Page 61 - 《中国药房》2025年11期
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2.6.3 代谢组学分析                                       GAPDH 稀释度为1∶10 000）于4 ℃过夜；再次漂洗后加
             “2.6.1”项下粪便样本上机后，将液相色谱-质谱联                      入二抗（稀释度为1∶2 000），室温摇床1 h；TBST洗膜后
          用仪的原始数据导入代谢组学处理软件 Progenesis QI                    加入 ECL 显影液，检测蛋白条带。使用 Image J 软件分
          进行基线过滤、峰识别、积分、保留时间校正、峰对齐等，                         析条带灰度值，以目的蛋白与内参蛋白（GAPDH）的灰
          最终得到含保留时间、质荷比和峰强度等信息的数据矩                           度值比值表示目的蛋白的相对表达量，以磷酸化蛋白与
          阵。再采用该软件进行特征峰搜库鉴定，将质谱和串联                           原型蛋白的灰度值比值表示该蛋白的磷酸化水平。
          质谱信息与代谢数据库进行匹配，质谱质量误差设置                            2.8 统计学方法
          为＜10 ppm，同时根据二级质谱匹配得分鉴定代谢物。                            使用 SPSS 22.0 和 GraphPad 9.0 软件对数据进行统
          利用 R 语言环境下的 ropls 包（1.6.2 版本）对预处理后的                计分析并作图。符合正态分布的计量资料以x±s表示，
          数据集进行多元统计分析。采用 PCA 和正交偏最小二                         多组间比较采用方差分析，进一步两两比较采用 LSD-t
          乘法判别分析（orthogonal partial least squares discrimi‐  检验；不符合正态分布者以M（P25，P75 ）表示，多组间比较
          nant analysis，OPLS-DA）进行数据挖掘。为验证模型可                采用非参数 Kruskal-Wallis H 检验，进一步两两比较采
          靠性，通过7折交叉验证法评估模型稳定性。筛选出潜                           用 Mann-Whitney U 检验。肠道菌群相关分析中，采用
          在生物标志物，以变量投影重要性（variable importance                Wilcoxon 秩和检验比较组间 α、β 多样性指数的统计学
          in projection，VIP）＞1、差异倍数＞2、P＜0.05 筛选差异            差异，并进行Spearman相关性分析。检验水准α＝0.05。
          代谢物，联合人类代谢组学数据库（https：//hmdb.ca）和                  3 结果
          京都基因与基因组百科全书（Kyoto Encyclopedia of                 3.1 金刚藤胶囊对 NAFLD 大鼠肝脏病理组织形态变
          Genes and Genomes，KEGG）（https：//www.genome.jp）、    化的影响
          Python 软件包 scipy.stats 进行相关代谢通路富集分析。                   HE染色结果显示，正常组大鼠肝结构清晰，肝细胞
          为进一步探讨肠道菌群与代谢组学是否有相关关系，本                           排列整齐，无脂肪空泡；与正常组比较，模型组大鼠肝脏
          实验对筛选的肠道菌群中金刚藤胶囊调节的5种主要菌                           可见单位面积超 1/2 的肝细胞发生脂肪变性、肝索排列
          属与差异代谢物进行Spearman相关性分析。                            紊乱、炎症细胞浸润等明显病理损伤；与模型组比较，各
          2.7 大鼠肝脏中NF-κB/NLRP3信号通路相关蛋白检测                     给药组大鼠肝细胞脂肪变性呈不同程度减轻，炎症细胞
              基于 16S rDNA 测序和代谢组学研究结果，采用                     减少。结果见图1。
          Western blot法对正常组、模型组、金刚藤胶囊低剂量组、                       油红O染色结果显示，正常组肝细胞无明显脂质沉
          金刚藤胶囊高剂量组大鼠肝脏中NF-κB/NLRP3信号通                       积；与正常组比较，模型组大鼠可见肝细胞内富含脂滴
          路相关蛋白进行检测。用蛋白裂解液提取肝脏组织蛋                            空泡；与模型组比较，各给药组大鼠肝细胞脂滴均有不
          白，使用BCA蛋白定量试剂盒进行定量后加入5×上样                          同 程 度 的 减 少 ，肝 脏 结 构 得 到 一 定 的 修 复 。 结 果
          缓冲液，80 ℃水浴10 min备用。取30 μg蛋白加到十二                    见图2。
          烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳凝胶上，并在PVDF膜                         3.2 金刚藤胶囊对 NAFLD 大鼠血脂和肝功能指标的
          上印迹，使用快速封闭液封闭、TBST 漂洗后，孵育不同                        影响
          一抗（NF-κB p65、p-NF-κB p65、IκBα、p-IκBα 稀释度均              与正常组比较，模型组大鼠血清 TC、TG、LDL-C、
          为1∶1 000，NLRP3、ASC、caspase-1稀释度均为1∶2 000，          ALT、AST 水平均显著升高（P＜0.01），HDL-C 水平显著








                A.正常组               B.模型组             C.阿托伐他汀组          D.金刚藤胶囊低剂量组         E.金刚藤胶囊高剂量组
                                     图1 各组大鼠肝脏组织病理HE染色显微图（×400）










                A.正常组               B.模型组             C.阿托伐他汀组          D.金刚藤胶囊低剂量组         E.金刚藤胶囊高剂量组
                                   图2 各组大鼠肝脏组织病理油红O染色显微图（×400）


          中国药房  2025年第36卷第11期                                              China Pharmacy  2025 Vol. 36  No. 11    · 1343 ·
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