Page 62 - 《中国药房》2025年12期

2.1.1 储备液和相关工作溶液的配制 采用电喷雾离子源，以多反应监测模式进行正离子
精密称取伏立康唑和内标（伏立康唑-d3 ）对照品适 检测；离子源喷射电压为5 500 V；离子源温度为500 ℃；
量，用 50% 乙腈溶解，制成质量浓度均为 1 mg/mL 的储 雾化气、加热气、气帘气压力分别为60、50、20 psi；去簇电

备液。取上述伏立康唑储备液，用 50% 乙腈稀释，制成 压为100 V；用于定量分析的伏立康唑、内标离子对分别
质量浓度分别为 400、200、100、80、40、20、8、2 μg/mL 的 为 m/z 350.1→281.1 和 m/z 353.3→284.2，碰撞能量分别
系列标准曲线工作溶液；同法配制质量浓度分别为300、 为40、25 V；质谱监测时间为2.8 min。
50、4、2 μg/mL的质控工作溶液，备用。取上述内标储备 2.1.5 方法学考察
液，用乙腈稀释，制成质量浓度为100 ng/mL的内标工作 根据2020年版《中国药典》（四部）通则“生物样品定
溶液，备用。 量分析方法验证指导原则”的相关要求，对所建大鼠血
2.1.2 标准血浆样品和质控血浆样品的配制 浆中伏立康唑质量浓度检测的 UPLC-MS/MS 法进行方
取空白血浆（来自未经任何处理的健康SD大鼠，下 法学考察。
同）45 μL，分别加入“2.1.1”项下系列标准曲线工作溶液 （1）专属性：取不同来源的大鼠空白血浆、定量下限
5 μL，得到质量浓度分别为 40、20、10、8、4、2、0.8、0.2 质量浓度的质控血浆样品、伏立康唑组某大鼠予伏立康

μg/mL的系列标准血浆样品，备用。取“2.1.1”项下各质 唑1 h后的血浆样品，按照“2.1.3”项下方法处理（空白血
控工作溶液，同法配制定量下限质量浓度（0.2 μg/mL） 浆不加内标）后，再按照“2.1.4”项下条件进样分析，记录
以及低、中、高质量浓度（0.4、5、30 μg/mL）的质控血浆 色谱图。结果（图 1）显示，伏立康唑及内标的保留时间
样品，备用。 约为 1.4 min，血浆内源性物质不影响伏立康唑的检测，
2.1.3 血浆样品处理 方法专属性良好。
取血浆样品50 μL，加入内标工作溶液450 μL，涡旋 （2）标准曲线和定量下限：取“2.1.2”项下各质量浓
混合 1 min，以 12 000 r/min 离心 10 min，取上清液 50 度的系列标准血浆样品，按照“2.1.3”项下方法处理后，
μL，加入50%乙腈200 μL，涡旋混匀，备测。 再按照“2.1.4”项下条件进样分析，记录峰面积。以伏立
2.1.4 色谱与质谱条件 康唑质量浓度为横坐标（x）、伏立康唑与内标的峰面积
以菲罗门 Titank C18 （2.1 mm×100 mm，3 μm）为色 比值（y）为纵坐标，采用最小加权二乘法（权重因子为
2
谱柱，以水为流动相A、含0.1%甲酸的乙腈为流动相B进 1/x ）进行线性回归。结果显示，伏立康唑的回归方程为
行梯度洗脱（0～1.0 min，50%B；1.0～1.5 min，50%B→ y＝0.183x+0.001（r＝0.999 8），检测质量浓度的线性范
98%B；1.5～3.0 min，98%B；3.0～3.1 min，98%B→50%B； 围为0.2～40 μg/mL，定量下限为0.2 μg/mL。
3.1～4.0 min，50%B）；流速为0.35 mL/min；柱温为40 ℃； （3）准确度和精密度：按照“2.1.2”项下方法制备定

自动进样器温度为15 ℃；进样量为1 μL。 量下限和低、中、高质量浓度的质控血浆样品，每质量浓
Ⅰ 3 920 1.35 Ⅰ 4.4×10 5 1.37 Ⅰ
220

intensity 110 intensity 1 960 intensity 2.2×10 5

0 0 0
0 1.0 2.0 2.8 0 1.0 2.0 2.8 0 1.0 2.0 2.8
t/min t/min t/min
1.35 1.35
180 Ⅱ 1.10×10 5 Ⅱ 1.08×10 5 Ⅱ

intensity 90 intensity 0.55×10 5 intensity 0.54×10 5

0 0 0
0 1.0 2.0 2.8 0 1.0 2.0 2.8 0 1.0 2.0 2.8
t/min t/min t/min
A.空白血浆 B.定量下限质量浓度的质控血浆样品 C.伏立康唑组大鼠予伏立康唑1 h后的血浆样品
Ⅰ：m/z 350.1→281.1；Ⅱ：m/z 353.3→284.2。
图1 血浆样品中伏立康唑定量分析的典型色谱图

· 1472 · China Pharmacy 2025 Vol. 36 No. 12 中国药房 2025年第36卷第12期