Page 55 - 《中国药房》2025年11期

备肠灌流液]适量，按“2.2.1”项下色谱条件进样测定，结 径，计算灌流肠段表面积，并采用重量法校正流出液的
果（图1）显示，阴性溶液和空白肠灌流液对测定无干扰， 体积 ，然后按公式计算药物吸收速率常数（Ka ）和表观
[10]
表 明 该 方 法 专 属 性 良 好 。 Sy 的 回 归 方 程 为 y＝ 吸收系数（Papp ）：
2
545.43x－463.39（R ＝0.999 4），线 性 范 围 为 1.10～ Ka＝（1－CoutV out/CinV in ）Q/πr L ⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅ （1）
2
224.00 μg/mL。精密度试验、重复性试验、稳定性试验 Papp＝－Qln（CoutV out/CinV in ）2πrL⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅ （2）
（12 h）的 RSD 均 小 于 2.00%（n＝6）；低 、中 、高 浓 度 式中，Cin、Cout分别为进口处和出口处灌流液的质量
（6.47、12.22、76.34 μg/mL，以 Sy 计）下，Sy 原料药的平 浓度，V in、V out为进口处和出口处灌流液的体积，Q为灌流
均回收率分别为 96.88%、98.32%、102.94%（RSD 分别为 体积流量，r和L分别为肠段的半径和长度。
0.27%、0.03%、0.50%，n＝6），Sy-NS-G 的平均回收率分 采用 SPSS 20.0 软件对数据进行正态检验，符合正
别 为 99.67%、104.40%、103.88%（RSD 分 别 为 0.25%、 态分布的数据以x±s表示。若方差齐，采用单因素方差
0.41%、0.40%，n＝6），Sy-NS-F 的 平 均 回 收 率 分 别 为 分析，进一步组间两两比较采用 LSD-t 法；若方差不齐，
98.56%、98.42%、95.02%（RSD 分 别 为 0.49%、0.56%、 则采用Tamhane’T2法比较。检验水准α＝0.05。
0.37%，n＝6）。以上均符合指导原则相关要求。 由表 1 可知，Sy-NS-G 在各肠段中的 Ka、Papp随着 Sy
10 10 质量浓度的增加无明显变化（P＞0.05），提示 Sy-NS-G
8 在各肠段的吸收无浓度依赖性，吸收方式为被动扩散。
mAU 5 mAU 6 4 Sy-NS-F、Sy 原料药在十二指肠、空肠中的 Ka、Papp随着

