Page 59 - 《中国药房》2025年22期
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min，室温摇床孵育二抗（稀释比例为 1∶8 000）1 h；再次                    表2 各组小鼠血脂水平比较（x±s，n＝8，mmol/L）
          洗膜3次后显影，使用Image J软件对条带进行灰度值定                        组别         TG        TC       LDL-C     HDL-C
          量分析。以目的蛋白与内参蛋白（β-actin）条带灰度值                        CON组     0.67±0.24  1.73±0.27  0.97±0.30  3.01±0.59
                                                              MOD组     7.70±1.16 a  17.02±3.24 a  12.83±2.12 a  1.25±0.27 a
          的比值表示目的蛋白的表达水平，以 p-NF-κB p65 与
                                                              ALO-L组   5.96±1.07 b  12.67±2.91 b  8.75±1.48 b  1.78±0.39
          NF- κB  p65、p-STAT3 与 STAT3 的 灰 度 值 比 值 表 示         ALO-H组   4.12±0.85 b  8.45±2.39 b  6.04±0.49 b  2.81±0.35 b
          NF-κB p65、STAT3蛋白的磷酸化水平。                            ATO组     3.38±0.89 b  7.07±1.53 b  4.91±1.10 b  2.44±0.56 b
          2.2 细胞实验                                              a：与CON组相比，P＜0.01；b：与MOD组相比，P＜0.05。
          2.2.1 细胞培养                                         3.3 ALO对小鼠主动脉斑块及病理结构的影响
              将 RAW264.7 细胞复苏后加入含有 10% 胎牛血清、
                                                                 油红 O 染色结果（图 1、表 3）显示，与 CON 组相比，
          1%青霉素-链霉素的高糖DMEM培养基中，置于37 ℃、
                                                             MOD 组小鼠主动脉斑块面积显著增加（P＜0.01）；与
          5%CO2恒温培养箱中培养。每天换液，待细胞密度生长
          至80%～90%时进行传代或铺板操作。                                MOD 组比较，各给药组小鼠主动脉斑块面积均显著缩
          2.2.2 细胞分组及干预                                      小（P＜0.01）。HE染色结果（图2）显示，与CON组相比，
              将细胞分为CON组、LPS组、ALO+LPS组，并以5×                   MOD 组小鼠主动脉可见不同程度内膜增厚、平滑肌细
            4
          10 个/孔接种于6孔板中，每组设置3个复孔。参照既往                        胞排列紊乱，管腔内可见明显斑块形成以及大量炎症细
          研究 ，CON 组正常培养细胞不进行干预；LPS 组细胞                       胞浸润；与MOD组相比，各给药组小鼠主动脉斑块面积
              [11]
          过夜贴壁后加入100 ng/mL的LPS诱导24 h建立极化模
                                                             均缩小，内膜结构改善。
          型；ALO+LPS 组细胞于造模前 4 h 加入 400 μmol/L 的
          ALO进行预处理，随后加入100 ng/mL的LPS诱导24 h。
          2.2.3 巨噬细胞极化比例检测
              采用流式细胞术检测。用 PBS 将干预结束后的细
          胞吹打下来转移至离心管中，以1 500 r/min离心5 min，
          弃上清液并使用 PBS 洗涤细胞沉淀 2 次，再次以 1 500
          r/min离心5 min，弃上清液，加入100 μL PBS重悬细胞；
          按说明书剂量添加相应抗体，移液器吹打混匀，4 ℃避光
          孵育30 min。孵育结束后，加入1 mL PBS，以1 500 r/min
          离心 5 min，PBS 洗涤 2 次，弃上清液。每管中加入 500
          μL PBS 重悬细胞后，置于流式管中上机检测，分别以
                    +
                          +
              +
                                +
          F4/80 CD86 、F4/80 CD206 表示 M1、M2 型巨噬细胞的
          比例。
                                                                 A. CON组  B. MOD组  C. ALO-L组  D. ALO-H组  E. ATO组
          2.3 统计学方法
                                                                    图1 各组小鼠主动脉油红O染色结果
              采 用 SPSS  26 软 件 对 数 据 进 行 统 计 分 析 ，使 用
          GraphPad Prism 10.1 软件作图。数据以 x±s 表示，多组             表3 各组小鼠主动脉斑块面积及巨噬细胞极化标志物
          间比较采用单因素方差分析，进一步组间两两比较采用                                表达情况比较（x±s，n＝3）
                                                                                       +
                                                                                                    +
          LSD-t检验。检验水准α＝0.05。                                 组别       主动脉斑块面积/cm 2  CD86 相对荧光强度  CD206 相对荧光强度
          3 结果                                                CON组       0.04±0.01     4.26±0.68   18.75±5.96
                                                              MOD组       0.62±0.08 a  87.37±4.97 a  34.32±6.11
          3.1 ALO对小鼠体重的影响                                     ALO-L组     0.31±0.05 b  60.30±3.30 b  62.23±7.43 b
              与CON组[（30.78±1.03） g]相比，MOD组小鼠的末                ALO-H组     0.26±0.10 b  48.17±1.22 b  83.51±7.62 b
          周体重[（34.76±1.06）g]显著升高（P＜0.05）；与MOD组                ATO组       0.30±0.04 b  50.95±7.73 b  75.31±5.77 b
          相比，ALO-L 组、ALO-H 组、ATO 组小鼠的末周体重[分                     a：与CON组相比，P＜0.01；b：与MOD组相比，P＜0.01。
          别为（33.60±1.73）、（33.33±23.73）、（33.63±1.63） g]差      3.4 ALO对小鼠主动脉中巨噬细胞极化标志物表达的
          异均无统计学意义（P＞0.05）。                                  影响
          3.2 ALO对小鼠血脂水平的影响                                      如表3、图3所示，与CON组相比，MOD组小鼠主动
              与 CON 组相比，MOD 组小鼠血清中 TG、TC、LDL-                         +                                     +
                                                             脉中 CD86 相对荧光强度显著升高（P＜0.01），CD206
          C 水平均显著升高（P＜0.01），HDL-C 水平显著降低
                                                             相对荧光强度差异无统计学意义（P＞0.05）。与 MOD
         （P＜0.01）。与MOD组相比，各给药组小鼠血清中TG、                                                        +
          TC、LDL-C 水平均显著降低（P＜0.05），ALO-H 组、ATO               组相比，各给药组小鼠主动脉中CD86 相对荧光强度均
                                                                                     +
          组小鼠血清中HDL-C水平均显著升高（P＜0.05）。结果                      显著降低（P＜0.01），CD206 相对荧光强度均显著升高
          见表2。                                              （P＜0.01）。


          中国药房  2025年第36卷第22期                                              China Pharmacy  2025 Vol. 36  No. 22    · 2805 ·
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