Page 55 - 《中国药房》2025年16期
P. 55

骨质疏松症（osteoporosis，OP）是以骨密度下降、骨                酸酶（alkaline phosphatase，ALP）试剂盒、抗酒石酸酸性
          结构受损为主要特征的代谢性疾病，是导致全球老年群                           磷酸酶（tartrate-resistant acid phosphatase，TRAP）检测试
                                  [1]
          体发生骨折的主要原因之一 。临床实践表明，OP起病                          剂盒（批号分别为20221106、20230105）均购自北京伊塔
          隐匿，多数患者在发生脆性骨折后才被确诊，使得其难                           生物科技有限公司；逆转录试剂盒、PCR扩增试剂盒（批
          以得到及时的对症治疗，严重影响患者的生活质量、增                           号 分 别 为 20221104、20230217）均 购 自 美 国 Thermo
          加其经济负担      [2―3] 。继发性 OP 通常由患者自身存在的               Fisher Scientific 公司；兔抗 RANK、RANKL、OPG、β-微
          其他代谢性疾病引起，其中糖尿病肾病是重要诱因之                            管蛋白（β-tubulin）抗体及辣根过氧化酶（HRP）标记的羊
          一。糖尿病肾病性 OP（diabetic nephropathy-related os‐       抗 兔 免 疫 球 蛋 白 G 二 抗（批 号 分 别 为 ab305233、
          teoporosis，DNOP）发病机制复杂，且随着患者糖尿病肾                   ab65024、ab73400、ab314069、ab205718）均 购 自 英 国
          病病程的进展，继发性OP的发生风险也随之升高，加之                          Abcam 公司；反转录酶、Taq DNA 聚合酶（批号分别为
          临床治疗困难，故 DNOP 是临床亟须攻克的重点问题                         AK3677、AK1085）均购自日本Takara公司；RIPA裂解液
          之一  [4―5] 。                                       （批号为20230223）购自上海碧云天生物技术有限公司；
              中医治疗DNOP具有独特的优势，其不仅可通过辨                        PCR所用引物由深圳华大基因股份有限公司合成。
                                                  [6]
          证分型进行对症治疗，而且具有较高的安全性 。金匮                           1.3 实验动物与饲料
          肾气丸由熟地黄、桂枝、炮附子、山药、山萸肉、茯苓、牡                             SPF级Wistar雌性大鼠84只，2月龄，体重约200 g，
          丹皮、泽泻组方而成，具有补肾固本、行气化水的功效。                          动物生产许可证号为SCXK（京）2024-0012，购自清华大
          中医理论认为，肾主骨生髓，金匮肾气丸以补肾阳、益精                          学实验动物中心。高糖高脂饲料和标准饲料均购自北
          血为核心，其改善骨代谢的作用可能与调节成骨细胞和                           京华阜康生物科技股份有限公司。所有动物均饲养于
                                             [7]
          破骨细胞平衡有关，但具体机制尚待验证 。核因子κB                          温度 20 ℃左右、相对湿度（50±10）%、每 12 h 光暗交替
          受体激活蛋白配体（receptor activator of NF-κB ligand，       的动物房内，自由摄食、饮水，适用性饲养1周后进行后
          RANKL）/核因子 κB 受体激活蛋白（receptor activator of         续实验。本研究方案已经通过甘肃中医药大学动物实
          NF-κB，RANK）/护骨因子（osteoprotegerin，OPG）信号通           验伦理委员会批准（编号SY2023-708）。
          路作为骨代谢的核心调控通路，在糖尿病及其并发症                            2 方法
         （如糖尿病肾病、继发性 OP）的发病过程中扮演着关键                          2.1 动物分组、造模与给药
              [8]
