Page 61 - 《中国药房》2025年17期

表5 各组细胞的 T 细胞杀伤率和 IFN-γ、IL-2 水平比 表6 各组细胞中 TIM3、Gal-9 mRNA 表达水平比较
较（x±s，n＝6） （x±s，n＝6）
KB细胞 CAL27细胞 组别 KB细胞 CAL27细胞
组别 T细胞杀伤 T细胞杀伤 TIM3 mRNA Gal-9 mRNA TIM3 mRNA Gal-9 mRNA
IFN-γ/（ng/L） IL-2/（ng/L） IFN-γ/（ng/L） IL-2/（ng/L）
率/% 率/% 对照组 0.97±0.10 1.00±0.11 0.98±0.11 1.01±0.10
对照组 14.03±1.56 26.14±3.06 28.57±3.41 15.21±1.62 27.35±3.11 29.39±3.52 低浓度枸杞多糖组 0.58±0.05 a 0.61±0.07 a 0.56±0.05 a 0.59±0.06 a
低浓度枸杞多糖组 28.72±3.01 32.82±3.74 35.76±3.88 29.51±3.20 34.62±3.81 36.81±3.91 a 高浓度枸杞多糖组 0.26±0.03 ab 0.32±0.04 ab 0.24±0.03 ab 0.30±0.03 ab
a
a
a
a
a
ab
高浓度枸杞多糖组 45.54±4.62 41.54±4.81 46.62±5.06 46.89±4.71 42.39±4.79 47.73±5.13 ab pcDNA-NC组 0.99±0.11 1.02±0.13 1.00±0.09 1.02±0.11
ab
ab
ab
ab
pcDNA-NC组 13.86±1.51 25.69±2.85 27.35±3.29 14.62±1.53 26.81±2.89 28.41±3.25 pcDNA-TIM3组 1.31±0.15 ac 1.38±0.17 ac 1.33±0.16 ac 1.41±0.18 ac
ac
ac
ac
pcDNA-TIM3组 6.79±0.60 13.24±1.51 15.34±1.63 ac 6.53±0.61 12.16±1.43 14.25±1.65 ac 高浓度枸杞多糖+pcDNA-NC组 0.23±0.03 0.30±0.03 0.21±0.04 0.28±0.03
ac
高浓度枸杞多糖+ 47.60±4.87 41.96±4.84 46.25±4.98 48.03±4.89 43.15±4.90 48.11±5.02 高浓度枸杞多糖+pcDNA-TIM3组 0.85±0.09 de 0.81±0.08 de 0.87±0.08 de 0.79±0.08 de
pcDNA-NC组 a：与对照组比较，P＜0.05；b：与低浓度枸杞多糖组比较，P＜0.05；
高浓度枸杞多糖+ 32.37±3.43 29.08±3.15 30.14±3.52 31.42±3.39 28.36±3.08 29.74±3.46 de c：与pcDNA-NC组比较，P＜0.05；d：与高浓度枸杞多糖组比较，P＜
de
de
de
de
de
pcDNA-TIM3组
0.05；e：与高浓度枸杞多糖+pcDNA-NC组比较，P＜0.05。
a：与对照组比较，P＜0.05；b：与低浓度枸杞多糖组比较，P＜0.05； 进口腔鳞状细胞癌细胞的迁移、侵袭和增殖 。在接受
[14]
c：与pcDNA-NC组比较，P＜0.05；d：与高浓度枸杞多糖组比较，P＜
0.05；e：与高浓度枸杞多糖+pcDNA-NC组比较，P＜0.05。 抗程序性死亡受体 1 治疗的口腔鳞状细胞癌患者中，
[15]
3.5 枸杞多糖对口腔癌细胞中 TIM3、Gal-9 mRNA 及 IFN-γ和IL-2水平均显著升高 。此外，IDO1已被筛选
其蛋白表达的影响 为口腔鳞状细胞癌特异性的新型免疫相关因子；而 PD-
[16]
与对照组比较，低、高浓度枸杞多糖组 2 种细胞中 L1表达与免疫细胞浸润相关 。本研究结果显示，使用
TIM3、Gal-9 mRNA及其蛋白表达水平均显著降低（P＜ 不同质量浓度枸杞多糖干预KB、CAL27细胞后，细胞克
0.05），且高浓度枸杞多糖组2种细胞中上述指标水平均 隆形成率、侵袭细胞数及划痕愈合率均显著下降/减少，
