Page 74 - 《中国药房》2025年14期

2.2.5 精密度试验 释，得到浓度分别为0.1、0.2、0.3、0.4、0.6、0.8、1.0 mmol/L
取“2.2.3”项下供试品溶液（编号S1），按“2.2.1”项下 的维生素 E 标准溶液。取过氧化氢和双蒸水（1∶39，
色谱条件连续进样测定6次，记录峰面积。结果显示，红 V/V）混匀，得溶液A。取PBS、ABTS和溶液A（152∶10∶8，
景天苷等10个成分峰面积的RSD均小于1.93%（n＝6）， V/V/V）混匀，得溶液B。取过氧化物酶和PBS（1∶9，V/V）
表明仪器精密度良好。 混匀，得溶液C。取“2.2.3”项下供试品溶液[用60%甲醇
2.2.6 稳定性试验 稀释至质量浓度为（25±0.5） mg/mL]10 μL、溶液 B 170
取“2.2.3”项下供试品溶液（编号S1），分别于室温下 μL 和溶液 C 20 μL，混匀，移至 96 微孔板中，作为实验
放置0、2、4、8、12、24 h时按“2.2.1”项下色谱条件进样测 组。取不同浓度的维生素 E 标准溶液 10 μL 至 96 微孔
定，记录峰面积。结果显示，红景天苷等10个成分峰面 板中，加入溶液 B 170 μL 和溶液 C 20 μL，混匀，作为标
积的RSD均小于2.72%（n＝6），表明样品溶液在室温下 准曲线组。上述溶液均室温避光静置 6 min 后，采用酶
放置24 h内稳定性良好。 标仪于 414 nm 波长处检测吸光度值。每组设置 3 个平
2.2.7 重复性试验 行孔。以维生素E标准溶液浓度为横坐标（x）、吸光度为
取样品（编号S1）适量，按“2.2.3”项下方法制备供试 纵坐标（y）得到回归方程为 y＝－1.692 3x+1.902 8（r＝
品溶液，共 6 份，按“2.2.1”项下色谱条件进样测定，记录 0.999 6）。按公式计算ABTS自由基清除率：ABTS自由
m
峰面积并按标准曲线计算含量。结果显示，红景天苷等 基清除率＝（ΔA414－b）÷a×f÷ （ΔA414：样本的平均吸
10个成分含量的RSD均小于2.44%（n＝6），表明方法重 V
光度值；b：标准曲线的截距；a：标准曲线的斜率；f：样本
复性良好。
加入检测体系之前的稀释倍数；m：质量；V：样本加入体
2.2.8 加样回收率试验
积）。结果显示，10 批样品均具有清除 ABTS 自由基的
取已知含量的样品（编号S1）约1.00 g，共6份，分别
能力，其中S2样品清除能力最强。结果见表3。
加入与各成分含量相当的单一对照品溶液（芍药苷、莫
诺苷、红景天苷、异槲皮苷、儿茶素、斯皮诺素、阿魏酸、 表3 10批样品的抗氧化测定结果（n＝3，mmol/g）
编号 ABTS自由基清除率 DPPH自由基清除率 FRAP
丹皮酚、毛蕊花糖苷、大黄素质量浓度分别为 3.198、
S1 30.178±2.657 31.562±3.301 43.607±3.963
1.863、0.704、0.270、0.204、0.120、0.103、0.032、0.019、 S2 34.270±6.273 29.882±6.210 43.297±2.199
0.060 mg/mL），按“2.2.3”项下方法制备供试品溶液，按 S3 32.067±5.417 28.901±3.965 44.535±1.752
“2.2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积并计算加样 S4 32.342±5.442 27.501±6.699 41.136±0.755
S5 30.768±2.242 24.281±4.118 44.845±0.807
回收率。结果显示，红景天苷等10个成分的平均加样回
S6 28.014±3.832 26.101±3.334 47.035±5.309
收率为98.57%～101.50%，RSD均小于1.98%（n＝6），表 S7 32.971±6.803 31.982±2.926 44.813±4.824
明方法准确度良好。 S8 30.847±3.305 27.921±0.642 48.366±3.235
2.2.9 含量测定 S9 29.470±2.722 33.382±10.846 47.056±2.360
S10 31.516±0.594 33.102±10.574 47.361±1.518
取 10 批样品，按“2.2.3”项下方法制备供试品溶液，
再按“2.2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积并根据 2.3.2 DPPH自由基清除率测定
标准曲线计算样品含量，每批样品测定2次，取平均值。 精密称取维生素 E 31.29 mg，加 60% 乙醇超声溶解
并定容至10 mL（浓度为12.5 mmol/L），再用无水乙醇稀
结果见表2。
释，得到浓度分别为0.025、0.050、0.062 5、0.075、0.087 5、
表2 10 批样品中红景天苷等 10 个成分的含量测定结
0.100 mmol/L 的维生素 E 标准溶液。称取 DPPH 0.10
果（n＝2，mg/g）
mg，置于棕色瓶中，加无水乙醇1 mL，超声溶解，再加无
编号 红景天苷 莫诺苷 儿茶素 芍药苷 斯皮诺素 阿魏酸 异槲皮苷 毛蕊花糖苷 丹皮酚 大黄素
S1 0.704 1.863 0.204 3.198 0.120 0.103 0.270 0.019 0.032 0.060 水乙醇11 mL，超声，得DPPH工作液。取“2.2.3”项下供
S2 0.727 1.872 0.208 3.166 0.111 0.105 0.277 0.018 0.032 0.059 试品溶液，用80%甲醇稀释，得到质量浓度为25 mg/mL
S3 0.685 1.937 0.209 3.359 0.131 0.102 0.279 0.019 0.033 0.071 的待测液。取待测液80 μL、无水乙醇100 μL，混合，作
S4 0.683 1.943 0.210 3.366 0.132 0.104 0.280 0.020 0.033 0.071 为对照组。取待测液 80 μL、DPPH 工作液 100 μL，混
S5 0.607 1.716 0.186 3.259 0.116 0.092 0.249 0.017 0.030 0.064
S6 0.658 1.868 0.203 3.237 0.122 0.103 0.271 0.019 0.032 0.061 匀，作为样品组。取不同浓度的维生素 E 标准溶液 80
S7 0.826 2.145 0.236 3.639 0.122 0.116 0.317 0.019 0.037 0.070 μL、DPPH工作液100 μL，混合，作为标准曲线组。上述
S8 0.712 2.001 0.216 3.469 0.134 0.107 0.289 0.020 0.034 0.073 溶液均室温避光静置 10 min 后，采用酶标仪于 525 nm
S9 0.734 1.881 0.209 3.184 0.109 0.105 0.278 0.019 0.032 0.060 波长处检测吸光度值。每组设置3个平行孔。以维生素
S10 0.910 2.394 0.261 4.070 0.145 0.129 0.351 0.023 0.041 0.079
平均值 0.725 1.962 0.214 3.395 0.124 0.107 0.286 0.019 0.034 0.067 E 标准溶液浓度为横坐标（x）、吸光度为纵坐标（y）得到
2.3 补肾宁神膏的体外抗氧化活性测定 回归方程为 y＝0.004 6x－0.012 4（r＝0.994 2）。按公式
1
2.3.1 ABTS自由基清除率测定 计算 DPPH 自由基清除率：DPPH 自由基清除率＝ ×
a
精密称取维生素 E 12.50 mg，加 60% 乙醇超声溶解 V
（ΔA525－b）÷ （ΔA525：样本的平均吸光度值；b：标准曲
并定容至 10 mL（浓度为 5.0 mmol/L），再用 60% 乙醇稀 m

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