Page 50 - 《中国药房》2025年19期

2.5% 戊二醛溶液固定细胞，依次梯度脱水、包埋、切片、
染色后，采用透射电子显微镜观察细胞形态，并拍照。
2.8 HT22 细胞中 IL-1β、TNF-α、NF-κB、IL-10 的含量
检测
200 nm 100 nm 100 nm
采用ELISA法检测。将HT22细胞接种于96孔板， A. KB-Exo B. PLXT-Exo C. NZN-Exo
按“2.4”项下方法造模、分组与给药，培养 24 h 后收集细 图1 不同Exo的透射电子显微镜图
胞，用预冷的无菌 PBS 洗涤 2～3 次并重悬，采用细胞破
3.2 NZN-Exo对HT22细胞增殖的影响
碎仪充分破碎细胞，于 4 °C 条件下以 1 000 r/min 离心
CCK-8法和EdU法检测结果（表1）显示，与KB-Exo
15 min；收集上清液，按照 ELISA 试剂盒说明书方法检
组相比，model 组经两种方法检测的细胞增殖率均显著
测各组细胞中 IL-1β、TNF-α、NF-κB、IL-10 的含量。以
降低（P＜0.05）；与 model 组相比，PLXT-Exo 组、NZN-
上每组样本数为6。
Exo 组经两种方法检测的细胞增殖率均显著升高（P＜
2.9 HT22细胞中炎症和凋亡相关蛋白表达的检测
0.05）。各组 HT22 细胞增殖情况的显微图可扫描本文
采用Western blot法检测。将HT22细胞接种于6孔
首页二维码进入“增强出版”页面查看附图1。
板，按“2.4”项下方法造模、分组与给药，培养24 h后收集
表1 各组 HT22 细胞经两种方法检测的细胞增殖率比
细胞，加入适量 RIPA 裂解液，于 4 °C 条件下以 12 000 较（x±s，n＝6，%%）
r/min离心15 min，收集细胞上清液，采用BCA法检测蛋 组别 CCK-8法 EdU法
白浓度，然后加入上样缓冲液于 100 °C 煮沸 10 min，使 KB-Exo组 134.46±4.11 74.87±1.46
model组 70.55±3.01 a 32.01±2.23 a
蛋白充分变性。待冷却后，上样等量蛋白（30 μg），经十
PLXT-Exo组 100.23±3.01 b 56.69±1.46 b
二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离并湿转到 NZN-Exo组 110.58±6.35 b 63.74±4.65 b
PVDF 膜上，加入封闭液封闭 30 min；依次加入 β-actin、 a：与KB-Exo组比较，P＜0.05；b：与model组比较，P＜0.05。
GAPDH、Bax、Bcl-2、Caspase-1、TNF-α、NLRP3 一抗（稀 3.3 NZN-Exo对HT22细胞凋亡的影响
释度分别为1∶5 000、1∶5 000、1∶2 000、1∶2 000、1∶1 000、 KB-Exo 组、model 组、PLXT-Exo 组、NZN-Exo 组细
1∶1 500、1∶2 000），置于4 °C条件下孵育12～16 h；次日 胞 凋 亡 率 分 别 为（2.03±0.97）% 、（53.22±3.16）% 、
回收一抗并用TBST洗涤3次，加入相应二抗（稀释度为 （21.87±8.06）%、（32.07±4.95）%。与 KB-Exo 组相比，
1∶5 000），室温下孵育 2 h；用 TBST 洗涤 3 次，滴加 ECL model 组细胞凋亡率显著升高（P＜0.05）；与 model 组相
发光液在化学发光仪上对条带扫描成像，以目的蛋白与 比，PLXT-Exo 组、NZN-Exo 组细胞凋亡率均显著降低
内参蛋白（β-actin或GAPDH）的条带灰度值比值表示各 （P＜0.05）。各组 HT22 细胞凋亡情况的显微图可扫描
目的蛋白的表达水平。以上每组样本数为3。 本文首页二维码进入“增强出版”页面查看附图2。
2.10 统计学方法 3.4 NZN-Exo对HT22细胞超微结构的影响
采用 GraphPad Prism 软件和 SPSS 21.0 软件进行图 透射电子显微镜观察结果（图2）显示，KB-Exo组细
表绘制和统计分析。计量资料以x±s表示，多组间比较 胞核大而圆，核膜完整，核仁可见，线粒体呈圆形、椭圆
采用单因素方差分析，进一步两两比较采用LSD-t检验。 形，内嵴清晰可见；model 组细胞体积膨胀，且部分细胞
检验水准α＝0.05。 变形，细胞膜不完整，核膜皱缩严重，核仁破裂，线粒体
3 结果 明显肿胀变形，空泡化严重，内嵴结构减少或消失；
3.1 Exo的鉴定结果 PLXT-Exo 组细胞核大而圆，核膜完整，核仁破裂，内嵴
透射电子显微镜观察结果（图 1）显示，KB-Exo、 结构隐约可见，线粒体结构模糊，空泡化减少；NZN-Exo
PLXT-Exo、NZN-Exo的形态可见类圆形囊泡结构，边界 组细胞核大而圆，核膜完整，核仁可见，线粒体呈圆形且
清晰，呈现出较为典型的“杯状”轮廓和膜结构“包裹”特 空泡化减少，内嵴结构完整。
征；其平均粒径分别为88.8、90.1、92.2 nm，符合Exo的粒 3.5 NZN-Exo 对 HT22 细胞中 IL-1β、TNF-α、NF-κB、
径范围；其表面抗体CD9和CD81的表达强度均较高，抗 IL-10含量的影响
体 CD9 的 阳 性 率 分 别 为（19.00±0.94）% 、（14.60± 与 KB-Exo 组相比，model 组细胞中 IL-1β、TNF-α、
1.03）%、（18.20±1.09）%，抗体 CD81 的阳性率分别为 NF-κB 含量均显著升高，IL-10 含量均显著降低（P＜
（9.03±0.23）%、（6.12±0.49）%、（10.53±0.44）%。这提 0.05）；与 model 组相比，PLXT-Exo 组、NZN-Exo 组细胞
示，本研究成功制备 KB-Exo、PLXT-Exo、NZN-Exo，可 中 IL-1β、TNF-α、NF-κB 含量均显著降低，IL-10 含量均
用于后续实验。 显著升高（P＜0.05）。结果见表2。

· 2396 · China Pharmacy 2025 Vol. 36 No. 19 中国药房 2025年第36卷第19期