Page 38 - 《中国药房》2025年16期

标准为差异倍数（fold change，FC）≥1.2 或 FC≤0.83，且 3 结果
P＜0.05。对差异表达蛋白进一步进行亚细胞定位、蛋 3.1 左归丸胚胎期干预对GDM孕鼠子代出生、存活数
白结构域分析、蛋白质-蛋白质相互作用（protein-protein 量及体重、体长的影响
interaction，PPI）网络构建及基因本体（gene ontology， 与空白组比较，模型组子鼠出生及存活数量有所下
GO）、京都基因和基因组数据库（Kyoto Encyclopedia of 降；与模型组比较，各给药组子鼠出生及存活数量有所

Genes and Genomes，KEGG）富集分析。 增加。与空白组比较，模型组子鼠体重、体长均显著减
2.8 子鼠胰腺组织中糖代谢相关蛋白表达检测 少（P＜0.05）；与模型组比较，阳性对照组和左归丸低、
采用 Western blot 法检测。分别从空白组、模型组、 中剂量组子鼠体重（左归丸低剂量组除外）和体长均显
阳性对照组、左归丸中剂量组中随机选取3只子鼠冷冻 著增加（P＜0.05）。结果见表2。
的胰腺组织，提取组织蛋白并用 BCA 法测定未变性蛋 表2 左归丸胚胎期干预对 GDM 孕鼠子代出生存活数
白浓度，然后进行蛋白变性、配胶、上样、电泳、转膜、封 量及体重、体长的影响
闭后，加入ApoA1、Slc27a1、Kng1、Atp1a2、Slc7a5、Slc3a2、 组别 出生数量/只 检测时存活数量/只 体重/g 体长/cm
空白组 74 60 50.26±1.70 12.51±0.43
Baat、Eif2s3、β-actin 一 抗（稀 释 比 例 分 别 为 1∶3 000、 模型组 55 43 21.72±1.23 a 8.67±0.50 a
1∶100 000、1∶100 000、1∶100 000、1∶100 000、1∶100 000、 阳性对照组 66 54 41.97±4.64 b 11.98±0.73 b
左归丸低剂量组 57 45 22.21±3.41 9.49±0.87 b
1∶100 000、1∶100 000、1∶100 000），4 °C 孵育过夜；隔日
左归丸中剂量组 63 51 35.25±3.15 b 11.24±0.68 b
用 TBST 缓冲液洗涤 3 次（每次 5 min）后，加入二抗（稀 左归丸高剂量组 59 46 21.25±1.29 8.58±0.41
释比例为1∶5 000），室温孵育30 min，再次用TBST缓冲 a：与空白组比较，P＜0.05；b：与模型组比较，P＜0.05。
液洗涤 3 次（每次 5 min），最后用 ECL 法显色。使用 3.2 左归丸胚胎期干预对 GDM 孕鼠子代 OGTT 的
AlphaEaseFC 软件分析蛋白条带的灰度值，以 β-actin 为 影响
内参计算目的蛋白表达量。 各组子鼠血糖均在灌胃葡萄糖溶液后 30 min 时最
2.9 子鼠胰腺组织中糖代谢相关基因表达检测 高，随后逐渐恢复至正常范围。与空白组比较，模型组