2 Sy 质量浓度的增加也无明显变化（P＞0.05），提示 Sy-
0 0 NS-F、Sy原料药在十二指肠、空肠中的吸收方式为被动
0 2 4 6 8 10 12 14 0 2 4 6 8 10 12 14
t/min t/min 扩散。进一步分析发现，不同质量浓度的Sy-NS-F 在十
A.阴性溶液 B.空白肠灌流液 二指肠中的 Ka 均显著高于 Sy 原料药和 Sy-NS-G（P＜
7 Sy-a Sy-b 8 Sy-a Sy-b
6 7 0.05），高浓度的 Sy-NS-G 在回肠中的 Ka、Papp均低于 Sy-
5 6 5
mAU 4 3 mAU 4 3 NS-F 和 Sy 原料药，由此可知，Sy-NS-F 在十二指肠的吸
2 2 收高于Sy-NS-G。在不同肠段中发现，Sy-NS-G和Sy原
1 1
0 0 料药的吸收部位主要在回肠，Sy-NS-F 的吸收部位主要
－1 －1
0 2 4 6 8 10 12 14 0 2 4 6 8 10 12 14 在十二指肠和回肠。
t/min t/min
C.对照品溶液 D. Sy-NS-G含药肠灌流液 表1 不同质量浓度下 Sy 纳米晶与原料药在不同肠段
8 Sy-a Sy-b 的Ka、Papp （x±s，n＝3）
7
6
－2
－2
－2
5 质量浓度 Sy原料药（×10 ） Sy-NS-G（×10 ） Sy-NS-F（×10 ）
mAU 4 3 肠段 / （μg/mL） K a P app K a P app K a P app
2 ab
1 十二指肠 60 2.82±0.62 0.51±0.08 2.82±0.59 0.37±0.11 4.84±0.57 0.52±0.08
0 ab
－1 120 3.14±0.61 0.55±0.08 2.65±0.33 0.36±0.04 5.17±0.80 0.60±0.22
0 2 4 6 8 10 12 180 3.30±0.17 0.56±0.03 2.76±0.32 a 0.38±0.32 5.35±1.21 ab 0.69±0.17
t/min c c
E. Sy-NS-F含药肠灌流液 空肠 60 2.88±0.64 0.53±0.12 3.50±0.29 0.49±0.04 3.29±0.66 0.40±0.13
120 3.18±0.94 0.57±0.17 4.32±0.58 c 0.61±0.19 2.91±0.85 c 0.30±0.09
注：由于Sy为同分异构体药物，故有2个色谱峰，分别为Sy-a和Sy-b。
180 3.49±0.91 0.58±0.15 3.60±0.32 c 0.40±0.09 4.19±1.30 0.45±0.15
图1 各样品的HPLC色谱图 回肠 60 3.97±0.81 c 0.79±0.13 5.29±1.61 c 0.54±0.24 4.97±0.77 0.58±0.15
120 3.83±0.70 0.70±0.10 6.17±1.2 ac 0.78±0.21 5.30±1.07 a 0.56±0.11
2.2.5 在体单向肠灌流实验 180 6.92±0.28 cd 1.20±0.10 4.82±0.5 ac 0.56±0.08 7.11±1.53 abcd 0.83±0.21
将 27 只大鼠随机分为 Sy 原料药组、Sy-NS-G 组和 a：与Sy原料药组相应指标相比，P＜0.05；b：与Sy-NS-G组相应指
Sy-NS-F组，每组均设置低、中、高（60、120、180 μg/mL）3 标相比，P＜0.05；c：与各样品十二指肠肠段相比，P＜0.05；d：与各样品
个质量浓度（以 Sy 计），每组 3 只。实验前禁食不禁水 低浓度组相比，P＜0.05。
12 h，麻醉后，将大鼠四肢固定在手术板上并维持体温； 2.3 两种纳米晶中Sy的组织分布考察
剪开腹部，分离出小肠，根据实验需要对十二指肠/空肠/ 2.3.1 UPLC-MS条件及定量离子对相关参数
回肠的两端进行切口插管，并结扎；排空肠腔内容物，以 采用超高效液相色谱串联质谱（UPLC-MS）法进行
1 mL/min的速度通入37 ℃的K-R液，平衡15 min；再将 检测。（1）色谱条件：以 ACQUITY UPLC BEH C18柱（2.1
37 ℃的含药肠灌流液（按“2.2.2”项下方法配制的低、中、 mm×50 mm，1.7 μm）为色谱柱，以乙酸-甲醇-水（0.1∶70∶
高浓度的 Sy 原料药、Sy-NS-G、Sy-NS-F 含药肠灌流液） 30，V/V/V）为流动相进行等度洗脱，流速为 0.2 mL/min，
以0.2 mL/min的速度灌流平衡30～40 min（从低浓度到 柱温为35 ℃，进样量为1 μL。（2）质谱条件：采用电喷雾
高浓度依次灌注）；将灌流液进口处和出口处均换上已 离子化源，扫描方式为负离子模式，喷雾电压为－4 500
知质量的小瓶，每隔 15 min 收集流出液，收集至 75 min V，离子源温度为500 ℃，气帘气为40 psi，雾化气1（G1）
结束。处死大鼠，量取每只大鼠所用肠段的长度和半 为 50 psi，离子源气体 2（G2）为 50 psi；采用多反应监测

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