较低浓度枸杞多糖组降低得更明显（P＜0.05）；与对照 增殖抑制率均显著升高；此外，T细胞杀伤率、免疫相关
组 、pcDNA-NC 组 比 较 ，pcDNA-TIM3 组 2 种 细 胞 中 因子（包括IFN-γ、IL-2）水平均显著升高，免疫逃逸标志
TIM3、Gal-9 mRNA及其蛋白表达水平均显著升高（P＜ 物IDO1和PD-L1的蛋白表达水平均显著降低。这提示
0.05）；与高浓度枸杞多糖组、高浓度枸杞多糖+pcDNA- 枸杞多糖对口腔癌细胞增殖、迁移及免疫逃逸均具有明
NC 组比较，高浓度枸杞多糖+pcDNA-TIM3 组 2 种细胞 显的抑制作用。
中 TIM3、Gal-9 mRNA 及其蛋白表达水平均显著升高 本研究进一步分析发现，使用枸杞多糖干预 KB、
（P＜0.05）。结果见图5、表6。 CAL27 细胞后，细胞中 TIM3、Gal-9 mRNA 及其蛋白表
2.0 达水平均显著降低。其中，TIM3属于一种免疫检查点，
Ⅰ
Ⅱ
1.5
Ⅳ
TIM3 60 kDa 蛋白表达水平 1.0 Ⅲ 可在多种免疫细胞内表达，在免疫应答和免疫耐受中发
[17]
Ⅴ
挥重要作用 。Gal是一类由共同氨基酸序列定义的凝
Gal-9 40 kDa 0.5 Ⅵ
Ⅶ
GAPDH 37 kDa 0 集素家族，可参与调控细胞生长、凋亡和固有/获得性免
TIM3 Gal-9
Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ⅴ Ⅵ Ⅶ B. KB细胞相关蛋白表达水平柱形图 疫等多种生物学功能；Gal-9 作为 Gal 家族一员，具有多
A. KB细胞相关蛋白表达电泳图 （x±s，n＝6） 种生物学功能（如调控细胞增殖、迁移、侵袭）和强大的
2.0
Ⅰ 免疫调节作用 。当TIM3被其配体Gal-9激活时，可通
[18]
Ⅱ
1.5
Ⅳ
TIM3 60 kDa 蛋白表达水平 1.0 Ⅲ 过负向调节T细胞等效应细胞功能，对免疫系统产生抑
Ⅴ
Gal-9 40 kDa 0.5 Ⅵ 制作用；二者共同构成的“轴”可参与调节肿瘤生长、自
Ⅶ
GAPDH 37 kDa 0 [19]
TIM3 Gal-9 身免疫以及感染期间的免疫应答 。已有研究发现，阻
Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ⅴ Ⅵ Ⅶ D. CAL27细胞相关蛋白表达水平柱
[20]
C. CAL27细胞相关蛋白表达电泳图 形图（x±s，n＝6） 断 TIM3/Gal-9 信号通路可有效抑制胶质瘤进展 。基
Ⅰ：对照组；Ⅱ：低浓度枸杞多糖组；Ⅲ：高浓度枸杞多糖组；Ⅳ： 于这一生物学背景及文献证据，为验证TIM3/Gal-9信号
pcDNA-NC组；Ⅴ：pcDNA-TIM3组；Ⅵ：高浓度枸杞多糖+pcDNA-NC
通路在枸杞多糖抗肿瘤作用中的关键地位，本研究在高
组；Ⅶ：高浓度枸杞多糖+pcDNA-TIM3组；a：与对照组比较，P＜0.05；
b：与低浓度枸杞多糖组比较，P＜0.05；c：与pcDNA-NC组比较，P＜ 浓度枸杞多糖作用基础上，转染pcDNA-TIM3质粒以构
0.05；d：与高浓度枸杞多糖组比较，P＜0.05；e：与高浓度枸杞多糖 建 TIM3 过表达模型，并设置高浓度枸杞多糖+pcDNA-
+pcDNA-NC组比较，P＜0.05。 NC组作为空载体对照。结果显示，TIM3过表达可显著
图5 各组细胞中TIM3、Gal-9蛋白表达检测结果 减弱高浓度枸杞多糖对 KB、CAL27 细胞增殖、迁移、侵
4 讨论 袭及免疫逃逸的抑制作用，具体表现为细胞的克隆形成
枸杞作为传统药食两用植物，具有养肾生精、祛病 率、划痕愈合率及侵袭细胞数显著升高/增加，同时细胞
[12]
延年之功效 ，其活性成分枸杞多糖已被证实具有显著 增殖率、T细胞杀伤率及免疫因子IFN-γ、IL-2水平降低，
[13]
的抗肿瘤活性 。IFN-γ 能够上调 PD-L1 表达，并能促 免疫逃逸标志物IDO1、PD-L1蛋白表达水平升高。这进
中国药房 2025年第36卷第17期 China Pharmacy 2025 Vol. 36 No. 17 · 2139 ·