采用荧光定量 PCR 法检测。分别从空白组、模型 子鼠灌胃前和灌胃后30、60、120 min的血糖均显著升高
组、阳性对照组、左归丸中剂量组中选取3只子鼠冷冻的 （P＜0.05）；与模型组比较，各给药组子鼠灌胃前和灌胃
胰腺组织，提取总 RNA，检测 RNA 浓度后，逆转录合成 后30 min（左归丸高剂量组除外）、60 min（阳性对照组和
cDNA，于－20 ℃保存备用。以 cDNA 为模板进行基因 左归丸低、高剂量组除外）、120 min 的血糖均显著降低
表达定量。扩增条件为：95 °C预变性5 min；95 °C变性 （P＜0.05）。与空白组比较，模型组子鼠 AUC 显著升高
10 s，60 °C 退火延伸 30 s，共 40 个循环。以 β-actin 为内 （P＜0.05）；与模型组比较，各给药组子鼠AUC均显著降
参，采用 2 －ΔΔCt 法计算 ApoA1、Slc27a1、Kng1、Atp1a2、 低（P＜0.05）。结果见表3。
Slc7a5、Slc3a2、Baat、Eif2s3 mRNA的表达量，实验重复3 表3 左归丸胚胎期干预对GDM孕鼠子代OGTT的影
响（x±s，n＝12）
次。引物序列及产物长度见表1。
检测时存活数量/ 血糖/（mmol/L） AUC/
表1 待测基因的引物序列与产物长度 组别
只 0 min 30 min 60 min 120 min （mmol·h/L）
基因 正向引物序列（5′-3′） 反向引物序列（5′-3′） 产物长度/bp 空白组 60 4.17±0.46 8.67±1.28 5.90±0.52 5.13±0.60 742.65±55.75
ApoA1 GCCACTGTGTATGTGGATGC AACCCAGAGTGTCCCAGTTG 121 模型组 43 5.87±0.65 10.34±1.05 6.69±0.93 a 5.93±0.91 877.30±69.10 a
a
a
a
Slc27a1 GACGTGCTAGTGATGGACGA CTCCGTGGTGGATACGTTCT 96 阳性对照组 54 4.52±0.52 b 7.88±0.69 6.21±1.03 5.31±0.47 743.31±54.41 b
b
b
Kng1 ACTTCAAGGACGCTGAGGAA GAAACACCCGACACAGAGGT 152 左归丸低剂量组 45 4.94±0.53 b 9.01±0.78 6.78±1.10 4.86±0.72 796.00±60.65 b
b
b
Atp1a2 GATGAGATCCTCAGGGACCA CCCTCCACAATGATGAGCTT 77 左归丸中剂量组 51 4.70±0.28 b 8.90±1.00 5.97±0.77 b 4.70±0.40 746.88±46.10 b
b
b
Slc7a5 CTGGGAGTCATGTCCTGGAT AGGGTCATGACACACGTGAA 197 左归丸高剂量组 46 4.78±0.62 10.62±1.32 6.62±1.37 4.48±0.68 822.50±70.07 b
b
b
Slc3a2 GGCTCTGAGTTCTTGGTTGC GATCGCTGGTGGATTCAAGT 197 a：与空白组比较，P＜0.05；b：与模型组比较，P＜0.05。
Baat CGAACCTTTGAGGAAACTGC CTGGGCTATGGCTTGCTTAG 141
Eif2s3 AAGATCGACCCCACTTTGTG GGACCTTTGCTGCTTTCTTG 163 3.3 左归丸胚胎期干预对 GDM 孕鼠子代 FBG 及胰岛
β-actin TCAGCAAGCAGGAGTACGATG GTGTAAAACGCAGCTCAGTAACA 88 素相关指标的影响
2.10 统计学分析 与空白组比较，模型组子鼠 FBG、FINS 及 HOMA-
数据采用 SPSS 25.0 软件进行统计分析。数据以 IR 均显著升高（P＜0.05），ISI 显著降低（P＜0.05）；与模
x±s 表示，方差齐性时，多组间比较采用单因素方差分 型组比较，阳性对照组和左归丸各剂量组子鼠 FBG、
析，组间两两比较采用 LSD-t 检验；方差不齐时，则采用 FINS 及 HOMA-IR 均显著降低（P＜0.05），ISI 均显著升
Dunnett’s T3检验。检验水准α＝0.05。 高（P＜0.05）。结果见表4。
· 1984 · China Pharmacy 2025 Vol. 36 No. 16 中国药房 2025年第36卷第16期