增厚、肺泡                          处理，并采用 Image J 软件分析蛋白灰度值。以目的蛋
          肿大，且有明显的炎症细胞浸润，则表示造模成功。                            白与内参β-actin的灰度值比值表示蛋白的表达水平，以
              取造模成功的 60 只大鼠随机分为模型组，ATR 低、                    p-JNK与JNK、p-p38 MAPK与p38 MAPK表达水平的比
          中、高剂量组（即ATR-L、ATR-M、ATR-H组）以及高剂量                   值表示JNK、p38 MAPK蛋白的磷酸化水平。
          ATR+ANS 组（即 ATR-H+ANS 组），每组 12 只。ATR-L、            2.7 统计学方法
          ATR-M、ATR-H 组大鼠分别腹腔注射 25、50、100 mg/kg                  采用SPSS 24.0软件进行统计分析。数据符合正态
                [9]
          的 ATR ，ATR-H+ANS 组大鼠腹腔注射 100 mg/kg 的               分布，用x±s表示，多组间比较采用单因素方差分析，组
                             [11]
          ATR与5 mg/kg的ANS ，Control组、模型组给予等量生                 间两两比较采用LSD-t检验。检验水准α＝0.05。
          理盐水，每天1次，连续14 d。                                   3 结果
          2.2 肺功能检测
                                                             3.1 ATR对大鼠肺功能的影响
              末次给药后次日，通过注射戊巴比妥钠（40 mg/kg）
                                                                 与Control组比较，模型组大鼠PEF、FEV/FVC、PaO2
          麻醉大鼠后，采用肺功能仪检测大鼠肺功能，记录呼气
                                                             均显著减慢或降低（P＜0.05）；与模型组比较，ATR-L
          峰 值 流 速（peak  expiratory  flow，PEF）、用 力 呼 气 量
                                                             组、ATR-M 组、ATR-H 组大鼠 PEF、FEV/FVC、PaO2均显
         （forced expiratory volume，FEV）/用力肺活量（forced vi‐
                                                             著加快或升高，且具有剂量依赖性（P＜0.05）；与ATR-H
          tal capacity，FVC）比值；采用血气生化分析仪检测动脉
                                                             组比较，ATR-H+ANS 组大鼠 PEF、FEV/FVC、PaO2均显
          血氧分压（arterial partial pressure of oxygen，PaO2 ）。
                                                             著减慢或降低（P＜0.05）。结果见表1。
          2.3 支气管肺泡灌洗液中炎症细胞数量与炎症因子水
                                                                 表1 各组大鼠肺功能指标比较（x±s，n＝12）
          平检测
                                                              组别             PEF/（L/min）  （FEV/FVC）/%  PaO 2/mmHg
              肺功能检测完成后，采用随机数字表法从各组随机
                                                              Control组       5.05±0.63   81.32±8.64  117.25±10.91
          选择6只大鼠，麻醉后结扎左侧支气管，使用生理盐水冲                           模型组            2.12±0.25 a  54.26±5.41 a  65.42±7.56 a
          洗右肺3次，收集支气管肺泡灌洗液（bronchoalveolar la‐                ATR-L组         2.75±0.36 b  63.59±7.26 b  82.34±9.12 b
                                                              ATR-M组         3.41±0.42 bc  72.64±8.02 bc  96.48±10.31 bc
          vage fluid，BALF），采用血液分析仪测定 BALF 中炎症
                                                              ATR-H组         4.58±0.55 bcd  80.98±8.42 bcd  109.28±11.34 bcd
          细胞（白细胞、中性粒细胞、巨噬细胞与淋巴细胞）数量。                          ATR-H+ANS组     2.84±0.41 e  67.42±7.36 e  91.56±10.47 e
          另外，取适量BALF离心后，收集上清液，采用相应试剂                            a：与Control组比较，P＜0.05；b：与模型组比较，P＜0.05；c：与
          盒检测BALF中炎症因子（IL-6、TNF-α、IL-1β）水平。                  ATR-L组比较，P＜0.05；d：与ATR-M组比较，P＜0.05；e：与ATR-H组比
          2.4 肺组织病理学形态观察                                     较，P＜0.05；1 mmHg＝0.133 kPa。
              取各组剩余 6 只大鼠右肺组织（左肺保存备用），以                      3.2 ATR对大鼠BALF中炎症细胞数量的影响
          10% 甲醛溶液固定 24 h，经脱水、包埋、切片后，取部分                         与 Control 组比较，模型组大鼠 BALF 中白细胞、中
          切片（剩余部分进行肺上皮细胞凋亡检测）进行 HE 染                         性粒细胞、淋巴细胞、巨噬细胞数量均显著增多（P＜
          色，在光学显微镜下观察大鼠肺组织的病理学变化，并                           0.05）；与模型组比较，ATR-L组、ATR-M组、ATR-H组大
          进行病理学评分：总分 0～16 分，评分越高，表示肺损伤                       鼠BALF中白细胞、中性粒细胞、淋巴细胞、巨噬细胞数
                [12]
          越严重 。                                              量均显著减少，且具有剂量依赖性（P＜0.05）；与ATR-H
          2.5 肺上皮细胞凋亡检测                                      组比较，ATR-H+ANS组大鼠BALF中白细胞、中性粒细
              取“2.4”项下剩余切片，经脱蜡复水后，加入TUNEL                    胞、淋巴细胞、巨噬细胞数量均显著增多（P＜0.05）。结
          染色液避光孵育1 h，再用DAPI复染，随机选择5个视野                       果见表2。


          中国药房  2025年第36卷第23期                                              China Pharmacy  2025 Vol. 36  No. 23    · 2937 ·
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