          角色 。基于此，本研究拟建立DNOP大鼠模型，探讨金                             将大鼠随机分为空白对照组，对照组，模型组，金匮
          匮肾气丸对模型大鼠的干预效果及潜在机制，以期为临                           肾气丸低、中、高剂量组（0.62、1.24、2.48 g/kg）和阳性对
          床DNOP的治疗提供参考。                                      照组（地舒单抗 3 mg/kg），每组 12 只。按下述方法构建
          1 材料                                               DNOP 模型   [9―10] ：模型组和各药物组大鼠以高糖高脂饲
          1.1 主要仪器                                           料喂养4周，同时饮用3%果糖溶液；空白对照组和对照
              本研究所用主要仪器包括 Horizon DXA 型全自动                   组以标准饲料喂养 4 周，同时正常饮水。随后，禁食 12
          双能 X 线骨密度测量仪（美国 Hologic 公司）、CFX96 型                h，模型组和各药物组大鼠腹腔注射 STZ 溶液（30 mg/
          聚合酶链式反应（PCR）仪（美国 Bio-Rad 公司）、Synergy               kg），空白对照组大鼠腹腔注射等体积生理盐水，对照组
          H1型酶标仪（美国BioTek公司）、Cary 3500型紫外-可见                 大鼠腹腔注射等体积柠檬酸钠缓冲液（0.1 mmol/L），每
          分光光度计（美国 Agilent 公司）、BX53 型显微镜（日本                  天1次，连续5 d。从注射的第3天起，连续3 d采集模型
          Olympus 公司）、FreeStyle Precision Neo 型血糖仪（美国        组和各药物组大鼠尾静脉血进行血糖检测，若血糖均不
          Abbott 公司）、Cobas e601 型化学发光免疫分析仪（瑞士                低于16.7 mmol/L，且出现多饮、多尿、体重下降等症状，
          Roche公司）等。                                         则视为糖尿病模型构建成功。接下来，空白对照组和对
          1.2 主要药品与试剂                                        照组大鼠以标准饲料、模型组和各药物组大鼠以高糖高
              金匮肾气丸（批号为 20230518，规格为每丸重 6 g）                 脂饲料继续喂养4周，若尿蛋白≥30 mg且尿糖为阳性，
          购自黑龙江葵花药业股份有限公司；地舒单抗注射液                            则视为糖尿病肾病模型构建成功；各组大鼠继续同法喂
          [阳性对照药，批号为220711A2，规格为60 mg（1.0 mL）/支              养 20 周后进行骨密度（bone mineral density，BMD）检
         （预充式注射器）]由美国 Amgen Manufacturing Limited            测，若模型组和各药物组大鼠BMD低于“对照组大鼠平
          LLC生产；链脲佐菌素（streptozotocin，STZ）、Trizol试剂           均BMD减去2.5倍对照组BMD的标准差”这一阈值，则
         （批号分别为MKCH2674、L2022008）均购自美国Sigma-                 视为 DNOP 模型构建成功。在剔除造模未成功的个体
          Aldrich 公司；骨钙素（osteocalcin，OC）酶联免疫吸附测              后，空白对照组，对照组，模型组，金匮肾气丸低、中、高剂
          定（ELISA）试剂盒（批号为 20230425）购自上海江莱生                   量组，阳性对照组各有大鼠12、12、10、11、10、11、11只。
          物科技有限公司；钙检测试剂盒（偶氮胂Ⅲ法）、磷检测                              DNOP造模成功后第2天，取各组大鼠，按如下方式
          试 剂 盒（磷 钼 酸 紫 外 法）（批 号 分 别 为 20220913、             进行干预    [10―12] ：金匮肾气丸各剂量组大鼠灌胃相应药液
          20221127）均购自上海博湖生物科技有限公司；碱性磷                       [以柠檬酸钠缓冲液（0.1 mmol/L）为溶剂]，其中中剂量


          中国药房  2025年第36卷第16期                                              China Pharmacy  2025 Vol. 36  No. 16    · 2001 ·
   50   51   52   53   54   55   56   57   58   59   60