Page 46 - 《中国药房》2025年18期

表5 EGCG联合仑伐替尼对5种肝癌细胞中PTEN、caspase-3蛋白表达的影响（x±s，n＝3）
HepG2细胞 SMMC-7721细胞 Huh-7细胞 SNU-368细胞 SNU-739细胞
组别
PTEN caspase-3 PTEN caspase-3 PTEN caspase-3 PTEN caspase-3 PTEN caspase-3
对照组 100.08±2.56 100.25±4.39 101.84±3.96 87.34±2.08 104.35±2.55 100.25±3.49 108.34±2.46 93.31±4.24 110.84±2.18 91.32±3.57
仑伐替尼组 145.54±4.46 a 190.57±3.07 a 143.58±2.18 a 183.62±3.11 a 156.48±4.98 a 188.59±3.54 a 145.61±2.77 a 194.54±2.85 a 162.21±2.52 a 174.69±2.56 a
EGCG+仑伐替尼组 242.42±3.71 ab 292.81±4.37 ab 240.25±4.65 ab 291.81±3.24 ab 250.94±4.39 ab 290.82±2.76 ab 249.71±4.56 ab 282.88±2.52 ab 242.55±2.34 ab 300.74±2.46 ab
a：与对照组比较，P＜0.05；b：与仑伐替尼组比较，P＜0.05。
3.4 激活 PI3K/Akt 信号通路对 EGCG 增敏作用的 肿瘤细胞耐药的发生过程中具有重要作用，是调控细胞
[8]
影响 增殖、分化、生存及凋亡的关键通路之一 。PI3K 的激
EGCG+仑伐替尼+IGF-1组HepG2细胞的克隆形成 活可催化磷脂酰肌醇 4，5-二磷酸（phosphatidylinositol
数、增殖率及侵袭数均显著高于 EGCG+仑伐替尼组和 4，5-bisphosphate，PIP2）转化为 PIP3，进而募集 Akt 至细
仑伐替尼组（P＜0.05），但上述指标与对照组比较差异 胞膜并诱导其磷酸化，从而通过调控下游靶点来调节
均无统计学意义（P＞0.05）。结果见表 6（限于篇幅，细 mTOR、P70S6K、4EBP 的活性，并间接维持抗凋亡蛋白
[22]
胞克隆形成、增殖、侵袭情况的相关图示可扫描本文首 Bcl-2的功能 。其中，mTOR作为重要的细胞代谢调节
页二维码查看“增强出版”板块中的附图4）。 因子，可促进肿瘤细胞生长并诱导代谢重编程；P70S6K
表6 激活 PI3K/Akt 信号通路对 EGCG 增敏作用的影 和 4EBP 为 mTOR 下游靶点，主要参与相关 mRNA 翻译
响（x±s，n＝3） 及细胞周期进程的调控；Bcl-2是典型的抗凋亡蛋白，可
[22]
组别 克隆形成数/个 增殖率/% 侵袭数/个 抑制线粒体通路介导的细胞凋亡 。此外，PTEN 为通
对照组 150.11±2.06 70.12±1.73 245.65±2.42 路上游负调控因子，可去磷酸化 PIP3、拮抗 PI3K 活性，
仑伐替尼组 123.55±2.93 ᵃ 38.23±1.73 ᵃ 180.24±2.56 ᵃ 是重要的肿瘤抑制因子之一；caspase-3则是细胞凋亡的
EGCG+仑伐替尼组 51.12±2.61 ᵃᵇ 33.45±1.59 ᵃᵇ 89.15±1.53 ᵃᵇ
EGCG+仑伐替尼+IGF-1组 160.23±2.42 ᵇᶜ 65.23±2.83 ᵇᶜ 255.14±2.95 ᵇᶜ 关键执行酶，其活化形式 cleaved caspase-3 可直接介导
