Page 54 - 《中国药房》2025年19期
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知母为百合科植物知母Anemarrhena asphodeloides             2 方法与结果
          Bge.的干燥根茎，味苦、甘，性寒，归肺、胃、肾经，具有清                       2.1 知母盐炙品的制备方法
          热泻火、滋阴润燥的功效 。现代研究表明，知母活性成                               取知母饮片 50 g，加 15 mL 盐水（质量浓度为 0.1
                               [1]
                                                [2]
          分主要包括皂苷类、黄酮类及多糖类化合物 。黄酮类                            g/mL）拌匀，闷润一定时间，置于炒锅内（以电热板为热
          化合物如芒果苷、新芒果苷、异芒果苷等是知母发挥降                            源，投药前将炒锅预热至规定温度，并用红外测温仪监
          糖、止咳作用的物质基础，多糖类及皂苷类化合物如知                            测温度），以一定温度炒制一定时间，取出，放凉。
          母皂苷BⅡ、知母皂苷AⅢ、知母皂苷BⅢ等是知母发挥                           2.2 黄酮类成分含量测定方法的建立
                                        [3]
          解热、抗炎和利水作用的物质基础 。生知母因苦寒滑                            2.2.1 对照品溶液的制备
          利之性较强，久服易致滑肠，且滋阴退虚热功效欠佳，因                               精密称取适量的芒果苷、新芒果苷和异芒果苷对照
          此临床多使用其盐炙品。知母盐炙后滋肾阴、退虚热功                            品，分别加甲醇溶解配制成质量浓度分别为 352.70、
                                 [4]
          效增强，苦寒之性得到缓解 。                                      408.60、348.60 μg/mL 的单一对照品溶液。取上述单一
              2025年版《中国药典》（一部）规定盐知母制法为“取                      对照品溶液各 400 μL，混匀，用甲醇定容至 2 mL，即得
                                [1]
          知母片，照盐水炙法炒干”，但对闷润时间、炒制温度及                           混合对照品溶液a。
          炒制时间等盐炙工艺的关键参数缺乏量化标准。2020                           2.2.2 供试品溶液的制备
          年版《中国药典》（一部）以芒果苷、知母皂苷BⅡ为知母                              精密称取 5 g 知母盐炙品（过三号筛）至圆底烧瓶，
                  [5]
          指标成分 ，虽然2025年版《中国药典》（一部）新增了新                        加50 mL甲醇，于70 ℃水浴条件下回流提取1 h；室温冷
                                                              却后，过滤，滤纸并入残渣，加入40 mL甲醇再次回流提
                             [1]
          芒果苷作为评价指标 ，但仍无法全面反映炮制过程中
                                                              取40 min；室温冷却后，过滤，合并2次滤液，以甲醇定容
          多成分协同作用的整体质量特征。基于此，本研究在
                                            [1]
          2025年版《中国药典》规定的“含量测定”基础上增加了                         至 100 mL；以 0.22 μm 微孔滤膜滤过，取续滤液即得供
                                                              试品溶液。
          异芒果苷、知母皂苷AⅢ、知母皂苷BⅢ、总黄酮、总皂苷
                                                              2.2.3 色谱条件及专属性试验
          含量测定，并以上述8种成分含量为考察指标，以闷润时
                                                                  采用 UltiMate3000 型高效液相色谱仪，以 Dikma
          间、炒制温度及炒制时间为考察因素，采用熵权法建立
                                                              Kromasil C18 （250 mm×4.6 mm，5 μm）为色谱柱，以乙
          多指标综合评价体系，分别利用 Box-Behnken 响应面法                     腈-0.1% 磷酸溶液（V/V，15∶85）等度洗脱，检测波长为
          和 遗 传 算 法（genetic  algorithm，GA）- 反 向 传 播（back
                                                              258 nm，流速为 0.7 mL/min，柱温为 30 ℃，进样量为 3
          propagation，BP）神经网络优化知母盐炙工艺，并比较两
                                                              μL。吸取“2.2.1”“2.2.2”项下混合对照品溶液 a 和供试
          种方法的优化结果，以期为知母盐炙工艺的标准化以及
                                                              品溶液（前期单因素实验中将知母饮片以0.1 g/mL盐水
          质量控制的科学化、精细化提供参考。
                                                              闷润35 min后，以150 ℃炒制12 min的样品，下同）以及
          1 材料                                                空白对照溶液（甲醇）适量进样分析，记录色谱图。结果
          1.1 主要仪器                                            显示，芒果苷、新芒果苷、异芒果苷的分离度良好，且空
              HZ-2002A型电子天平购自慈溪红钻衡器设备有限                       白对照溶液对测定无干扰，具体见图1（空白对照溶液的
          公司；TU-1901 型双光束紫外分光光度计购自北京普析                        色谱图略）。
          通用仪器有限责任公司；UltiMate3000 型高效液相色谱
                                                               1 200                   1 200
          仪购自美国 Thermo Fisher Scientific 公司；LC-20A 型高          1 000                   1 000     1
          效液相色谱仪购自日本 Shimadzu 公司；UM-5000 型蒸                     800             2       800
          发光散射检测器购自上海通微分析技术有限公司；DB-                            mAU  600  1        3    mAU  600
                                                                400                     400             2
          1AB 型智能型不锈钢电热板购自上海力辰邦西仪器科                             200                     200
          技有限公司。                                                 0                       0                3
          1.2 主要药品与试剂                                             0    5    10   15   20  0    5    10   15   20
                                                                          t/min                   t/min
              知母饮片（批号2410027）购自四川新荷花中药饮片                              A.混合对照品溶液a               B.供试品溶液
          股份有限公司，经河北大学中医学院梁宪茂教授鉴定为                               1：新芒果苷；2：芒果苷；3：异芒果苷。
          百合科植物知母 A. asphodeloides Bge. 干燥根茎切制的                      图1 黄酮类成分专属性试验的色谱图
          饮片。对照品芒果苷、新芒果苷、异芒果苷、知母皂苷B                           2.2.4 方法学考察
          Ⅱ 、知 母 皂 苷 A Ⅲ 、知 母 皂 苷 B Ⅲ（批 号 分 别 为                   参考2025年版《中国药典》（三部）9101分析方法验
          PS011054、PS011463、PS010037、PS010972、PS011470、       证指导原则 进行方法学考察。结果显示，芒果苷、新芒
                                                                        [6]
          PSD241225-446）均购自成都普思生物科技股份有限公                      果苷、异芒果苷的回归方程分别为 y＝402.33x+2.859 6、
          司；芦丁（批号 T27F10Z81699，纯度大于 98%）购自上海                  y＝183.93x+3.909 3、y＝265.64x+4.431 7（r≥0.999 2），线
          源叶生物科技有限公司；甲醇、正丁醇、冰醋酸为分析                            性 范 围 分 别 为 35.27～352.70、40.86～408.60、34.86～
          纯，磷酸、乙腈为色谱纯，水为娃哈哈纯净水。                               348.60 μg/mL；精密度试验、重复性试验和 24 h 稳定性


          · 2400 ·    China Pharmacy  2025 Vol. 36  No. 19                            中国药房  2025年第36卷第19期
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