Page 46 - 《中国药房》2025年7期

experiment， the primary nucleus pulposus cells were isolated and cultured from rats， and cellular degeneration was induced using
50 ng/mL TNF-α. The cells were divided into blank control group （10% blank control serum）， TNF-α group （10% blank control
serum）， YC-1 group （10% blank control serum+0.2 mmol/L YC-1）， and 5%， 10%， 15% drug-containing serum group （5%，
10%， 15% drug-containing serum）. After 24 hours of intervention， the nucleus pulposus cells were co-cultured with HUVEC. The
expressions of Collagen Ⅱ， matrix metalloproteinase-3 （MMP-3） in nucleus pulposus cells were detected. HUVEC proliferation，
migration and tube forming ability were detected， and the expression levels of the HIF-1α/VEGF/Ang signal axis and angiogenesis-
related proteins （add MMP-2， MMP-9） in HUVEC were detected. RESULTS Animal experiments had shown that compared with
model group， the positive expression of CD31 in the intervertebral disc tissues of rats in each drug group was down-regulated （P＜
0.05）， the levels of inflammatory factors and angiogenesis-related proteins were decreased significantly （P＜0.05）， and the
pathological changes in the intervertebral disc were alleviated. Cell experiments had shown that compared with TNF-α group， the
expression of Collagen Ⅱ in nucleus pulposus cells of all drug groups was significantly up-regulated （P＜0.05）， and the expression
of MMP-3 was significantly down-regulated （P＜0.05）； the proliferation， migration and tubulogenesis of HUVEC were
significantly weakened （P＜0.05）. The mRNA and protein expressions of HIF-1α， VEGF， Ang 2 as well as the expression of
angiogenesis-related proteins （except for the expression of Ang 2 mRNA and HIF-1α， VEGFR2， Ang 2 protein in 5% drug-
containing serum group） were significantly down-regulated （P＜0.05）. CONCLUSIONS ZQGCD may inhibit the HIF-1α/VEGF/
Ang signal axis to weaken the angiogenic ability of vascular endothelial cells， improve pathological angiogenesis in the
intervertebral disc， and delay the degeneration of the intervertebral disc.
KEYWORDS Zhiqiao gancao decoction； intervertebral disc degeneration； pathological angiogenesis； HIF-1α/VEGF/Ang signal
axis； degeneration of nucleus pulposus cells； inflammatory factors

椎间盘退变（intervertebral disc degeneration，IDD） 壳甘草汤对退变椎间盘病理性血管新生及 HIF-1α/
是指受年龄增长、肥胖、负重等不良因素影响，髓核组织 VEGF/Ang 信号轴的影响，进一步探讨枳壳甘草汤治疗
水分减少，椎间盘失去弹性和张力，纤维环结构破坏、髓 IDD的效应机制。
[1]
核组织结构发生异常改变 。IDD 是纤维环撕裂、脊柱 1 材料
不稳、小关节退变、椎间盘突出、椎管狭窄和慢性腰痛等 1.1 主要仪器
[1]
脊柱疾病的基础，延缓 IDD 具有重要临床意义 。正常 本研究所用的主要仪器包括ELx800型光吸收酶标
成年人的椎间盘仅外层的纤维环长有小毛细血管，而在 仪（美国 Bio-Tek 公司）、Tanon 5200 型化学发光成像系
IDD过程中，血管由纤维环外层沿着裂隙向终板和纤维 统（上海天能科技有限公司）、Heraeus Fresco17 型离心
环内层长入，为免疫细胞提供了迁移通道；此外，巨噬细 机（美国 Thermo Fisher Scientific 公司）、BSA124S-CW
胞等免疫细胞通过新生的血管浸润到退变椎间盘之后， 型电子天平（德国 Sartorius 公司）、DMI3000B 型荧光显
通过释放肿瘤坏死因子 α（tumor necrosis factor-α，TNF- 微镜（德国Leica公司）等。
α）、白细胞介素 1β（interleukin-1β，IL-1β）等促炎因子， 1.2 主要药品与试剂
启动下游免疫炎症反应，形成炎症微环境，加速疾病进 枳壳、黑丑、白丑饮片（批号分别为 230307010、
[2]
程 。因此，病理性血管新生被认为是 IDD 的重要标志 220906006、211227006，苏州天灵中药饮片有限公司）以
之一。研究发现，由缺氧诱导因子1α（hypoxia inducible 及当归、三棱、莪术、甘草饮片（批号分别为 230411、
factor-1α，HIF-1α）、血管内皮生长因子（vascular endothe‐ 221021、221025、230207，苏州春晖堂有限公司）和丹参
lial growth factor，VEGF）、血 管 紧 张 素（angiotensin， 饮片（批号 20230203-C5，贵州同德药业股份有限公司）
[3]
Ang）构成的信号轴在血管生成过程中起着重要作用 。 均由苏州市中医医院药剂科采购并鉴定为真品。
枳壳甘草汤是苏州市中医医院骨伤科治疗腰椎退 HIF-1α 抑制剂 Lificiguat（YC-1，批号 S7958，纯度
变疾病的常用经验方，该方由全国名老中医药专家龚正 99.94%）购自美国 Selleck 公司；苏木素-伊红（HE）染色
丰教授创立，具有逐瘀利水、通络止痛的功效。临床研 试 剂 盒 、BCA 蛋 白 浓 度 测 定 试 剂 盒（批 号 分 别 为
究显示，该方单独使用或与腰椎牵引、椎间孔镜等疗法 C0105S、P0010）均购自上海碧云天生物技术有限公司；
联用，均可有效缓解腰椎间盘突出及腰椎退变患者的疼 IL-1β、IL-6、TNF-α 酶联免疫吸附测定（ELISA）试剂盒
痛症状、改善腰椎功能 [4―5] 。前期研究显示，枳壳甘草汤 （批号分别为 LA167616H、LA160102H、LA166601H）均
可有效减少 IDD 模型大鼠椎间盘巨噬细胞浸润，抑制 购自南京拉普达生物科技有限公司；兔源CD31、基质金
IL-1β、IL-6和TNF-α等炎症因子及单核细胞趋化蛋白1 属蛋白酶3（matrix metalloproteinase-3，MMP-3）、Ⅱ型胶
表达，延缓IDD进程 [6―7] 。本研究在前期研究基础上，基 原蛋白（Collagen Ⅱ）、HIF-1α、MMP-2、MMP-9、Ang 1、
于病理性血管新生与巨噬细胞浸润的联系，通过观察枳 Ang 2、VEGF、甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）多克隆抗

· 808 · China Pharmacy 2025 Vol. 36 No. 7 中国药房 2025年第36卷第7期