Page 56 - 《中国药房》2025年11期

模式（MRM）测定药物浓度，各样品定量离子对及相关 20 000 10 000
18 000
16 000 Sy
参数见表2。 14 000 8 000
12 000
6 000
表2 样品的MRM参数 强度 10 000 强度 4 000
8 000
6 000
4 000 2 000
样品 定量离子对（m/z） 碰撞电压/V 去簇电压/V 保留时间/min 2 000 0 0
－20 000
Sy 481.1→124.9 －31.720 －133.450 0.84 0 0.5 1.0 1.5 2.0 0 0.5 1.0 1.5 2.0
大豆苷元 253.2→208.1 －42.610 －95.090 0.90 t/min t/min
A.空白组织匀浆 B.空白组织匀浆+Sy对
2.3.2 Sy对照品溶液和内标溶液的准备 照品溶液
30 000 内标
精密称取 Sy 对照品 2.71 mg 于 50 mL 容量瓶中，加 25 000 12 000 Sy
10 000
甲醇超声溶解后定容，即得质量浓度为 0.054 2 mg/mL 强度 20 000 强度 8 000
15 000
6 000
的 Sy 对照品溶液。精密称取大豆苷元对照品 2.16 mg 10 000 4 000
5 000 2 000
于 50 mL 容量瓶中，加甲醇超声溶解后定容，临用前稀 0 0
0 0.5 1.0 1.5 2.0 0 0.5 1.0 1.5 2.0
释400倍即得内标溶液。
t/min t/min
2.3.3 样品的前处理 C.空白组织匀浆+内标 D.大鼠给药1 h后的组
溶液 织匀浆（Sy）
精密称取各组样品 0.5 g，剪碎后加入生理盐水，在 40 000 内标
35 000
冰浴条件下制备组织匀浆。（1）空白组织匀浆的处理：精 30 000
25 000
密吸取空白组织匀浆样品 50 μL 于 2 mL 离心管中，加 强度 20 000
15 000
10 000
10 μL 甲醇、100 μL 流动相、100 μL 乙腈，涡旋混匀 4 5 000
0
min，以 12 000 r/min 离心 20 min，取上清液进样分析。 －5 000 0 0.5 1.0 1.5 2.0
（2）含药组织匀浆的处理：精密吸取含药组织匀浆样品 t/min
E.大鼠给药1 h后的组
50 μL于2 mL离心管中，加100 μL内标溶液、100 μL乙 织匀浆（内标）
腈，涡旋混匀 4 min，以 12 000 r/min 离心 20 min，取上清 注：在本研究UPLC-MS条件下，Sy-a和Sy-b重合，故此处只有1个
液进样分析。（3）质控（QC）样品处理：精密吸取空白组 色谱峰。
图2 大鼠肝组织中Sy和内标的MRM色谱图
织匀浆50 μL于2 mL离心管中，加10 μL Sy对照品溶液
（或100 μL内标溶液）、100 μL乙腈，涡旋混匀4 min，以 生理盐水将组织表面血迹和内容物洗净，并用滤纸吸去
12 000 r/min离心20 min，取上清液进样分析。 水分，然后按“2.3.3”项下方法处理各样品后，按“2.3.1”
2.3.4 方法学考察 项下条件进样测定。各组大鼠组织样品中Sy的含量测
参考 2020 年版《中国药典》生物样品定量分析方法 定结果见表3～表5。
[11]
验证指导原则进行方法学考察 。取大鼠空白组织匀
表3 Sy 原料组大鼠各组织样品中 Sy 的含量测定结果
浆、QC 样品和大鼠给药 1 h 后的组织匀浆，按“2.3.3”项
（x±s，n＝4）
下方法处理，然后按“2.3.1”项下方法进样分析，结果（图
组织 0.3 h 1 h 4 h 10 h 24 h
2，因版面有限，此处仅展示肝组织的结果）显示，空白组 心 14.41±4.24 29.94±3.81 3.04±1.17 2.46±0.92 3.29±1.79
织匀浆中的内源性物质不干扰 Sy 或内标的测定，表明 肝 18.66±10.45 35.47±12.40 17.53±8.61 2.94±0.29 7.17±1.91
该方法具有良好的专属性。Sy 在心、肝、脾、肺、肾、脑、 脾 19.65±6.85 21.06±9.42 12.78±5.99 7.48±1.84 8.00±2.34
肺 56.67±29.89 22.67±6.84 4.92±2.88 9.74±3.31 12.08±3.00
2
小肠组织中回归方程分别为 y＝0.009 3x+0.015 9（R ＝
肾 10.43±0.97 35.17±22.13 10.43±3.50 5.23±4.75 5.24±0.75
2
0.999 0）、y＝0.017 7x+0.023 8（R ＝0.999 1）、y＝0.008 1x+ 脑 11.43±4.98 15.77±14.07 3.89±1.18 3.23±2.84 0.95±0.69
2
0.025 0（R ＝0.997 2）、y＝0.008 9x+0.011 6（R ＝0.999 7）、 小肠 219.15±136.62 1 005.98±428.87 773.12±789.83 114.06±113.32 45.87±59.69
2
2
y＝0.017 5x+0.022 7（R ＝0.999 9）、y＝0.020 1x+0.010 7 表4 Sy-NS-G 组大鼠各组织样品中 Sy 的含量测定结
（R ＝0.998 4）、y＝9.492 4×10 x+0.002 2（R ＝0.999 7）， 果（x±s，n＝4）
2
－4
2
Sy 在肝、脑、肾组织的线性范围均为 1～100 ng/mL，在 组织 0.3 h 1 h 4 h 10 h 24 h
肺、心、脾组织的线性范围为1～250 ng/mL，在小肠组织 心 88.42±20.74 84.96±37.74 11.25±8.50 13.56±15.22 3.54±2.19
的线性范围为 1～2 500 ng/mL；精密度试验、准确度、基 肝 35.78±10.46 34.59±16.17 22.89±0.54 10.44±2.01 3.78±0.78
脾 56.05±45.23 123.07±44.59 15.36±2.79 6.47±2.59 5.19±1.64
质因子及稳定性试验的RSD均小于15%（n＝6），以上均 肺 92.84±4.67 51.56±26.03 4.97±3.70 10.46±5.61 6.13±2.23
符合指导原则相关要求。 肾 12.72±5.45 27.15±7.52 11.27±4.36 8.34±0.82 3.69±0.19
2.3.5 组织分布实验 脑 5.22±1.71 30.04±18.92 3.02±2.43 1.31±0.14 0.33±0.29
小肠 219.41±55.56 269.22±130.55 204.90±93.71 88.48±63.42 15.07±9.07
将60只SD大鼠随机分为Sy原料药组、Sy-NS-G组
和Sy-NS-F组，每组20只。各组大鼠实验前禁食12 h不 由表 3～表 5 可知，Sy 原料药、Sy-NS-G 和 Sy-NS-F
禁水，单次灌胃剂量均为 50 mg/kg（以 Sy 计），分别于给 在大鼠体内的组织分布浓度不同：在 0.3～1 h 时段，Sy-
药后0.3、1、4、10、24 h处死（每个时间点各组分别处死4 NS-G 在大鼠心、肺中的分布浓度高于 Sy 原料药和 Sy-
只大鼠），迅速取出心、肝、脾、肺、肾、脑、小肠等组织，用 NS-F；但在肾中，0.3～24 h 时段 Sy-NS-F 的分布浓度均

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