Page 46 - 《中国药房》2025年10期
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神经病理性疼痛（neuropathic pain，NP）是由周围或               焦显微镜（日本 Olympus 公司），Multiskan FC 型酶标仪
          中枢神经系统病变/疾病引起的慢性继发性疼痛，以痛觉                          （美国 Thermo Fisher Scientific 公司），Gel Doc XR+型凝
          过敏、异常疼痛、自发性疼痛等躯体疼痛异常为主要症                            胶成像仪（美国Bio-Rad公司）等。
          状，具有发病率高、持续时间长等特点，是严重影响患者                           1.2 主要药品与试剂
          生活质量的公共卫生问题            [1―2] 。目前，药物（包括阿片类               安石榴苷对照品（纯度 99.97%，批号 HY-N0063）、
          药物、非甾体抗炎药和抗惊厥药）干预仍然是临床治疗                            HIF-1α 拮抗剂 2-甲氧基雌二醇（2-methoxyestradiol，2-
          NP 的主要手段，但上述药物若长期使用可能引发严重                           ME）的对照品（纯度 99.76%，批号 HY-12033）均购自美
                                           [3]
          的毒副作用，从而影响患者的治疗结局 。因此，尽快开                           国 MCE 公司；HIF-1α 激动剂二甲基草酰甘氨酸（di‐
          发更有效、更安全的NP治疗药物至关重要。                                methyloxaloylglycine，DMOG）的对照品（纯度≥98%，批
              神经炎症是 NP 的病理基础，核苷酸结合结构域富                        号 D3695）购自美国 Sigma-Aldrich 公司；TUNEL 一步法
          含亮氨酸重复序列和含热蛋白结构域受体3（nucleotide-                     细胞凋亡检测试剂盒（批号C1086）购自上海碧云天生物
          binding  domain  leucine-rich  repeat  and  pyrin  domain-  技术股份有限公司；TNF-α、IL-1β、IL-6酶联免疫吸附测
          containing receptor 3，NLRP3）炎症小体能够感知机体内             定（ELISA）试剂盒和六胺银染色液（改良 Grocott-苏木
          部的损伤和应激信号，并触发炎症反应。在 NP 发生过                          精 法）（批 号 分 别 为 ml002859、ml003057、ml102828、
          程中，NLRP3 炎症小体被激活，促进白细胞介素 1β（in‐                     ml28108-1）均购自上海酶联生物技术有限公司；兔抗
          terleukin-1β，IL-1β）等炎症因子释放，从而进一步加剧                  HIF-1α、NLRP3、胱天蛋白酶 1（caspase-1）、凋亡相关斑
          神经炎症和疼痛反应          [4―5] 。可见，NLRP3 炎症小体可能           点样蛋白（apoptosis-associated speck-like protein contai-

          是新型镇痛药作用的潜在靶点。缺氧诱导因子 1α                             ning a CARD，ASC）、甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）抗
         （hypoxia-inducible factor-1α，HIF-1α）是细胞在缺氧条          体，鼠抗离子钙结合衔接分子 1（ionized calcium binding
          件下的重要转录因子，在炎症反应中具有重要作用：在                            adapter molecule 1，Iba-1）抗体，辣根过氧化物酶标记的
                                                                                            ®
          坐骨神经慢性压迫损伤（chronic constriction injury，CCI）         羊抗兔 IgG（H&L）二抗，Alexa Fluor  647 标记的羊抗鼠
          诱导的NP大鼠中，抑制HIF-1α的表达可少肿瘤坏死因                         IgG（H&L）二抗，Alexa Fluor  488 标记的羊抗兔 IgG
                                                                                       ®
          子 α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）和 IL-1β 的过度分     （H&L）二抗（批号分别为ab179483、ab283819、ab286125、
          泌，减轻大鼠的NP并促进神经功能恢复                [6―7] 。此外，HIF-    ab307560、ab181602、ab283319、ab6721、ab150115、ab150077）
          1α 还可通过激活 NLRP3 炎症小体来诱导炎症反应，而                       均购自英国Abcam公司。
          抑制HIF-1α/NLRP3信号通路可减轻脑卒中后中枢性疼                       1.3 实验动物
          痛模型大鼠的神经炎症，改善其脑卒中后中枢性疼痛及                                90只SD大鼠，雄性，SPF级，体重（200±20）g，6～7
                           [8]
          焦 虑 、抑 郁 等 症 状 。 以 上 研 究 表 明 ，靶 向 HIF-1α/           周龄，由湖北贝恩特生物科技有限公司提供，动物生产
          NLRP3 信号通路介导的神经炎症可能是 NP 治疗的新                        许可证号为 SCXK（鄂）2021-0027。将大鼠以每笼 3～4
          途径。                                                 只饲养在恒温[（23±1）℃]、恒湿[（55±5）%]、光暗循环
              安石榴苷是提取自石榴 Punica granatum L. 果皮的              （12 h/12 h）的动物房内，自由摄食、饮水。本研究方案经
          多酚类物质，具有抗炎、抗癌、抗病毒和抗氧化等作用 。                          湖北贝恩特生物科技有限公司动物伦理委员会审核批
                                                        [9]
          相关文献表明，安石榴苷可缓解脊髓炎症性疼痛 以及                            准（编号BNT-08685）。
                                                    [10]
          长春新碱诱发的 NP 。此外，有报道证实，安石榴苷可                          2 方法
                           [11]
          通过抑制NLRP3炎症小体的活化来减少炎症反应引起                           2.1 分组、造模与给药
          的细胞死亡 。然而，安石榴苷的镇痛作用是否与HIF-                              将大鼠随机分为假手术组（18只）和造模组（72只）。
                    [12]
                                                                                    [13]
          1α/NLRP3 信号通路有关尚未可知。基于此，本研究拟                        造模组大鼠参照相关文献 以CCI法建立NP模型：大鼠
          采用CCI法诱导建立NP大鼠模型，从HIF-1α/NLRP3信                     以戊巴比妥钠腹腔注射麻醉，从右后肢大腿中段平行于
          号通路出发，初步探讨安石榴苷对 NP 大鼠的镇痛作用                          坐骨神经的方向切开皮肤，暴露坐骨神经主干，用4-0羊
          及潜在机制，为 NP 的临床治疗及相关药物开发提供理                          肠线结扎（以足趾或下肢轻微抽动为度），共4道（间隔1
          论依据。                                                mm）。假手术组大鼠仅暴露右后肢坐骨神经主干，不使
          1 材料                                                用羊肠线结扎。所有手术均由同一个人完成，以尽量减

          1.1 主要仪器                                            少操作差异。造模1周后，检测两组大鼠的机械缩足反
              本研究所用主要仪器包括 BME-410C 型全自动热                      射阈值（mechanical withdrawal threshold，MWT），若造模
                                                                                                           [13]
          痛刺激仪、BME-403 Von Frey 型机械痛测定仪（中国医                   组大鼠 MWT 较假手术组显著降低则表明造模成功 。
          学科学院生物医学工程研究所），BX43 型光学显微镜、                         将造模成功的大鼠随机分为 NP 组、2-ME 组、安石榴苷
          BX53型荧光显微镜、Fluoview FV3000型激光扫描共聚                   组、安石榴苷+DMOG组，每组18只。2-ME组大鼠腹腔


          · 1192 ·    China Pharmacy  2025 Vol. 36  No. 10                            中国药房  2025年第36卷第10期
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