Page 42 - 《中国药房》2025年10期

P21、TGF-β1、Smad3、Smad7、EGF、EGFR一抗（稀释度均 浸润；与模型组比较，吡非尼酮组和补阳还五汤各剂量
为1∶100），4 ℃孵育过夜；次日加入相应二抗（稀释度均 组大鼠肺组织损伤均明显减轻，仅有少部分肺泡结构被
为 1∶100），室温孵育 20 min；以 DAB 显色，经苏木素复 破坏，肺实质结构规则，炎症细胞浸润明显减少，其中补
染、分化、返蓝、封片后，采用光学显微镜观察，并拍照； 阳还五汤中、高剂量组大鼠肺组织改善情况与吡非尼酮
采用Image J软件测定每个视野下各蛋白阳性染色的平 组相似。结果见图2。
均光密度值，以表示相应蛋白的表达水平。
2.6 肺组织中MMP-12、CCL2、IL-4蛋白表达检测
采用Western blot法进行检测。取“2.3”项下各组大
鼠冻存肺组织 50 mg，充分剪碎后，加入 RIPA 裂解液裂
解，提取总蛋白。以GAPDH为内参，经上样、电泳、转膜 A.正常组 B.模型组 C.吡非尼酮组
和封闭后，加入 MMP-12、CCL2、IL-4 一抗（稀释度均为
1∶1 000），孵育过夜；加入相应二抗（稀释度均为1∶1 000），
常温孵育 1 h。经化学发光试剂显色后，置于凝胶成像
系统中成像，再采用Image J软件分析灰度值，以目的蛋
D.补阳还五汤低剂量组 E.补阳还五汤中剂量组 F.补阳还五汤高剂量组
白与内参蛋白（GAPDH）的灰度值比值表示目的蛋白的
注：箭头所指为肺泡。
表达水平。
图2 大鼠肺组织病理学形态HE染色显微图
2.7 统计学方法
Masson染色结果显示，正常组大鼠肺组织有少量纤
采用 GraphPad Prism 10.0 软件进行统计分析。符
维化[胶原沉积分数为（1.118±0.087）%]；与正常组比
合正态分布的计量资料以x±s表示，多组间比较采用单
较，模型组大鼠肺组织可见大量的胶原纤维增生，纤维
因素方差分析，组间两两比较采用 LSD-t 检验。检验水
化程度明显，胶原沉积分数[（1.531±0.093）%]显著升高
准α＝0.05。
（P＜0.01）；与模型组相比，吡非尼酮组和补阳还五汤
3 结果
低、中、高剂量组大鼠纤维化程度减弱，胶原沉积分数
3.1 补阳还五汤对IPF大鼠肺组织外观形态的影响
[ （1.137±0.091）%、（1.309±0.121）%、（1.207±0.045）%、
正常组大鼠肺组织的结构正常、光滑红润、柔软有
（1.246±0.122）%]均显著降低（P＜0.01）。结果见图3。
弹性；与正常组比较，模型组大鼠肺组织的颜色灰白、质
地变硬，有明显的瘀斑和囊肿；吡非尼酮组和补阳还五
汤各剂量组大鼠肺组织的外观形态均较模型组有所改
善，且随着补阳还五汤剂量的增加，改善效果越明显，其
中补阳还五汤中、高剂量组大鼠肺组织的外观形态与吡
A.正常组 B.模型组 C.吡非尼酮组
非尼酮组相似。结果见图1。

D.补阳还五汤低剂量组 E.补阳还五汤中剂量组 F.补阳还五汤高剂量组
注：箭头所指为肺组织纤维化。
A.正常组 B.模型组 C.吡非尼酮组 图3 大鼠肺组织病理学形态Masson染色显微图
3.3 补阳还五汤对 IPF 大鼠肺组织中 P16、P21、TGF-
β1、Smad3、Smad7、EGF、EGFR表达的影响
与正常组比较，模型组大鼠肺组织中 P16、P21、
TGF-β1、Smad3、EGF、EGFR 蛋白表达水平均显著升高
D.补阳还五汤低剂量组 E.补阳还五汤中剂量组 F.补阳还五汤高剂量组 （P＜0.05），Smad7蛋白表达水平显著降低（P＜0.05）；与
图1 大鼠肺组织外观形态学观察 模型组比较，吡非尼酮组和补阳还五汤各剂量组大鼠肺
3.2 补阳还五汤对IPF大鼠肺组织病理学形态的影响 组织中 P16、P21、TGF-β1、Smad3、EGF、EGFR 蛋白表达
HE染色结果显示，正常组大鼠肺组织正常；模型组 水平均显著降低（P＜0.05），Smad7蛋白表达水平显著升
大鼠肺组织中肺泡间隔增厚、肺血管基底膜增厚，肺泡 高（P＜0.05）。结果见图 4（鉴于篇幅有限，仅展示 P16、
结构被严重破坏，肺实质结构紊乱，有大量的炎症细胞 P21、TGF-β1蛋白表达的免疫组化图）、表1。

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