Page 59 - 《中国药房》2025年17期

进行裂解以提取细胞中总蛋白，测定总蛋白浓度，经过 枸杞多糖组（P＜0.05）；与对照组、pcDNA-NC 组比较，
电泳（电压 120 V，电泳时间 120 min）、转膜（电流 200 pcDNA-TIM3组2种细胞的克隆形成率均显著升高（P＜
mA，转膜时间90 min）后，使用5%脱脂牛奶封闭；2 h后 0.05），增殖抑制率均显著降低（P＜0.05）；与高浓度枸杞
进行清洗，接着加入IDO1、PD-L1、TIM3、Gal-9、GAPDH 多糖组、高浓度枸杞多糖+pcDNA-NC组比较，高浓度枸
抗体（稀释比例均为 1∶1 000），4 ℃孵育过夜；加入二抗 杞多糖+pcDNA-TIM3 组 2 种细胞的克隆形成率均显著
（稀释比例为1∶5 000），室温孵育1 h；加入ECL显影，并 升高（P＜0.05），增殖抑制率均显著降低（P＜0.05）。结
使用 Image J 软件对各组条带的灰度值进行分析，以目
果见表3、图1。
的蛋白与内参蛋白（GAPDH）条带灰度值的比值表示目
表3 各组细胞的克隆形成率、增殖抑制率比较（x±s，
的蛋白的相对表达水平。 n＝6，%%）
2.10 统计学方法 KB细胞 CAL27细胞
组别
采用SPSS 25.0软件对数据进行统计分析。符合正 克隆形成率 增殖抑制率 克隆形成率 增殖抑制率
对照组 77.22±8.14 8.31±0.09 79.36±8.21 8.43±0.12
态分布的计量资料以x±s表示，多组间比较采用单因素
低浓度枸杞多糖组 60.16±6.48 a 21.54±2.82 a 58.35±6.06 a 23.16±2.86 a
方差分析，进一步的组间两两比较采用 LSD-t 检验。检 高浓度枸杞多糖组 41.53±4.72 ab 40.85±5.16 ab 39.42±4.03 ab 42.38±5.09 ab
验水准α＝0.05。 pcDNA-NC组 76.45±7.63 8.25±0.08 80.12±8.35 8.39±0.11
pcDNA-TIM3组 92.78±9.35 ac 1.12±0.04 ac 95.16±9.41 ac 1.16±0.05 ac
3 结果 高浓度枸杞多糖+pcDNA-NC组 42.27±4.85 41.46±5.44 40.38±4.11 43.11±5.02
3.1 不同浓度枸杞多糖对口腔癌细胞存活率的影响 高浓度枸杞多糖+pcDNA-TIM3组 73.36±7.51 de 14.63±2.78 de 75.14±7.82 de 16.03±2.80 de
与对照组比较，不同质量浓度枸杞多糖组 KB、 a：与对照组比较，P＜0.05；b：与低浓度枸杞多糖组比较，P＜0.05；
c：与pcDNA-NC组比较，P＜0.05；d：与高浓度枸杞多糖组比较，P＜
CAL27细胞的存活率均显著降低（P＜0.05），结果见表2。
0.05；e：与高浓度枸杞多糖+pcDNA-NC组比较，P＜0.05。
综合考虑在保证具有显著抑制细胞活性的作用的同时，
3.3 枸杞多糖对口腔癌细胞迁移、侵袭的影响
避免过高质量浓度对细胞造成毒性破坏，本研究选择了
与对照组比较，低、高浓度枸杞多糖组2种细胞的划
在细胞活性被抑制约 50% 时的质量浓度 400 μg/mL 作
痕愈合率和侵袭细胞数均显著降低/减少（P＜0.05），且
为高浓度，以及 1 个具有明显抑制效果的中间质量浓
高浓度枸杞多糖组较低浓度枸杞多糖组降低/减少得更
度 200 μg/mL作为低浓度，进行后续相关研究。
明显（P＜0.05）；与对照组、pcDNA-NC 组比较，pcDNA-
表2 各组细胞的存活率比较（x±s，n＝6，%%）
TIM3 组 2 种细胞的划痕愈合率和侵袭细胞数均显著升
组别 KB细胞 CAL27细胞
对照组 98.96±0.74 99.26±0.85 高/增加（P＜0.05）；与高浓度枸杞多糖组、高浓度枸杞多
50 μg/mL枸杞多糖组 85.64±7.33 a 88.62±7.52 a 糖+pcDNA-NC 组比较，高浓度枸杞多糖+pcDNA-TIM3
100 μg/mL枸杞多糖组 74.61±6.87 a 76.59±8.01 a
200 μg/mL枸杞多糖组 59.84±6.12 a 62.34±6.57 a 组 2 种细胞的划痕愈合率和侵袭细胞数均显著升高/增
400 μg/mL枸杞多糖组 43.92±5.05 a 45.15±5.32 a 加（P＜0.05）。结果见图2、图3和表4。
800 μg/mL枸杞多糖组 36.15±4.26 a 39.62±4.67 a
3.4 枸杞多糖对口腔癌细胞免疫逃逸的影响
a：与对照组比较，P＜0.05。
3.2 枸杞多糖对口腔癌细胞增殖的影响 与对照组比较，低、高浓度枸杞多糖组2种细胞的T
与对照组比较，低、高浓度枸杞多糖组2种细胞的克 细胞杀伤率和 IFN-γ、IL-2 水平均显著升高（P＜0.05），
隆形成率均显著降低（P＜0.05），增殖抑制率均显著升 IDO1、PD-L1蛋白表达水平均显著降低（P＜0.05），且高
高（P＜0.05），且高浓度枸杞多糖组的作用强于低浓度 浓度枸杞多糖组上述指标变化较低浓度枸杞多糖组更

KB细胞

CAL27细胞

A.对照组 B.低浓度枸杞多糖组 C.高浓度枸杞多糖组 D. pcDNA-NC组 E. pcDNA-TIM3组 F.高浓度枸杞多糖+ G.高浓度枸杞多糖+
pcDNA-NC组 pcDNA-TIM3组
图1 各组细胞克隆形成实验结果（培养皿直径：60 mm）

中国药房 2025年第36卷第17期 China Pharmacy 2025 Vol. 36 No. 17 · 2137 ·