Page 48 - 《中国药房》2025年19期

by CCK-8 and EdU）， intracellular IL-10 levels， and Bcl-2 protein expression levels （P＜0.05）； while the cell apoptosis rate，
intracellular levels of IL-1β， TNF- α， and NF- κB， as well as the expression levels of NLRP3， TNF- α， Caspase-1， and Bax
proteins were significantly increased （P＜0.05）. Additionally， in the model group， the cells showed volume swelling， incomplete
cell membrane， nucleolar rupture， significant swelling and deformation of mitochondria， and severe vacuolization. Compared with
model group， the above quantitative indicators in the PLXT-Exo group and NZN-Exo group were significantly reversed （P＜0.05），
with large and round cell nuclei， intact nuclear membranes， and reduced mitochondrial vacuolization. CONCLUSIONS Peripheral
blood-derived Exo intervened by naozhenning can alleviate the injury of neuronal cells HT22 by inhibiting inflammatory responses
and cell apoptosis.
KEYWORDS Naozhenning； microglia； neuronal cells； exosomes； apoptosis； inflammation

创伤性脑损伤（traumatic brain injury，TBI）发生后 一生物科技有限公司），N30E 型纳米流式检测仪（厦门
的数分钟内，神经炎症反应便迅速开始；与此同时，脑内 福流生物科技有限公司）。
小胶质细胞也被激活，释放出大量的炎症因子，从而介 1.2 主要药品与试剂
导神经元损伤 。相关研究发现，中重度的 TBI 或反复 脑震宁处方包括生地黄、牡丹皮、当归、丹参、川芎、
[1]
发生的轻度TBI患者脑内小胶质细胞M1表型的持续存 炒酸枣仁、柏子仁、陈皮、竹茹、茯苓、地龙11种中药饮片
在会限制脑组织修复 。NOD 样受体热蛋白结构域相 （处方比例为 8∶6∶8∶15∶6∶10∶10∶10∶10∶10∶6），各饮片
[2]
关蛋白3（NOD-like receptor thermal protein domain asso‐ 购自北京同仁堂晋中药店有限责任公司，经山西中医药
ciated protein 3，NLRP3）作为神经炎症的关键驱动因子， 大学基础医学院王永辉教授鉴定均为真品。
被激活后可释放促炎因子[如白细胞介素1β（interleukin- 吡拉西坦片（批号 4201008，规格 0.4 g）购自东北制
1β，IL-1β）、肿瘤坏死因子 α（tumor necrosis factor-α， 药集团沈阳第一制药有限公司；无 Exo 胎牛血清（批号
TNF-α）等]，进一步激活小胶质细胞并诱导神经元凋 UR5020）购自上海宇玫博生物公司；DMEM高糖培养基
[3]
亡 。目前，针对 TBI 的治疗药物存在疗效有限且针对 （批 号 12491-015）购 自 美 国 Gibco 公 司 ；LPS（批 号
性较弱的不足，因此开发新的治疗TBI的药物具有重要 L8880）购自北京索莱宝科技有限公司；CCK-8 细胞增
意义。 殖-毒性检测试剂盒（批号 BS350B）购自北京兰杰柯科
脑震宁为山西名方，由地黄、牡丹皮、当归等11种中 技有限公司；EdU细胞增殖检测试剂盒、TUNEL细胞凋
药组成，具有活血通络、安神定志、化痰止呕的功效。本 亡检测试剂盒（批号分别为MA0424-1、MA0223）购自大
课题组前期研究发现，脑震宁含药血清对脂多糖（lipo‐ 连美仑生物技术有限公司；IL-1β、TNF-α、核因子 κB
polysaccharide，LPS）诱导的小胶质 BV-2 细胞的神经炎 （nuclear factor-κB，NF-κB）、IL-10 酶联免疫吸附试验
[4]
症具有改善作用 ，但具体作用机制尚不明确。外泌体 （ELISA）试剂盒（批号分别为 JL1844、JL10484、E-EL-
（exosomes，Exo）是机体细胞所分泌的一种膜性小囊泡， R0012c、JLW20242）均购自上海江莱生物科技有限公
是细胞间信息传递的重要介质 。近年来研究表明，Exo 司；荧光标记的 CD9、CD81 抗体（批号分别为 P40240、
[5]
具有天然靶向能力，是良好的天然新型药物递送系统， HY-P74264）购自美国 MedChemExpress 公司；兔源 β-肌
其中来自血液的Exo具有天然的脑靶向能力，能够通过 动蛋白（β-actin）多克隆抗体（批号 AP0060）购自安诺伦
转铁蛋白受体介导的内吞作用穿过血脑屏障（blood- （北京）生物科技有限公司；兔源甘油醛-3-磷酸脱氢酶
[6―7]
brain barrier，BBB） 。基于此，本研究以小胶质 BV-2 （glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH）多
细胞诱导的神经元 HT22 细胞损伤模型模拟 TBI，并考 克隆抗体（批号 GB11002-50）购自武汉赛维尔生物科技
察脑震宁干预外周血来源Exo对该模型的影响，以期为 有限公司；兔源 TNF-α 多克隆抗体（批号 300-01A）购自
研发更精准、高效的TBI治疗药物提供参考。 美国 PeproTech 公司；鼠源胱天蛋白酶 1（Caspase-1）、兔
1 材料 源 NLRP3 多克隆抗体（批号分别为 Z32358、AF9135）购
1.1 主要仪器 自江苏亲科生物研究中心有限公司；兔源B细胞淋巴瘤
本研究所用主要仪器有 ImageQuant LAS500 型化 2（B-cell lymphoma-2，Bcl-2）多 克 隆 抗 体（ 批 号
学发光仪（美国Alpha Innotech公司），Megafuge 8R型低 ab182858）购自英国Abcam公司；鼠源Bcl-2相关X蛋白
温高速离心机、Varioskan LUX 型多功能全波长酶标仪 （Bcl-2-associated X protein，Bax）单 克 隆 抗 体（批 号
（美国 Thermo Fisher Scientific 公司），Ts2R 型倒置荧光 50599-2-Ig）购自美国 Proteintech 公司；山羊抗兔免疫球
显微镜（日本 Nikon 公司），HT7800 型透射电子显微镜 蛋白 G 二抗、山羊抗鼠免疫球蛋白 G 二抗（批号分别为
（日本 Hitachi 公司），DYY-6C 型电泳和转膜仪（北京六 BA1055、BA1050）购自武汉博士德生物工程有限公司。

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