Page 85 - 《中国药房》2025年13期

COX-2 68 kDa
花生四烯酸代谢
2.5
组氨酸代谢
c-MYC 49 kDa
2.0
－log 10 P 1.5 甘油磷脂代谢 CYP1B1 61 kDa
IL-1β 35 kDa
1.0
IL-6 21 kDa
0.5
0 0.05 0.10 0.15 0.20 0.25 0.30 β-actin 43 kDa
通路Impact值
图 6 各组大鼠肛门组织样本中差异代谢物的通路富 A B C D
A：NC组；B：Model组；C：CBZCS-H组；D：Positive组。
集图
图7 各组大鼠肛门组织中 COX-2、c-MYC、CYP1B1、
谢-CYP、亚油酸代谢、视黄醇代谢、色氨酸代谢、D-谷氨 IL-1β和IL-6蛋白表达的电泳图
酰胺与 D-谷氨酸代谢、精氨酸和脯氨酸代谢、CYP 对外
表2 各组大鼠肛门组织相关蛋白的相对表达水平（x±
源性物质的代谢通路。经网络节点筛选，可得核心代谢
s，n＝3）
通路为花生四烯酸代谢、药物代谢-CYP、CYP对外源性
组别 COX-2/β-actin c-MYC/β-actin CYP1B1/β-actin IL-1β/β-actin IL-6/β-actin
物质的代谢通路，其中花生四烯酸代谢相关节点在“差 NC组 0.379 8±0.073 1 0.225 6±0.013 3 0.373 2±0.034 3 0.525 1±0.036 0 0.432 8±0.069 1
a
a
a
a
异代谢物-代谢通路-基因”交互网络中占比最大，该代谢 Model组 1.177 8±0.143 4 0.997 8±0.052 5 1.118 0±0.128 4 1.004 7±0.067 7 0.949 7±0.169 9 a
CBZCS-H组 0.860 2±0.091 8 0.300 0±0.022 7 0.903 6±0.054 6 0.570 9±0.107 3 0.566 9±0.054 3 b
b
b
b
b
通路相关的核心靶点蛋白共有15个。
b
b
b
Positive组 0.856 4±0.115 4 0.525 9±0.076 7 0.878 2±0.079 8 0.496 3±0.086 4 0.603 9±0.110 3 b
b
2.4 核心靶点的实验验证
a：与NC组比较，P＜0.05；b：与Model组比较，P＜0.05。
从花生四烯酸代谢相关的 15 个核心靶点蛋白中挑
散瘀、止血、定痛，五倍子、枯矾涩肠止泻、止血，白及收
选 5 个蛋白（CYP1B1、IL-6、IL-1β、c-MYC、COX-2），运
敛止血、生肌，共为佐药，使本方兼具止泻、止血、收敛生
用 Western blot 法进行实验验证。分别取 NC 组、Model
肌之效，体现了中医“标本兼治”的治疗理念。HE 组织
组、CBZCS-H 组和 Positive 组大鼠肛门组织各 100 mg
病理染色结果显示，经各剂量CBZCS干预后，痔疮模型
（每组分别取3只大鼠组织样本），提取组织中总蛋白，采
大鼠的各症状均有不同程度缓解，其中以 CBZCS-H 组
用 BCA 法进行蛋白定量，取高温变性的蛋白在 80 V 电
效果最佳。在以往的研究中证实了细胞浸润是痔疮最
压下进行快速电泳分离，然后以湿法转至 PVDF 膜上
显著的病理特征之一，而由巴豆油所建痔疮模型大鼠血
（转膜条件为恒流 300 mA、时间 30 min），用 5% 脱脂奶 [10]
清 IL-6 和 TNF-α 的含量会明显增多 。IL-6 和 TNF-α
粉常温封闭1.5 h；加入β-actin（稀释比例1∶3 000）、IL-1β
是炎症反应进程中的重要因子，IL-6参与了急性炎症反
（稀释比例1∶1 000）、CYP1B1（稀释比例1∶500）、c-MYC
应和免疫应答的调节，能刺激 B 细胞前体产生抗体，诱
（稀释比例 1∶5 000）、IL-6（稀释比例 1∶1 000）、COX-2 导细胞发生炎症；TNF-α 过度产生或异常释放时，可能
（稀释比例1∶1 000）一抗，4 ℃下孵育过夜；洗膜，加入二 会诱导炎性细胞浸润，加重组织损伤和炎症过程 。本
[11]
抗（稀释比例1∶5 000），室温孵育1 h；洗膜，使用ECL化 研究结果显示，模型大鼠血清中TNF-α、IL-6水平升高；
学发光液孵育 1～2 min，置化学发光成像系统曝光显 经药物干预后，CBZCS-H 组大鼠血清中 TNF-α、IL-6 水
色，并用 Image J 软件分析条带灰度值。以目的蛋白条 平及 CBZCS-M 组大鼠血清中 IL-6 水平显著降低，提示
带灰度值与内参（β-actin）蛋白条带灰度值比值表述目的 CBZCS可以减轻痔疮大鼠机体的炎症反应。
蛋白的表达水平。 为了深入研究 CBZCS 抗痔疮的机制，本研究采用
结果（图 7、表 2）显示，与 NC 组比较，Model 组大鼠 代谢组学的方法对SD大鼠肛门组织样本的内源性小分
肛门组织中 COX-2、c-MYC、CYP1B1、IL-1β、IL-6 蛋白 子代谢产物的变化进行分析。结果显示，34种差异代谢
表 达 水 平 均 显 著 升 高（P＜0.05）；与 Model 组 比 较 ， 物与痔疮的治疗相关。潜在生物标志物的富集通路分
CBZCS-H 组和 Positive 组大鼠肛门组织中上述蛋白表 析结果显示，差异代谢物主要富集于花生四烯酸代谢通
达水平均显著降低（P＜0.05）。 路。花生四烯酸代谢通路是炎症过程的重要组成部
3 讨论 分 ，其代谢主要通过COX途径进行，COX的表达能促
[12]
痔疮是临床上常见的肛肠疾病之一。CBZCS 作为 进前列腺素（如前列腺素 E2 ）的合成，增强局部血流，导
一种中药复方制剂，在痔疮治疗中具有独特的优势。该 致痔疮区域充血和肿胀 。
[13]
方剂以蟾酥、蟾蜍皮为君药，能清热解毒、消肿止痛；臣 本研究通过代谢组学结合网络药理学建立与疾病
以冰片、紫草助君药清热解毒、止痛，兼化腐生肌；三七 相关的“代谢通路-差异代谢物-靶点蛋白”交互网络，经
中国药房 2025年第36卷第13期 China Pharmacy 2025 Vol. 36 No. 13 · 1627 ·