Page 58 - 《中国药房》2025年10期

E 5个生产厂家，为便于课题研究，根据原料不同设立泽 的质量比，取96.6 g饮片，加1 500 mL纯水浸泡30 min，
泻汤传统汤剂、泽泻汤配方颗粒两类，样品编号、药材批 武火煮沸后文火煎煮40 min，纱布滤过；二煎加1 000 mL
号见表1。 纯水，武火煮沸后文火煎煮 30 min，纱布滤过；合并滤
表1 泽泻汤传统汤剂、配方颗粒样品信息 液，浓缩至250 mL，冷冻干燥，备用。泽泻传统汤剂、白
泽泻 白术 术传统汤剂：煎煮方法同泽泻汤传统汤剂。泽泻汤配方
样品 样品编号
编号 批号 编号 批号 颗粒：按照泽泻配方颗粒、白术配方颗粒当量换算后，精
泽泻汤传统汤剂 ZXT1 ZX1 240201 BZ1 240101 密称取相应量配方颗粒，加培养基溶解，0.22 μm微孔滤
ZXT2 ZX2 231106 BZ2 231110
ZXT3 ZX3 230704 BZ3 230604 膜过滤除菌，备用。泽泻配方颗粒、白术配方颗粒：分别
ZXT4 ZX4 23031801 BZ4 23091701 按照单味药当量换算后，精密称取相应量配方颗粒，加
ZXT5 ZX5 22082601 BZ5 23011002 培养基溶解，0.22 μm微孔滤膜过滤除菌，备用。
泽泻汤配方颗粒 ZXTa ZXa 2306204101 BZa 2310056101
ZXTb ZXb 2108002W BZb 22120123C 1.2.6 最佳药物浓度的确定
ZXTc ZXc 24030068 BZc 23090003 取对数生长期 HepG2 细胞经 0.25% 胰酶消化，按
ZXTd ZXd 23016381 BZd 23014931 1×10 个/mL 细胞密度接种于 96 孔培养板。在 37 ℃、
5
ZXTe ZXe A3080912 BZe A3090172
5%CO2无菌培养箱中贴壁培养后，弃上清，分别加入不
ZXT：泽泻汤；ZX：泽泻；BZ：白术。
同批次、不同浓度[0（空白对照）、0.04、0.08、0.10、0.20、
1.2.2 主要试剂
0.40、0.80、1.00、2.00、4.00 mg/mL]含药 DMEM 培养基。
胎牛血清（批号 16000-044）购自美国 Invitrogen 公
培养24 h后，吸去细胞上清（40 μL/孔），加三磷酸腺苷试
司；DMEM 培养基、0.25% 胰酶、青霉素-链霉素（批号分
剂（60 μL/孔），振摇 1 min 后，放置于培养箱中孵育 10
别为 CM10017、CC012、CC004）均购自中科迈晨（北京）
min。吸取细胞上清至96孔培养板中，采用酶标仪测定
®
科技有限公司；CellTiter-Glo 发光法细胞活力检测试剂
其吸光度值，计算细胞相对活力。细胞相对活力（%）＝
盒（批号 G7572）购自美国 Promega 公司；油红 O 染色试
（给药孔吸光度值－空白对照孔吸光度值）/（对照孔吸光
剂盒、1×PBS缓冲液（批号分别为G1262、P1020-500ml）
度值－空白对照孔吸光度值）×100%。选取细胞相对
均购自北京索莱宝科技有限公司；实验用高脂细胞添加
活力与空白对照（0 mg/mL）无统计学差异的最低浓度作
剂（批号KC005）购自西安鲲创科技发展有限公司；异丙
为最佳浓度。
醇（批号20180610）购自北京化工厂。
1.2.7 油酸诱导 HepG2 细胞脂质堆积模型的建立及药
1.2.3 主要仪器
物干预
HERAcell VIOS 160i 型 CO2 恒温培养箱、15042 型
分别使用不同浓度[0（空白对照）、75、150、300、
96 孔白色不透明孔板均购自美国 Thermo Fisher Scien‐
600、1 200 μmol/L]油酸钠处理细胞，培养 24 h 后，根据
tific 公司；DM IL LED 型倒置显微镜购自德国 Leica 公
“1.2.6”项下方法测定吸光度值并计算细胞相对活力。
司；VLBLATGD2型酶标仪购自美国BioTek公司；3-18K
选取无细胞毒性的油酸钠浓度（300 μmol/L）处理细胞，
型高速低温离心机购自美国 Sigma公司；BBS-V1800 型 5
培养 24 h 进行造模。将 HepG2 细胞以 4×10 个/mL 细
细胞用超净工作台购自山东博科生物产业有限公司；
胞密度接种于 6 孔培养板，按照上述内容进行造模、给
ME204E/02 型万分之一分析天平、XS205DU 型十万分
药，在37 ℃、5%CO2无菌培养箱中培养24 h；弃上清，用
之一分析天平均购自梅特勒-托利多仪器（上海）有限公 1×PBS 洗 2 次，加油红 O 固定液固定 20 min；弃去固定
司；QB-9002型微孔板快速振荡器购自海门市其林贝尔 液，用蒸馏水洗 2 次，加入 60% 异丙醇浸洗 20 s；弃去
仪器制造有限公司；REF3516型6孔培养板、CLS3922型 60% 异丙醇，加入过滤后的油红 O 染色液浸染 10 min；
96 孔培养板均购自美国 Corning 公司；移液枪（100～ 弃去染色液，60% 异丙醇漂洗 20 s，蒸馏水洗 5 次；加入
1 000 μL）购自德国Eppendorf公司。 Mayer苏木素染色液，复染核1 min；弃去染液，蒸馏水洗
1.2.4 细胞株 5 次；加入油红 O 缓冲液孵育 1 min，弃去。加蒸馏水覆
人肝癌细胞 HepG2 购自天津创科生物科技有限公 盖细胞，显微镜下观察脂滴形成情况，用以判断造模是
司，用含 10% 胎牛血清、100 U/mL 青霉素-链霉素的 否成功 [14―19] 。
DMEM 高糖培养基，在 37 ℃、5%CO2 无菌培养箱中 1.2.8 细胞脂质堆积检测
培养 。 分别将细胞设为空白对照组、模型组、泽泻汤配方
[29]
1.2.5 分组与样品制备 颗粒组、泽泻汤传统汤剂组、泽泻配方颗粒组、泽泻传统
本实验分为泽泻汤传统汤剂组、泽泻传统汤剂组、 汤剂组、白术配方颗粒组、白术传统汤剂组。空白对照
白术传统汤剂组、泽泻汤配方颗粒组、泽泻配方颗粒组、 组细胞在标准培养液中正常培养，模型组进行24 h油酸
白术配方颗粒组。泽泻汤传统汤剂：按照泽泻-白术5∶2 钠干预，各给药组分别进行24 h油酸钠与各批次药物干

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