a：与对照组比较，P＜0.05；b：与仑伐替尼组比较，P＜0.05；c：与 细胞结构蛋白降解，引发典型凋亡过程，上调 cleaved
EGCG+仑伐替尼组比较，P＜0.05。 caspase-3 的表达是抗肿瘤药物诱导肿瘤细胞凋亡的主
4 讨论 要机制之一 。
[23]
据统计，2023年我国肝癌新发病例超过40万，同时 本研究在验证EGCG增敏作用的基础上，从转录水
约有 30 万患者死于肝癌 。仑伐替尼是针对肝癌的一 平、蛋白表达及空间定位等角度检测了PI3K/Akt信号通
[20]
线靶向治疗药物，主要通过抑制致癌性受体酪氨酸激酶 路相关基因及蛋白的表达。结果显示，仑伐替尼、
[1]
信号通路来发挥作用 。尽管仑伐替尼可显著延长肝癌 EGCG+仑伐替尼均可显著抑制肝癌细胞的存活和增殖，
患者的中位总生存时间，但约有60%的患者在1年内发 减弱其克隆形成和侵袭的能力，且联合EGCG可增加肝
[21]
生耐药，从而导致该药的临床应用受限 。因此，如何 癌细胞对仑伐替尼的敏感性。RT-qPCR 和 Western blot
增强肝癌细胞对仑伐替尼的敏感性是肝癌治疗领域的 实验结果显示，仑伐替尼组 HepG2 细胞中 PI3K、Akt、
重要研究方向之一。 mTOR、P70S6K、4EBP mRNA 和 mTOR、Bcl-2 蛋白的表
已有研究表明，肝癌细胞对仑伐替尼耐药的发生与 达，以及 PI3K、Akt 蛋白的磷酸化水平均较对照组显著
PI3K/Akt信号通路密切相关。研究指出，仑伐替尼可通 下调，PTEN mRNA和cleaved caspase-3蛋白的表达较对
过靶向抑制多种受体来抑制PI3K/Akt信号通路，从而发 照组显著上调；且 EGCG+仑伐替尼组上述指标的变化
挥抗肿瘤作用，这些受体包括血管内皮生长因子受体 较仑伐替尼组更为明显。免疫荧光实验结果显示，仑伐
1～3（vascular endothelial growth factor receptor 1-3， 替尼组 5 种肝癌细胞中 PTEN、caspase-3 蛋白的表达均
VEGFR1-3）、成纤维细胞生长因子受体 1～4（fibroblast 较对照组显著上调，且EGCG+仑伐替尼组5种细胞中上
growth factor receptor 1-4，FGFR1-4）、血小板衍生生长 述蛋白的表达均较仑伐替尼组进一步上调。这提示仑
因子受体α和重排转录因子受体等 。此前已有研究证 伐替尼的抗肿瘤作用可能与抑制 PI3K/Akt 信号通路激
[22]
实，EGCG 能通过上调 PTEN 的表达来抑制 PI3K/Akt 信 活有关，而EGCG可在转录及蛋白水平上协同抑制该信
号通路的磷酸化，继而抑制 mTOR，从而抑制肿瘤细胞 号通路。通过分析EGCG的结构发现，其B环羟基可通
[23]
生长并促进凋亡 。基于此，本研究选择了 5 种人肝癌 过氢键与 Akt 激酶位点结合，D 环的没食子酰基也可阻
细胞（经预实验证实，上述细胞均可表达 VEGFR2、 断 PI3K 与底物结合，从而直接抑制该信号通路关键酶
[24]
FGFR1，具有仑伐替尼主要作用靶点），初步探讨EGCG 的激活 。为进一步验证 EGCG 增敏作用是否与 PI3K/
能否通过抑制 PI3K/Akt 信号通路来增强肝癌细胞对仑 Akt信号通路有关，本研究引入了PI3K激动剂IGF-1，结
伐替尼的敏感性。 果显示，EGCG+仑伐替尼+IGF-1组HepG2细胞中PI3K/
PI3K/Akt信号通路在多种恶性肿瘤的发生、发展及 Akt 信号通路被阻断后，细胞存活率、增殖率和克隆形

· 2260 · China Pharmacy 2025 Vol. 36 No. 18 中国药房 2025年第36卷第18期