Page 57 - 《中国药房》2025年17期
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increased （P＜0.05）， while the proliferation inhibition rate， T cell killing rate， and the levels of IFN-γ and IL-2 were significantly
          decreased （P＜0.05）.  CONCLUSIONS  L.  barbarum  polysaccharides  may  inhibit  the  proliferation，  migration，  and  immune  escape
          of oral cancer cells by suppressing TIM3/Gal-9 signaling pathway.
          KEYWORDS    Lycium barbarum polysaccharides； TIM3； galectin-9； oral cancer； proliferation； migration； immune escape



              口腔癌是指发生在唇、牙龈、舌等部位的恶性肿瘤，                        分别为BB-4202、BB-4201）均购自上海贝博生物科技有
                              [1]
          90% 以上为鳞状细胞癌 。作为常见肿瘤，其发病率和                         限公司；干扰素γ（interferon-γ，IFN-γ）、白细胞介素2（in‐
          死亡率较高，新发病例占所有癌症的2%               [1―2] 。据统计，由      terleukin-2，IL-2）酶联免疫吸附测定（ELISA）试剂盒（批
          于其早期症状隐匿，全球超半数口腔癌患者确诊时已处                           号分别为97024ES96、97029ES96）均购自翌圣生物科技
          于晚期，尽管采取了手术、放化疗等手段进行治疗，患者                         （上海）有限公司；兔抗人吲哚胺2，3-双加氧酶1（indole‐
          的总生存期仍未得到明显改善，5 年生存率仅 40% 左                        amine 2，3-dioxygenase 1，IDO1）、程序性死亡受体配体1
          右 [3―4] 。因此，探索新型靶向治疗策略对口腔癌的治疗                     （programmed death-ligand 1，PD-L1）、TIM3、Gal-9、甘油
          具有重要意义。                                            醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）抗体和山羊抗兔免疫球蛋白
              枸杞多糖是枸杞的重要功能成分，具有调节免疫、                         G（IgG）二 抗（ 批 号 分 别 为 ab211017、ab205921、
                                                       [6]
                        [5]
          抗癌等多种活性 ，且可促进人舌鳞状癌细胞的凋亡 。                          ab241332、ab314081、ab9485、ab205718）均 购 自 英 国
          T 细胞免疫球蛋白黏蛋白 3（T cell immunoglobulin and           Abcam公司；TIM3、Gal-9、β-肌动蛋白（β-actin）的引物均
          mucin domain-containing protein 3，TIM3）为负性免疫调      由生工生物工程（上海）股份有限公司设计并合成。
          节因子，可与半乳糖凝集素9（galectin-9，Gal-9）结合，从                1.3 细胞
          而调控免疫功能；且 TIM3/Gal-9 信号通路与癌症（包括                        人口腔癌 KB、CAL27 细胞均购自美国 ATCC 公司
                                                  [7]
          前列腺癌、乳腺癌、头颈癌等）的发生密切相关 。已有                         （批号分别为21A11C21L11、CRL-2095）。
          研究发现，TIM3/Gal-9 信号通路在口咽、头颈部鳞状细                     2 方法
          胞癌中发挥着重要作用，在人乳头瘤病毒阳性的口咽、                           2.1 细胞培养
                                     +
          头颈部鳞状细胞癌患者中，CD4  T 细胞内的 Gal-9 表达                       取 KB、CAL27 细胞分别接种于 DMEM 培养基中
          量增加 。近年的研究表明，下调 TIM3/Gal-9 信号通路                   （含有 10% 胎牛血清、1% 青霉素/链霉素），并将其放入
                [8]
          可抑制肺癌细胞免疫逃逸，而枸杞多糖可抑制胆囊癌细                           培养箱内（温度为 37 ℃，CO2浓度为 5%）进行培养。在
          胞的免疫逃逸      [9―10] 。因此，笔者推测枸杞多糖也可能通                此期间，培养液需定时更换，并使用对数生长期细胞进
          过调控 TIM3/Gal-9 信号通路来影响口腔癌细胞的免疫                     行后续实验。
          逃逸。基于以上背景，本研究主要探讨枸杞多糖对口腔                           2.2 枸杞多糖给药浓度筛选
          癌细胞增殖、迁移和免疫逃逸的影响，并从 TIM3/Gal-9                         将KB、CAL27细胞接种于96孔板中，密度为3×10                3
          信号通路角度出发探索其可能的作用机制，以期为临床                           个/孔。实验设置不同质量浓度（50、100、200、400、800
          有效治疗口腔癌提供参考。                                       μg/mL ）的枸杞多糖组、对照组（含细胞和空白培养
                                                                   [7]
          1 材料                                               基），每组设置6个复孔；同时设置空白组（不含细胞，仅
          1.1 主要仪器                                           含空白培养基）。将细胞置于培养箱内进行常规培养，
              XSP-17C 型倒置显微镜购自上海光密仪器有限公                      24 h后加入枸杞多糖或空白培养基，继续培养48 h，加入
          司；RMR-2208L 型酶标仪购自南京烔创科技有限公司；                      CCK-8溶液（10 μL/孔）进行培养，1 h后测定各孔吸光度
          BB15型细胞培养箱购自美国Thermo Fisher Scientific公           （A）值，并计算细胞存活率。细胞存活率（%）＝（实验组
          司；QuantStudio 3 型 qRT-PCR 仪购自美国 Applied Bio‐       A值－空白组A值）/（对照组A值－空白组A值）×100%。
                       ®
          systems公司；5200T型凝胶成像仪购自上海天能生命科                     2.3 细胞分组、培养
          学有限公司。                                                 将KB、CAL27细胞分别分为对照组、低浓度枸杞多
          1.2 主要药品与试剂                                        糖组、高浓度枸杞多糖组、pcDNA-NC 组、pcDNA-TIM3
              枸杞多糖对照品（批号 wkq-08032，纯度 98%）购自                 组、高浓度枸杞多糖+pcDNA-NC 组、高浓度枸杞多糖+
          四 川 维 克 奇 生 物 科 技 有 限 公 司 ；pcDNA-NC 质 粒 、          pcDNA-TIM3组，每组设置6个复孔。其中，对照组进行
          pcDNA-TIM3 质 粒（ 批 号 分 别 为 MG53241-UT、              正常培养；低浓度枸杞多糖组使用200 μg/mL的枸杞多
          HG10390-ACG）均购自北京义翘神州科技股份有限公                       糖处理 48 h；高浓度枸杞多糖组使用 400 μg/mL 的枸杞
          司；Lipofectamine 2000 试剂、DMEM 培养基（批号分别              多糖处理 48 h；pcDNA-NC 组、pcDNA-TIM3 组仅使用
          为 11668019、11965092）均 购 自 美 国 Thermo  Fisher       Lipofectamine 2000 试剂将 pcDNA-NC、pcDNA-TIM3 质
          Scientific公司；CCK-8、MTT细胞增殖检测试剂盒（批号                 粒分别转染至 KB、CAL27 细胞 24 h；高浓度枸杞多糖+


          中国药房  2025年第36卷第17期                                              China Pharmacy  2025 Vol. 36  No. 17    · 2135 ·
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