Page 30 - 《中国药房》2025年14期
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分子指标明显，且测序仪器精密度要求的样品数≥5，因                           合物溶液（含万古霉素0.5 g/L、氨苄西林1 g/L、甲硝唑1
          此本研究仅从上述组别中随机选取5只小鼠的样品进行                            g/L、硫酸新霉素1 g/L），持续饮用14 d以消耗肠道菌群，
          测定，“2.1.7”项同），按照 DNA 提取试剂盒说明提取总                     然后再随机分为 FMT-CON 组、FMT-DSS 组、FMT-AGH
          DNA，经质量检测后，扩增细菌 16S rRNA 的 V3+V4 可                  组，每组8只。在随后的第1～7天，除FMT-CON组小鼠
          变区（引物 338F：5′-ACTCCTACGGGAGGCAGCA-3′，               自由饮水外，其余各组小鼠均饮用 3%DSS 溶液；从第 8
          806R：5′-GGACTACHVGGGTWTCTAAT-3′）。取所得                天起，将 3%DSS 溶液换为水，同时取供体小鼠粪便，加
          PCR 产物，经定量后构建微生物多样性测序文库，采用                          10 倍量生理盐水稀释，涡旋混匀 5 min，取上清液，按每
          Illumina MiSeq平台进行高通量测序，使用QIIME2软件                  只 200 μL 的体积灌胃至受体小鼠体内（FMT-CON 组、
          读取测序结果，并根据操作分类单元聚类分析结果进行                            FMT-DSS 组、FMT-AGH 组分别对应 CON 组、DSS 组、
          多样性指数（Chao1 和 Shannon 指数）分析、群落聚类分                   AGH组），每天1次，持续灌胃7 d。
          析，并根据分类信息对各分类层次的群落结构进行统计                            2.2.2 小鼠相关指标的检测
          和线性判别分析（即LEfSe分析）。上述实验委托上海欧                             末次灌胃后，按“2.1.2”项下方法计算FMT-CON组、
          易生物医学科技有限公司完成。                                      FMT-DSS 组、FMT-AGH 组小鼠的体重变化指数；同时，
          2.1.7 小鼠粪便中SCFAs含量检测                                进行 DAI 评分、结肠长度测量和脾脏指数计算；分别按
                                                             “2.1.3”～“2.1.5”项下方法检测或观察上述3组小鼠结肠
              取 CON 组、DSS 组、AGH 组小鼠的粪便样品适量，
                                                              组织中的炎症因子（TNF-α、IL-1β、IL-6）水平，结肠组织
          置于离心管中，加水适量，匀浆 1 min，于 4 ℃下离心 10
                                                              病理形态、病理学评分和杯状细胞占比，以及结肠组织
          min；取上清液，加 15% 磷酸溶液+375 μg/mL 的 4-甲基
                                                              中 occludin、ZO-1、p38 MAPK、JNK、SIRT1 mRNA 的表
          戊酸溶液+乙醚混合溶液（体积比为 5∶1∶14），匀浆 1
                                                              达情况（除染色观察和mRNA检测取每组3小鼠的组织
          min，再于 4 ℃下离心 10 min；取上清液，即得供试品溶
                                                              样本外，其余指标均取每组8只小鼠检测）。
          液。取上述各组供试品溶液，采用气质联用（GC-MS）技
                                                              2.3 统计学方法
          术以内标法检测其中乙酸、丁酸、丙酸、戊酸的含量。
                                                                  采用 SPSS 23.0 软件进行数据统计分析，GraphPad
          GC-MS条件如下：色谱柱为Agilent HP-INNOWAX毛细
                                                              Prism 8软件绘制图表。实验数据以x±s表示，多组间比
          管柱（30 m×0.25 mm，0.25 μm）；进样口温度为250 ℃；
                                                              较采用单因素方差分析，进一步两两比较采用 LSD-t 检
          载气为氦气；流速为 1.0 mL/min；分流进样，进样量为 1
                                                              验。检验水准α＝0.05。
          μL，分流比为10∶1；程序升温，起始温度为90 ℃，然后以
                                                              3 结果
          10 ℃/min 升温至 120 ℃，再以 5 ℃/min 升温至 150 ℃，
