Page 53 - 《中国药房》2025年10期
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剂量组（剂量根据“2.2.1”项下预实验结果设置，具体见                       μm）为色谱柱，以0.2%磷酸溶液（A）-乙腈（B）为流动相
         “3.1”项；提前按“2.1”项下方法配制药液并以水稀释至                       进 行 梯 度 洗 脱（0～5  min，5%B→10%B；5～25  min，
          相应质量浓度），每组10只。各组小鼠均一次性灌胃相                          10%B→15%B；25～35 min，15%B→35%B；35～45 min，
          应药液（混合液组给药体积为 20 mL/kg，其余各组为 10                    35%B→55%B；45～55 min，55%B→75%B；55～57 min，
          mL/kg），观察小鼠中毒症状，记录其7 d内的死亡数并计                      75%B）。流速为 1 mL/min；柱温为 30 ℃；进样量为 5
                             [4]
          算死亡率；采用寇氏法 计算各组小鼠的半数致死剂量                           μL；检测波长为260 nm。
         （LD50 ）及其95%置信区间（confidence interval，CI）。           2.5.2 溶液制备
          2.3 远志配伍对砂马镇痛作用影响的检测                                  （1）对照品溶液：取士的宁、马钱子碱对照品适量，
          2.3.1 醋酸扭体实验                                       精密称定，分别置于 10 mL 容量瓶中，加甲醇溶解并稀
              取雄性小鼠 42 只，随机分为对照组（生理盐水）、砂                     释至刻度，摇匀，经0.22 μm微孔滤膜滤过，得士的宁、马
          马单煎液组（50 mg/kg，以砂马生药量计）、砂马远志（1∶                    钱子碱质量浓度分别为0.621、0.513 mg/mL的单一对照
          2.5）共煎液组（50 mg/kg砂马+125 mg/kg远志，分别以砂               品溶液，备用。
          马、远志生药量计，下同）、砂马远志（1∶5）共煎液组（50                         （2）供试品溶液（上清液和沉淀）：取“2.1”项下各水
          mg/kg 砂马+250 mg/kg 远志）、砂马远志（1∶5）混合液组               煎液1 mL，分别置于1.5 mL EP管中，于4 ℃下以12 000
         （50 mg/kg 砂马+250 mg/kg 远志）、阿司匹林组（阳性对                r/min 离心 30 min，分离上清液及沉淀。上清液经 0.22
          照，20 mg/kg），每组7只。砂马的剂量参考2020年版《中                   μm 微孔滤膜过滤，得上清液供试品溶液，备用；沉淀加
          国药典》（一部）推荐的临床剂量，按小鼠体表面积换算，
                                                             甲醇定容至 1 mL，称重，超声 40 min，冷却后再次称重，
          得小鼠给药剂量为50 mg/kg；阿司匹林的剂量参考其成
                                                             用甲醇补足失重，混匀，经 0.22 μm 微孔滤膜过滤，得沉
          人（60 kg）日剂量（120 mg），按小鼠体表面积换算，得小
                                                             淀供试品溶液，备用。
          鼠给药剂量为 20 mg/kg。各药物组小鼠灌胃相应药液                          （3）阴性对照溶液：取甲醇适量，经 0.22 μm 微孔滤
          或生理盐水，灌胃体积均为 10 mL/kg，每天 1 次，连续
                                                             膜过滤，得阴性对照溶液，备用。
          3 d。末次给药后，进行醋酸扭体实验：将室温维持在
                                                             2.5.3 标准曲线绘制和方法学考察
          20 ℃左右，予小鼠腹腔注射0.5%醋酸溶液0.2 mL，记录
                                                                 以甲醇为溶剂，依次稀释“2.5.2（1）”项下单一对照
          其15 min内的扭体次数，并计算镇痛率。镇痛率（%）＝
         （对照组小鼠平均扭体次数－给药组小鼠平均扭体次                             品溶液，再按“2.5.1”项下色谱条件进样分析，记录峰面
                                                             积。以待测成分质量浓度为 x 轴、峰面积为 y 轴进行线
          数）/对照组小鼠平均扭体次数×100%。
                                                             性回归，得士的宁、马钱子碱的回归方程分别为 y＝
          2.3.2 热板实验
                                                                            2
                                                                                                          2
                                                             1 479x－10 297（R ＝0.999 5）、y＝10 652x－14 034（R ＝
              取雌性小鼠50只，经基础痛阈值筛选以剔除疼痛潜
                                                             0.999 3），其检测质量浓度的线性范围分别为 0.032～
          伏期＜5 s或＞30 s的雌性小鼠8只（于分组、给药前检测
                                                             0.621、0.016～0.513 mg/mL。该方法的专属性、精密度、
          2 次，检测间隔 5 min，具体操作见后文“3.2”项）后，按
                                                             准确度、稳定性等方法学考察指标均符合 2020 年版《中
         “2.3.1”项下方法分组（每组 7 只）、给药。分别于末次给
          药后的30、60、90、120 min时进行热板实验：将小鼠置于                   国药典》（四部）相关标准。
                                                             2.5.4 样品测定
         （55.0±0.5）℃恒温水浴中的烧杯内，记录其首次出现
          舔足行为的时间（s），即疼痛潜伏期（设置观测时间为                              取“2.5.2（2）”项下各供试品溶液，按“2.5.1”项下色
                                                             谱条件进样分析，记录峰面积，代入回归方程计算各溶
          60 s，＞60 s的按60 s计）。
                                                             液中士的宁、马钱子碱的含量，并换算为成分百分比（成
          2.4 远志配伍对砂马抗炎作用影响的检测
                                                             分总量以上清液、沉淀供试品溶液中各成分量的总和
              采用二甲苯实验检测。取雄性小鼠42只，按“2.3.1”
          项下方法分组（每组7只）、给药。末次给药后，进行二甲                         计）。每样品重复检测6次，取平均值。
          苯实验：将小鼠用乙醚轻度麻醉，将二甲苯按每只20 μL                        2.6 统计学方法
          均匀涂抹至其右耳表面，但不对左耳进行处理。3 h后，                             采用SPSS 20.0软件对数据进行统计分析。实验数
          将各组小鼠处死，用 6 mm 打孔器于其左右耳相同位置                        据均服从正态分布，以 x±s 表示；多组间比较采用单因
          打孔，称定耳片质量后，计算其耳肿胀度和炎症抑制率。                          素方差分析，进一步两两比较采用 LSD-t 检验。检验水
          小鼠耳肿胀度（mg）＝致炎耳质量－非致炎耳质量，炎症                         准α＝0.05。
          抑制率（%）＝（对照组小鼠平均耳肿胀度－给药组小鼠                          3 结果
          平均耳肿胀度）/对照组小鼠平均耳肿胀度×100%。                          3.1 远志配伍对砂马急性毒性的影响
          2.5 远志配伍对砂马主要成分影响的检测                                   砂马单煎液、砂马远志（1∶2.5）共煎液、砂马远志（1∶
              参照文献[5]，采用HPLC法测定。                             5）共煎液、砂马远志（1∶5）混合液的LD50分别为302.00、
          2.5.1 色谱条件                                         614.47、1 445.44、1 778.28 mg/kg，其中砂马远志（1∶5）混
              以 99603 型迪马 Diamonsil C18 （250 mm×4.6 mm，5     合液的毒性最低。结果见表1。


          中国药房  2025年第36卷第10期                                              China Pharmacy  2025 Vol. 36  No. 10    · 1199 ·
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