Page 75 - 《中国药房》2025年14期

线的截距；a：标准曲线的斜率；m：质量；V：样本加入体 果（表 5）显示，24 个共有峰与 APC 的关联度均不小于
积）。结果显示，10 批样品均具有清除 DPPH 自由基的 0.661，表明共有峰与APC存在关联性，补肾宁神膏通过
能力，其中S9样品清除能力最强。结果见表3。 多成分共同发挥抗氧化作用。
2.3.3 FRAP的测定 表5 10批补肾宁神膏共有峰与APC的关联度及排名
精密称取 FeSO4 ·7H2O 27.80 mg，加双蒸水溶解并 峰号 关联度 排名 峰号 关联度 排名
定容至 10 mL（浓度为 100 mmol/L），再用双蒸水稀释， 1 0.668 22 13 0.775 4
得到浓度分别为0.3、0.6、0.9、1.2、1.8、2.1、2.5 mmol/L的 2 0.764 6 14 0.662 23
3 0.734 17 15 0.705 18
FeSO4 ·7H2O标准溶液。取PBS、TPTZ溶液和FeCl3溶液 4 0.789 2 16 0.763 9
（10∶1∶1，V/V/V），混匀，得FRAP工作液。取“2.2.3”项下 5 0.741 14 17 0.699 19
供试品溶液，加0.01 mmol/L PBS稀释，得质量浓度为25 6 0.764 6 18 0.742 13
7 0.780 3 19 0.764 6
mg/mL 的待测液。取待测液 5 μL、FRAP 工作液 180
8 0.661 24 20 0.682 20
μL，混合，作为样品组。取不同浓度的FeSO4 ·7H2O标准 9 0.767 5 21 0.741 14
溶液 5 μL、FRAP 工作液 180 μL，混合，作为标准曲线 10 0.753 11 22 0.748 12
组。各组溶液分别加入 96 微孔板中，于 37 ℃孵育 5 11 0.673 21 23 0.762 10
12 0.803 1 24 0.740 16
min，采用酶标仪于593 nm波长处检测吸光度值。每组
设置3个平行孔。以FeSO4 ·7 H2O标准溶液浓度为横坐 2.4.2 偏最小二乘回归分析
标（x）、吸光度为纵坐标（y）得到回归方程为y＝0.303 04x+ 以 10 批补肾宁神膏的 APC 为因变量，24 个共有峰
峰面积为自变量，采用 SIMCA 14.1 软件进行偏最小二
0.001（r＝0.999 3）。按公式计算FRAP：FRAP＝（ΔA593－
b）÷a×f÷cpr （ΔA593：样本的平均吸光度值；b：标准曲线 乘回归分析。标准化回归系数的正负分别表示各共有
的截距；a：标准曲线的斜率；f：样本加入检测体系之前的 峰与抗氧化活性呈正相关或负相关。以变量重要性投
稀释倍数；cpr：待测样本蛋白浓度）。结果显示，10 批样 影（variable importance in projection，VIP）值＞1 表明该
[11]
品均具有FRAP，其中S8样品的抗氧化能力最强。结果 共有峰对补肾宁神膏抗氧化活性有显著贡献 。图 3A
见表3。 结果显示，10 批补肾宁神膏的 24 个共有峰与 APC 的标
2.3.4 抗氧化活性综合指数分析 准化回归系数均大于 0，均呈正相关。图 3B 结果显示，
因不同体外抗氧化模型体系反映不同的抗氧化机 17 个共有峰（峰 2、5～7、9、10、13～21、23、24）的 VIP
制，单一的指标难以综合评价样品的抗氧化能力，故本 值＞1，通过与对照品比对，指认出其中7个，分别为莫诺
研究参考文献[9]，根据表 3 中的测定结果，以抗氧化活 苷（峰 6）、儿茶素（峰 7）、芍药苷（峰 10）、异槲皮苷（峰
性综合指数（antioxidant potency composite index，APC） 13）、毛 蕊 花 糖 苷（峰 14）、丹 皮 酚（峰 23）及 大 黄 素
评估补肾宁神膏的抗氧化能力，计算公式为：APC＝该 （峰24）。
方法测定值/该方法测定最大值×100%，平均综合指 0.10
0.08
数 ＝（ABTS-APC+DPPH-APC+FRAP-APC）/3，以 平 均 0.06
[10]
综合指数＞70%表示抗氧化能力较强 。结果（表4）显 标准化回归系数 0.04
0.02
示，10批样品的平均综合指数为85.08%～96.35%，表明 －0.02 0
10批样品均具有较强的抗氧化能力。 －0.04
－0.06
表4 10批样品的APC（%%） 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24
峰号
编号 ABTS-APC DPPH-APC FRAP-APC 平均综合指数 A.共有峰峰面积与APC的标准化回归系数
S1 88.06 94.55 90.16 90.92
1.5
S2 100.00 89.52 89.52 93.01
1.0
S3 93.57 86.58 92.08 90.74 0.5
S4 94.37 82.38 85.05 87.27 VIP
0
S5 89.78 72.74 92.72 85.08
－0.5
S6 81.74 78.19 97.25 85.73
－1.0
S7 96.21 95.81 92.65 94.89 5 17 21 14 18 15 10 2 16 19 6 9 23 7 13 24 20 3 12 11 4 1 8 22
峰号
S8 90.01 83.64 100 91.22 B.共有峰峰面积与APC的VIP值
S9 85.99 100 97.29 94.43 图3 共有峰与APC的标准化回归系数及VIP值
S10 91.96 99.16 97.92 96.35
2.4 谱效关系研究 3 讨论
2.4.1 灰色关联度分析 3.1 指标成分的选择
将 10 批补肾宁神膏的 APC 作为母序列，24 个共有 酒川芎中的阿魏酸和儿茶素具有抗氧化、改善心脑
[12]
峰峰面积作为子序列，采用初值化变换法对数据进行标 血管功能等作用 ；牡丹皮中的芍药苷、丹皮酚和异槲
准化处理，采用SPSS pro软件进行灰色关联度分析。结 皮苷具有较强的清除自由基活性，可调节心血管功

中国药房 2025年第36卷第14期 China Pharmacy 2025 Vol. 36 No. 14 · 1753 ·