Page 45 - 《中国药房》2025年20期
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效果良好），每组10只。除正常对照组外，其余各组大鼠                         100），于 4 ℃下孵育过夜；加入相应二抗（稀释度为 1∶
          直接经尿道向膀胱内注射大肠埃希菌菌液构建CUTI模                          100），于室温下孵育 20 min；以二氨基联苯胺（DAB）显
          型，具体操作如下 ：大鼠禁水不禁食12 h后麻醉，将尿                        色，经苏木精复染、分化、返蓝、封片后，采用显微镜观察
                         [12]
          道口消毒，插入一次性导尿管（距离尿道口2～3 cm），用                       并拍照。采用Image J软件测定每个视野下各蛋白阳性
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          一次性注射器将 1 mL 大肠埃希菌菌液（1×10 cfu/mL）                  染色（呈棕色）的平均光密度值，以表示相应蛋白的表达
          缓慢注入导尿管中，结扎尿道口1～2 h；1周后同法注入                        水平。
          菌液，次日检测各组大鼠尿常规，当造模大鼠尿液中白                               采用Western blot法进行检测。取“2.5”项下各组大
          细胞数量较正常对照组大鼠明显升高时，表明造模成                            鼠（每组3只）冻存的膀胱组织适量，加入RIPA裂解液裂
          功。造模同时，各药物组大鼠灌胃相应药液，模型组和                           解、匀浆，提取总蛋白，再以 BCA 法测定蛋白浓度。蛋
          正常对照组大鼠灌胃等体积水，每天1次，连续4周。造                          白经变性处理后，进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝
          模过程中，模型组和八正散组各有2只大鼠死亡，左氧氟                          胶电泳、转膜和封闭，加入TLR4、NF-κB、NLRP3、GAPDH
          沙星组有1只大鼠死亡，正常对照组无大鼠死亡，后续每                          一抗（稀释度均为1∶1 000），于4 ℃下孵育过夜；加入相
          组纳入8只大鼠进行实验。                                       应二抗（稀释度为1∶1 000），于常温下孵育1 h；经化学发
          2.4 一般情况观察                                         光试剂显色后，置于凝胶成像系统中成像。采用Image J
              给药期间，观察各组大鼠一般行为学表现，包括毛                         软件分析各蛋白的条带灰度值，以目的蛋白与内参蛋白
          发、精神状态、排尿次数、尿液颜色、大便性状等；每周称                        （GAPDH）的灰度值比值表示目的蛋白的表达水平。
          量各组大鼠体重，并记录。
                                                             2.10 统计学方法
          2.5 标本采集
                                                                 采用SPSS 22.0软件对数据进行统计分析。满足正
              末次给药后，采集各组大鼠眼眶血，血样置于装有
                                                             态分布的计量资料以x±s表示，多组间比较采用单因素
          肝素钠的一次性抗凝 EP 管中，用于大鼠血常规指标的
                                                             方差分析，进一步两两比较采用 LSD-t 检验。检验水准
          检测；随后采集其腹主动脉血，血样于室温下静置 1 h
                                                             α＝0.05。
          后，以3 000 r/min离心15 min，分离上层血清，用于大鼠                 3 结果
          炎症、免疫、肾功能相关指标的检测。采血完成后，分离
                                                             3.1 八正散对CUTI大鼠一般情况的影响
          各组大鼠的肾脏和膀胱，将左肾组织和一半的膀胱组织
                                                                 正常对照组大鼠精神状态良好，活动敏捷，毛发光
          用4%多聚甲醛溶液固定，用于苏木精-伊红（HE）染色和
                                                             亮，排尿次数和尿液颜色均正常；模型组大鼠精神萎靡，
          免疫组化染色；剩余膀胱组织于－80 ℃下保存，用于相
                                                             动作迟缓，毛发竖立、光泽性差，排尿次数明显增加，尿
          关蛋白表达检测。
                                                             液颜色发黄，大便呈稀便状；左氧氟沙星组和八正散组
          2.6 血常规指标检测
                                                             大鼠精神状态较好，排尿次数、尿液颜色和粪便状态整
              取“2.5”项下抗凝全血样品适量，采用血细胞分析仪
                                                             体向好。实验期间，各组大鼠体重呈正常增长趋势，且
          检测各组大鼠全血中白细胞数量和淋巴细胞百分比。
                                                             各组间体重差异不大。
          2.7 血清中炎症、免疫、肾功能相关指标水平检测
                                                             3.2 八正散对CUTI大鼠血常规指标的影响
              取“2.5”项下血清样品适量，严格按照试剂盒说明书
                                                                 与正常对照组比较，模型组大鼠全血中白细胞数量
          方法操作，采用酶标仪检测血清中炎症因子（IL-1β、IL-
                                                             显著升高（P＜0.05），而淋巴细胞百分比的差异无统计
          6、IL-8、TNF-α）、免疫指标（CD4、CD8、SIgA）、肾功能指
          标（Cys-C、α1-MG）水平。另外，取“2.5”项下血清样品                   学意义（P＞0.05）；与模型组比较，左氧氟沙星组和八正
          适量，采用动物生化分析仪检测大鼠血清中另两种肾功                           散组大鼠全血中白细胞数量、淋巴细胞百分比虽有一定
          能指标（尿素和肌酐）水平。                                      变化，但差异均无统计学意义（P＞0.05）。结果见表1。
          2.8 肾脏和膀胱组织的病理学形态观察                                     表1 各组大鼠血常规指标比较（x±s，n＝8）
                                                                                     －1
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              取“2.5”项下各组大鼠经 4% 多聚甲醛溶液固定的                      组别            白细胞数量/（×10  L ）     淋巴细胞百分比/%
                                                              正常对照组            5.77±2.11          0.79±0.03
          肾脏和膀胱组织适量，经石蜡包埋后，切片（厚度 5
                                                              模型组              8.35±3.19 a        0.63±0.51
          μm）；取部分切片，经二甲苯脱蜡、乙醇梯度脱水后进行                          左氧氟沙星组           6.28±2.95          0.64±0.16
          HE 染色，再经脱水、封片后，采用显微镜观察其肾脏和                          八正散组             7.64±1.77          0.73±0.04
          膀胱组织的病理学变化。                                           a：与正常对照组比较，P＜0.05；b：与模型组比较，P＜0.05。
          2.9 膀胱组织中 TLR4、NF-κB、NLRP3 蛋白表达水平                  3.3 八正散对 CUTI 大鼠血清中炎症、免疫、肾功能相
          检测                                                 关指标的影响
              采用免疫组化法进行检测。取“2.8”项下各组大鼠                           与正常对照组比较，模型组大鼠血清中IL-1β、IL-6、
         （每组3只）的膀胱组织切片，经脱蜡至水和抗原修复、阻                          IL-8、TNF-α、CD8、Cys-C、α1-MG、尿素、肌酐水平均显
          断后，加入 TLR4、NF-κB、NLRP3 一抗（稀释度均为 1∶                 著 升 高（P＜0.05），CD4、SIgA 水 平 均 显 著 降 低（P＜


          中国药房  2025年第36卷第20期                                              China Pharmacy  2025 Vol. 36  No. 20    · 2527 ·
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