                                                              3.1 AG对UC小鼠改善作用的实验结果
          最后以25 ℃/min升温至250 ℃并维持2 min。电离源为
                                                              3.1.1 AG 对 UC 小鼠体重变化指数、DAI 评分、结肠长
          电子轰击电离源；离子源温度为 300 ℃，传输线温度为
                                                              度和脾脏指数的影响
          250 ℃；以选择离子监测（selected ion monitoring，SIM）
                                                                  与 CON 组比较，DSS 组小鼠体重变化指数和结肠
          模式进行正离子扫描；电子能量为 70 eV。以待测成分
                                                              长度均显著降低或缩短，DAI 评分、脾脏指数均显著升
          与内标（4-甲基戊酸）的峰面积比值为纵坐标（Y）、待测
                                                              高（P＜0.05）。与 DSS 组比较，各药物组小鼠体重变化
          成分质量浓度为横坐标（X），得乙酸、丁酸、丙酸、戊酸的
                                                              指数、结肠长度均显著升高或延长，DAI评分（AGL组除
          回归方程分别为 Y＝0.006 04X+0.002 48（r＝0.996 8）、
                                                              外）、脾脏指数均显著降低（P＜0.05）。结果见表2。
          Y＝0.032  05X+0.000  58（r＝0.997  9）、Y＝0.009  53X+
                                                              表2 各组小鼠体重变化指数、DAI评分、结肠长度和脾
          0.000 51（r＝0.998 1）、Y＝0.042 10X+0.000 78（r＝0.991 8），
                                                                   脏指数比较（x±s，n＝8）
          其检测质量浓度的线性范围均为 0.02～500.00 μg/mL。
                                                              组别      体重变化指数     DAI评分/分    结肠长度/cm   脾脏指数
          该法精密度、重复性等方法学考察均符合 2020 版《中国                        CON组    1.06±0.04  0.17±0.31  6.30±0.47  1.68±0.23
          药典》（四部）的相关规定。上述实验委托上海欧易生物                           DSS组    0.84±0.06 a  2.71±0.60 a  4.81±0.43 a  2.65±0.76 a
                                                              5-ASA组  0.94±0.03 b  1.38±0.42 b  5.58±0.64 b  1.82±0.38 b
          医学科技有限公司完成。
                                                              AGL组    0.90±0.05 b  2.38±0.97  5.35±0.57 b  1.97±0.62 b
          2.2 AG抗UC作用与其对肠道菌群影响的相关性验证                          AGH组    0.93±0.06 b  1.84±0.59 b  5.73±0.34 b  2.02±0.46 b
              采用FMT实验考察AG抗UC作用是否与该成分对                            a：与CON组比较，P＜0.05；b：与DSS组比较，P＜0.05。
          肠道菌群的调节作用直接相关。                                      3.1.2 AG对UC小鼠结肠组织中炎症因子水平的影响
          2.2.1 分组、造模与给药                                          与CON组比较，DSS组小鼠结肠组织中TNF-α、IL-
                               [9]
              参照既往研究方案 ，取小鼠 48 只，分为受体小鼠                       1β、IL-6 水平均显著升高（P＜0.05）；与 DSS 组比较，各
         （24 只）和供体小鼠（24 只）。取供体小鼠，随机分为                         药物组小鼠结肠组织中 TNF-α（AGL 组除外）、IL-1β
          CON 组、DSS 组、AGH 组，每组 8 只，按“2.1.1”项下方法              （AGL 组除外）、IL-6（AGH 组除外）水平均显著降低
          造模、干预。取受体小鼠，将其饮用水换为抗菌药物混                           （P＜0.05）。结果见表3。


          · 1712 ·    China Pharmacy  2025 Vol. 36  No. 14                            中国药房  2025年第36卷第14期
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