Page 55 - 《中国药房》2025年19期
P. 55
试验的RSD均小于2.00%（n＝6）；平均加样回收率分别 示，芦丁的回归方程为y＝1.695 9x+0.014 1（r＝0.997 6），
为 100.12%、99.87%、100.05%（RSD 分 别 为 1.22%、 线性范围为 1.55～51.60 μg/mL；精密度试验、重复性试
1.71%、1.38%，n＝6）。以上均符合指导原则相关要求。 验和24 h稳定性试验的RSD均小于2.00%（n＝6）；平均
2.3 皂苷类成分含量测定方法的建立 加样回收率为98.82%（RSD为1.52%，n＝6）。以上均符
2.3.1 对照品溶液的制备 合指导原则相关要求。
精密称取知母皂苷BⅡ、知母皂苷BⅢ、知母皂苷A 2.5 总皂苷含量测定方法的建立
[8]
Ⅲ对照品适量，分别加甲醇溶解配制成质量浓度分别为 采用香草醛-冰醋酸比色法 进行测定。参考 2025
[6]
506.80、517.00、528.30 μg/mL的单一对照品溶液。取上 年版《中国药典》（三部）9101分析方法验证指导原则 进
述单一对照品溶液各 1.5 mL 置于同一容量瓶中，混匀， 行方法学考察，并以知母皂苷BⅡ作为标准物质。结果
用甲醇定容至5 mL，即得混合对照品溶液b。 显示，知母皂苷 BⅡ的回归方程为 y＝0.006 8x+0.025 4
2.3.2 色谱条件及专属性试验 （r＝0.994 2），线性范围为50.68～304.08 μg/mL；精密度
采用 LC-20A 型高效液相色谱仪，以 Supersil C8为 试验、重复性试验和 24 h 稳定性试验的 RSD 均小于
色谱柱，以乙腈（A）-水（B）为流动相进行梯度洗脱（0～ 2.00%（n＝6）；平 均 加 样 回 收 率 为 100.79%（RSD 为
5.0 min，25%A→30%A；5.0～10.0 min，30%A→40%A； 1.56%，n＝6）。以上均符合指导原则相关要求。
2.6 基于熵权法的多指标综合评价体系的建立
10.0～20.0 min，40%A→75%A；20.0～23.0 min，75%A→
参考魏晴等 的研究方法，选取芒果苷、新芒果苷、
[9]
95%A；23.0～33.0 min，95%A；33.0～35.0 min，95%A→
25%A；35.0～45.0 min，25%A），以 N2为载气，载气流量 异芒果苷、知母皂苷BⅡ、知母皂苷BⅢ、知母皂苷AⅢ、
为2.5 mL/min，蒸发温度为90 ℃，流速为1.0 mL/min，柱 总黄酮和总皂苷为考察指标，采用熵权法进行多指标综
温为30 ℃，进样量为20 μL。吸取“2.2.2”“2.3.1”项下供 合评价。首先，为消除量纲差异，采用极差法对原始数
试品溶液和混合对照品溶液b以及空白对照溶液（甲醇） 据进行归一化，标准化数据矩阵（dij ）的具体公式为 d ＝
ij
适量进样分析，记录色谱图。结果显示，知母皂苷BⅡ、 x - min(x ) ，其中，dij表示第i个指标下第j个样本
ij
i
知母皂苷BⅢ、知母皂苷AⅢ的分离度良好，且空白对照 max(x )- min(x )
i
i
溶液对测定无干扰，具体见图 2（空白对照溶液色谱 的标准化值，xij为对应的原始测定值，min（xi ）和max（xi ）
图略）。 分别为第 i 个指标在所有样本中的最小值和最大值；其
次，将 dij 转换为概率矩阵（pij ），具体转换公式为 p ＝
125 000 2 375 000 1 ij
100 000 3 300 000 d ij （n 为样本数量），然后计算第 i 个指标的信息熵
1
75 000 225 000 Σ n d
mAU 50 000 mAU 150 000 j = 1 ij
25 000 75 000 2 （ E），具体公式为E ＝－ 1 Σ n P - ln P ，进而确定第i
3 i i ln n j = 1 ij ij
0 0 d
0 10 20 30 40 50 0 10 20 30 40 50 个指标的权重系数（ W），具体公式为W ＝ m i （m为指
i
i
t/min t/min Σ i = 1 d i
A.混合对照品溶液b B.供试品溶液
标数量）；最后，计算综合评分（ Y ），具体公式为Y＝100×
1：知母皂苷BⅡ；2：知母皂苷BⅢ；3：知母皂苷AⅢ。 Σ m d W 。
图2 皂苷类成分专属性试验的色谱图 i = 1 ij i
基于上述方法，计算得到芒果苷、新芒果苷、异芒果
2.3.3 方法学考察 苷、知母皂苷BⅡ、知母皂苷BⅢ、知母皂苷AⅢ、总黄酮
参考2025年版《中国药典》（三部）9101分析方法验 和总皂苷的 W i分别为 0.072、0.082、0.151、0.179、0.166、
证指导原则 进行方法学考察，结果显示，知母皂苷 B 0.159、0.083、0.108。通过标准化处理得到各指标的归一
[6]
Ⅱ、知母皂苷BⅢ和知母皂苷AⅢ的回归方程分别为y＝ 化值d ，最终确定综合评分Y＝（ d 芒果苷×0.072+d 新芒果苷×
i
ij
i
1 317x－47 779、y＝2 506.7x－86 050、y＝3 362.1x－114 854 0.082+d 异芒果苷×0.151+d 知母皂苷BⅡ×0.179+d 知母皂苷BⅢ×0.166+
i
i
i
（r≥0.999 1），线性范围分别为 50.68～152.04、51.70～ d 知母皂苷AⅢ ×0.159+d 总黄酮 ×0.083+d 总皂苷 ×0.108）×100。
i
i
i
155.10、52.83～158.49 μg/mL；精密度试验、重复性试验 该综合评分越高，表示盐炙工艺越优，后续实验均以此
及24 h稳定性试验的RSD均小于2.00%（n＝6）；平均加 作为评价标准。
样回收率分别为 100.24%、101.20%、99.76%（RSD 分别 2.7 Box-Behnken响应面法优化知母盐炙工艺
为 1.45%、1.93%、1.59%，n＝6）。以上均符合指导原则 2.7.1 Box-Behnken响应面实验设计
相关要求。 在前期单因素实验的基础上，以闷润时间（A）、炒制
2.4 总黄酮含量测定方法的建立 温度（B）和炒制时间（C）为影响因素，以综合评分为响应
[7]
采用 NaNO2-Al（NO3 ） 3 比色法 进行测定。参考 值，使用 Box-Behnken 响应面实验设计软件 Design Ex‐
2025 年版《中国药典》（三部）9101 分析方法验证指导原 pert 13.0设计3因素3水平实验，优化知母盐炙工艺。实
[6]
则 进行方法学考察，并以芦丁作为标准物质。结果显 验因素水平见表1，实验设计与结果见表2。
中国药房 2025年第36卷第19期 China Pharmacy 2025 Vol. 36 No. 19 · 2401 ·
