Page 83 - 《中国药房》2025年13期

2.2 肛门组织代谢组学分析 8 000
7 000
2.2.1 组织样本的制备 6 000
5 000
药效学研究结果显示，CBZCS-H 组大鼠药效最好， 4 000
3 000
故本研究选取该组大鼠的组织样本进行代谢组学分析。 2 000
1 000 CBZCS-H组
Model组
取“2.1.3”项下冻存的 NC 组、Model 组、CBZCS-H 组和 t[5] 0 NC组
－1 000 QC组
Positive组
Positive组大鼠的肛门组织（每组随机选取6只大鼠的样 －2 000
－3 000
本组织），常规解冻后，取20 mg组织，加入1 mL甲醇-水 －4 000
－5 000
溶液（1∶1，V/V），在冰水浴中研磨 3 min，超声 15 min 后 －6 000
－7 000
于 4 ℃下以 12 000 r/min 离心 15 min，过 0.22 uμm 微孔 －8 000
－3 000 －2 000 －1 000 0 1 000 2 000 3 000
滤膜，取200 μL滤液至样品瓶中，待测。取待测样品液 t[1]
各10 μL混匀，作为质量控制（quality control，QC）样本， 图2 各组大鼠组织样本的PCA图（正离子模式）
进行超高效液相色谱结合四极杆串联飞行时间质谱 12 000
10 000
（UPLC/Q-TOF-MS）分析。
8 000
2.2.2 色谱、质谱分析条件 6 000
4 000
色谱分析条件：采用ACQUITY UPLC BEH C18色谱 2 000
柱（100 mm×2.1 mm，1.7 μm），以含0.1%甲酸的水溶液 to[1] 0 Model组
NC组
－2 000
为流动相A、含0.1%甲酸的乙腈为流动相B进行梯度洗 －4 000
脱（0～2 min，95%A；2～6 min，95%A→70%A；6～7 －6 000
－8 000
min，70%A；7～10 min，70%A→40%A；10～11.5 min， －10 000
40%A；11.5～13 min，40%A→20%A；13～13.5 min， －12 000
－40 000 －20 000 0 20 000 40 000
20%A；13.5～16 min，20%A→10%A；16～17 min， t[1]
A. Model组 vs. NC组
10%A；17～17.5 min，10%A→100%B；17.5～20 min，
30 000
100%B；20～20.5 min，100%B→95%A；20.5～23 min， 25 000
95%A）；流速为 0.4 mL/min；柱温为 40 ℃；进样量为 3 20 000
15 000
μL。 10 000
5 000
质谱分析条件：采用电喷雾离子源（ESI），在正、负 to[1] 0 CBZCS-H组
离子模式下检测，离子源温度为 120 ℃；脱溶剂气温度 －5 000 Model组
－10 000
为 500 ℃，脱溶剂气流量为 1 000.0 L/h；锥孔气流量为 －15 000
50 L/h；毛细管电压为2 000.0 V（+）/1 500.0 V（－），样品 －20 000
－25 000
锥孔电压为 60.0 V（+）/70.0 V（－）；碰撞能电压为 15～ －30 000
45 V；数据采集范围为100～1 500 m/z。 －60 000 －20 000 0 20 000 60 000
t[1]
2.2.3 代谢组学轮廓分析 B. CBZCS-H组 vs. Model组
将 UPLC/Q-TOF-MS 所处理的原始数据进行峰对 图3 各组大鼠组织样本的OPLS-DA图（正离子模式）
齐、峰匹配、降噪、归一化预处理。基于精确的m/z、二级 R 2 R 2
Q 2 Q 2
片段和同位素分布对化合物进行定性与定量分析。联 1.0 1.0
0.5 0.5
合Progenesis QI软件和EZinfo 2.0软件进行主成分分析 t[2] 0 t[2] 0
（principal component analysis，PCA）和偏最小二乘法判 －0.5 －0.5
－1.0 －1.0
别分析（partial least squares discriminant analysis，PLS- －1.5 －1.5
－0.2 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 －0.2 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0
DA），观察样品间的整体分布情况。 t[1] t[1]
PCA结果（图2）显示，QC样本呈现出良好的聚集情 A. Model组 vs. NC组 B. Model组 vs. CBZCS-H组
图4 各组大鼠组织样本的置换检验图（正离子模式）
况，表明本实验涉及的仪器和实验方法稳定性高、数据
质量可靠；NC组和Model组样本呈现明显分离，而药物 2.2.4 差异代谢物的筛选和分析
组与Model组样本距离较远，这说明各组大鼠的代谢物 通过Progenesis QI软件对NC组、Model组、CBZCS-
存在明显差异。OPLS-DA 结果（图 3）和置换检验（n＝ H组和Positive组大鼠组织样本中代谢产物的变化进行
200）结果（图 4）显示，正、负离子模式下 NC 组与 Model 预测，寻找符合变量重要性投影（variable importantin
组、Model组与CBZCS-H组样本分离明显。这提示模型 projection，VIP）＞1、组间差异倍数（fold change，FC）＞
拟合效果良好，组间存在一定差异，且没有出现过度拟 1.2或＜0.8及P＜0.05的差异代谢物。运用微生信网站
合现象（由于版面有限，负离子模式下的图片略）。 （https：//www.bioinformatics.com.cn/）对差异代谢物的丰

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