Page 78 - 《中国药房》2025年16期

示，DOX 原料药在 0.5 h 时的释放已超过 95%，1 h 内几 2.7 细胞摄取情况考察
乎释放完全；DOX-LPNs 在 4 h 时的累积释放量约为 本研究以荧光探针 COU 替代制剂中的 DOX，使用
73%，24 h时的累积释放率可达90%左右，48 h时近乎释 激光共聚焦显微镜考察肠细胞对制剂中药物的摄取情
放完全；RGD@DOX-LPNs 的体外释放特性与 DOX- 况。取处于对数生长期的 Caco-2 细胞，按 25 000 个/孔
LPNs相似，提示RGD的修饰对纳米粒中DOX的释放几 接种于共聚焦培养皿中，于37 ℃、5%CO2下培养过夜至
乎无影响，DOX-LPNs 和 RGD@DOX-LPNs 均有明显的 贴壁。将细胞分为 COU-LPNs 组和 RGD@COU-LPNs
缓释特性。 组，每组设置 3 个复孔。各组细胞分别加入含 COU-
150 DOX原料药 LPNs 和 RGD@COU-LPNs（COU 的浓度均为 1 μg/mL，
DOX-LPNs 药物浓度参考前期预实验结果设置）的培养基，培养 1
RGD@DOX-LPNs h；弃去培养基，细胞用PBS清洗3次，以4′，6-二脒基-2-
100
累积释放量/% 50 苯基吲哚（DAPI）染核 15 min；弃去染液，细胞用 PBS 清
洗 3 次后，封片，使用激光共聚焦显微镜观察，再以
Image J 软件进行荧光强度（绿色）定量分析，以比较
0 Caco-2 细胞对不同制剂中 COU 的摄取量（荧光强度与
0 20 40 60
时间/h 摄取量成正比）。结果（图 5）显示，与 COU-LPNs 组
图3 DOX原料药和纳米粒的体外释放曲线 （1.00±0.04）比 较 ，RGD@COU-LPNs 组 的 荧 光 强 度
2.6 体外黏液扩散考察 （1.23±0.02）显著升高（P＜0.05），提示经 RGD 修饰后，
本研究以荧光探针 COU 替代制剂中的 DOX，使用 Caco-2细胞对制剂中药物的摄取明显增加。
硅胶管旋转法 考察制剂在黏液中的体外扩散行为。取
[8]
小肠黏液 600 μL，加至一端封口的硅胶管（直径 5 mm）
中，使黏液层高度约为 30 mm。将硅胶管置 37 ℃水浴 COU-LPNs
中平衡 15 min，备用。取 COU-LPNs、RGD@COU-LPNs
各 100 μL，轻轻加至黏液层表面，封口后，于 37 ℃水浴
中振荡12 h，再置于－80 ℃下冷冻4 h。从加样端开始，
将其均匀切成2 mm厚的薄片（共15段），并迅速转移至
不同离心管中，加乙腈 200 μL，超声 20 min 后以 13 400 RGD@COU-LPNs
r/min 离心 5 min，取各管上清液进行相对荧光强度检测
（用于表示上清液中COU的量，两者成正比），每样品平
行测定 3 次，并取第 1 段薄片的上清液进行 TEM 观察。 COU DAPI 合并
相对荧光强度检测结果（图4A）显示，COU-LPNs第1段 图5 Caco-2细胞对制剂中药物摄取的激光共聚焦图
薄片中COU的量显著低于同段RGD@COU-LPNs，而第 2.8 体内组织分布及胃肠道滞留研究
2～5 段薄片中 COU 的量均显著高于同段 RGD@COU- 本研究以示踪指示剂IR780替代制剂中的DOX，采
LPNs（P＜0.01），提示 COU-LPNs 更容易在黏液中扩散 用荧光成像法考察制剂在小鼠体内的组织分布和胃肠
和渗透，而经 RGD 修饰的 RGD@COU-LPNs 则因被黏 道 滞 留 情 况 。 将 小 鼠 分 为 IR780-LPNs 组 和
液“捕获”而在后续薄片中的量明显降低。TEM 观察结 RGD@IR780-LPNs 组 ，每 组 4 只 。 取 IR780-LPNs、
果（图4B）显示，在黏液作用下，纳米粒子出现一定的聚 RGD@IR780-LPNs 各适量，按 1 mg/kg（以 IR780 质量
集现象，但形态仍为近球形。 计，药物浓度参考前期预实验结果设置）的剂量灌胃，分
50 RGD@COU-LPNs 别于灌胃后4、8、24、48 h时将其麻醉、处死（每组每个时
a COU-LPNs
40 a 间点各1只），剖取心、肝、脾、肺、肾、胃和小肠，进行离体
相对荧光强度 30 a 组织/器官荧光成像观察并采用 Kuant Viber Lourmat 软
20
件进行图像分析，比较各组小鼠组织/器官的荧光强度
10 a （荧光强度与滞留量成正比）。结果（图 6）显示，与
a
0
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 IR780-LPNs比较，RGD@IR780-LPNs在小鼠心、肝、脾、
薄片片段
A.旋转硅胶管扩散实验结果（x±s，n＝3） B. 第1段薄片的TEM观察图 肺、肾中的离体组织荧光强度均更强，且后者显示出更
a：组间比较，P＜0.01。 强的胃肠道滞留性，与硅胶管旋转实验的检测结果
图4 硅胶管旋转实验结果和TEM观察图 一致。

· 2020 · China Pharmacy 2025 Vol. 36 No. 16 中国药房 2025年第36卷第16期