Page 83 - 《中国药房》2025年14期
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的药理作用。目前，关于三化汤的研究主要集中于药理                           为溶剂，日剂量参考本课题组前期预实验结果设置，约
          作用方面。由于中药复方化学成分复杂，因此探讨其具                           为10倍成人临床等效剂量），空白组大鼠每天早晚各灌
          体成分及入血后的成分变化将有助于阐释整方的药效                            胃等体积生理盐水 1 次，连续 3 d。分别在末次给药后
          物质基础、解释其治疗作用的内在机制。本研究拟借助                           0.5、1、2 h时于眼眶静脉丛取血0.5 mL至抗凝管中，于室
          超高效液相色谱-四极杆飞行时间串联质谱（UHPLC-Q-                       温下以3 000 r/mim离心10 min，取上层血浆。取同组大
          TOF/MS）技术，以三化汤冻干粉、大鼠含药血浆为对象，                       鼠各时间点的血浆样品，等体积混合，即得空白血浆样
          对该方的化学成分及入血成分（含原型成分及代谢产                            品和含药血浆样品。将上述样品分装至冻存管中，于
          物）进行解析，以期为阐明三化汤的药效物质基础提供                           －80 ℃下冻存，备用。
          理论依据。                                              2.3 供试品溶液的制备
          1 材料                                               2.3.1 三化汤冻干粉供试品溶液
          1.1 主要仪器                                               称取三化汤冻干粉 0.5 g，置于具塞锥形瓶中，加入
              主要仪器包括Waters H-Class型超高效液相色谱仪                  50% 甲醇 10 mL，摇匀，超声（功率 300 W，频率 40 kHz）
                                             ®
         （美国Waters公司）、AB SCIEX Triple TOF  4600型高分           处理 30 min 使溶解；取溶液 2 mL，置于离心管中，以
          辨质谱仪（美国AB SCIEX公司）、ME104型电子天平[梅                    12 000 r/min离心5 min，取上清液，即得。
          特勒-托利多国际贸易（上海）有限公司]、KQ-300 BD 型                    2.3.2 空白血浆、含药血浆供试品溶液
          超声波清洗仪（昆山市超声仪器有限公司）、3K15 型高                            分别取“2.2”项下空白血浆样品 1 mL、含药血浆样
          速离心机（美国Sigma公司）、LGJ-100F型真空冷冻干燥                    品 2 mL，加入 3 倍体积的甲醇以沉淀蛋白，涡旋混匀 5
          机（北京松源华兴科技发展有限公司）等。                                min 后于 4 ℃下静置 20 min，再以 12 000 r/min 离心 15
          1.2 主要药品与试剂                                        min，取上清液，浓缩干燥后于－80 ℃下保存。分析前，
              药用大黄、厚朴、枳实、羌活饮片（批号分别为                          取上述干燥物，以 50% 甲醇复溶，涡旋混匀 5 min 后，以
          230407、230621、221208、220808）均购自上海康桥中药              12 000 r/min离心15 min，取上清液，即得。
          饮片有限公司，经该公司质检部门检测，均符合 2020 年                       2.4 色谱与质谱条件
          版《中国药典》（一部）有关规定。                                       以 Waters ACQUITY UPLC HSS T3（2.1 mm×150
              乙腈、甲醇为质谱纯，均购自美国Merck公司；甲酸                      mm，1.8 µm）为色谱柱，以乙腈（A）-0.1%甲酸溶液（B）为
          为质谱纯，购自上海阿拉丁生化科技股份有限公司；水                           流动相进行梯度洗脱（0～4 min，3%A；4～7 min，3%A→
          为纯净水，购自广州屈臣氏食品饮料有限公司。                              10%A；7～13 min，10%A→15%A；13～27 min，15%A→
          1.3 实验动物                                           25%A；27～40 min，25%A→40%A；40～46 min，40%A→
              SPF 级雄性 Wistar 大鼠 12 只，体重（250±20）g，由           90%A；46～49 min，90%A；49～49.1 min，90%A→3%A；
          上海必凯科翼生物科技有限公司提供，生产许可证号为                           49.1～52 min，3%A）；柱温为 30 ℃；流速为 0.3 mL/min；
          SCXK（沪）2023-0009。所有大鼠均饲养于室温 21～                    进样量为5 µL。
          26 ℃、相对湿度 40%～70%、每 12 h 明/暗交替的环境                      采用电喷雾电离源（electrospray ionization，ESI）进
          中。本研究方案已通过上海市浦东新区人民医院医学                            行正、负离子扫描；电离源温度为500 ℃；电离源电压分
          伦理委员会审批（批准文号2021-D-42）。                            别为5 000 V（正离子）、－4 500 V（负离子）；喷雾气压力
          2 方法                                               为 50 psi；辅助加热器压力为 50 psi；气帘气压力为 35
          2.1 三化汤冻干粉的制备                                      psi；一级质谱的扫描范围为 m/z 50～1 700，去簇电压为
              取枳实、羌活、厚朴饮片各 4 kg，混合，加水 128 L，                 100 V，碰撞电压为 10 V；二级质谱的扫描范围为 m/z
          加热回流提取 1 h（回流过程中，不断翻转，以保证饮片                        50～1 250，去簇电压为100 V，碰撞电压为±40 V。
          与水充分混合），待提取液冷却至室温后，加入药用大黄                          2.5 进样分析与数据采集、处理
          饮片4 kg，继续加热回流提取20 min，待提取液冷却后过                         取“2.3.1”“2.3.2”项下各供试品溶液，按“2.4”项下条
          滤，得滤液1；取药渣，加水96 L，同法加热回流提取1 h，                     件进样分析，记录色谱图及质谱信息。采用 Analyst TF
          待提取液冷却后过滤，得滤液2；合并滤液1、2，于 55 ℃                      1.7.1软件采集质谱数据，采用PeakView 1.2软件处理数
          下减压浓缩后冷冻干燥，得三化汤冻干粉3 891 g。                         据。结合自建的天然产物高分辨质谱数据库进行质谱
          2.2 大鼠空白血浆及含药血浆的制备                                 数据匹配，对各色谱峰对应的化合物进行初筛；再根据
              12 只大鼠经适应性喂养 3 d 后，随机分为空白组和                    其一级、二级质谱信息对化合物结构进行确认；对于数
          给药组，每组6只。禁食、不禁水12 h后，给药组大鼠每                        据库中未收录的化合物，则根据相关文献、质谱裂解规
          天早晚各灌胃 13.3 g/kg的三化汤冻干粉药液 1 次（以水                   律等进行鉴定。


          中国药房  2025年第36卷第14期                                              China Pharmacy  2025 Vol. 36  No. 14    · 1761 ·
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