Page 41 - 《中国药房》2025年7期
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1.3 动物与饲料                                          素-伊红（HE）、Masson、Timm 染色，采用显微镜观察大
                                                                                                   2+
              本研究所用动物为 SPF 级 SD 大鼠，共 50 只，雄性，                鼠心肌组织病理学形态、纤维化程度以及Cu 沉积情况
                                                                2+
          体重（180±20）g，购自辽宁长生生物技术股份有限公                       （Cu 富集区会出现棕黑色颗粒状或点状沉积）。
          司，实验动物生产许可证号为SCXK（辽）2020-0001。大                    2.5 大鼠心肌组织中Cu 、GSH水平检测
                                                                                  2+
          鼠在温度为（22±2） ℃、相对湿度为45%～60%、12 h光                       取各组大鼠冻存的心肌组织适量，按试剂盒说明书
          照/12 黑暗循环的环境中适应性饲养1周，自由摄食、饮                        方法处理，检测心肌组织中Cu 、GSH水平。
                                                                                       2+
          水。本实验经黑龙江中医药大学实验动物管理及福利                            2.6 大鼠心肌组织中Sirt1/P53信号通路和铁硫簇相关
          伦理审查委员会批准，批准编号为2023113021。                         蛋白以及HSP70表达水平检测
              高脂高糖饲料购自江苏省协同医药生物有限公司。                             取各组大鼠冻存的心肌组织适量，加入裂解液后研
          2 方法                                               磨提取总蛋白，离心；取上清液，测定蛋白浓度后，进行
          2.1 分组、造模与给药                                       蛋白变性。取变性蛋白样品进行十二烷基硫酸钠-聚丙
              42只大鼠适应性喂养1周后，将正常饲料更换为高                        烯酰胺凝胶电泳，再于 200 mA 恒流条件下转膜；以 5%
          脂高糖饲料，继续喂养16周，诱导肥胖和胰岛素抵抗；禁                         脱脂奶粉封闭 2 h，再加入 Sirt1、P53、SLC7A11、FDX1、
          食 12 h 后腹腔注射 STZ（35 mg/kg）建立 2 型糖尿病模
                                                             LIAS、DLAT、DLST、ACO2、NDUFS8、HSP70一抗（稀释
          型，STZ 注射 1 周后，测定大鼠空腹血糖（fasting blood
                                                             度均为 1∶2 000）于 4 °C 条件下孵育过夜；次日，加入二
          glucose，FBG），当 FBG≥11.1 mmol/L 时，则表明 2 型糖
                                                             抗（稀释度为1∶5 000）于室温条件下孵育90 min。采用
                          [11]
          尿病模型造模成功 ；进一步尾静脉取血检测大鼠心肌
                                                             ECL显影，再进行凝胶成像，利用Image J 软件分析条带
          损伤标志物CK、CK-MB、LDH的水平，当其水平高于不
                                                             灰度值，以目的蛋白与内参蛋白（GAPDH 或 β-actin）的
                                              [12]
          造模大鼠 2 倍时，表明 DCM 模型造模成功 。最终，35
                                                             灰度值比值表示目的蛋白的表达水平。
          只大鼠造模成功，随机取其中 32 只分为模型组（Model
                                                             2.7 统计学方法
          组）、TAC 低剂量组（TAC-L 组）、TAC 中剂量组（TAC-M
                                                                 采用 SPSS 26.0 统计分析软件处理数据。采用
          组）、TAC 高剂量组（TAC-H 组），每组 8 只。另取 8 只大
                                                             Shapiro-Wilk 法进行正态性分布检验，对于符合正态分
          鼠以正常饲料喂养作为正常对照组（NC组）。依据人与
                                                             布的计量资料以x±s表示，多组间比较采用单因素方差
          动物体表面积折算等效剂量 ，并结合本课题组前期研
                                  [13]
                                                             分析，组间两两比较采用LSD-t检验。检验水准α＝0.05。
          究 ，TAC-L、TAC-M、TAC-H组大鼠分别灌胃7、10.5、14
            [9]
                                                             3 结果
          mg/kg TAC 混悬液；NC、Model 组大鼠灌胃等体积生理
                                                             3.1 大鼠FBG水平检测结果
          盐水，每天 1 次，连续 4 周。另外，给药期间除 NC 组外，
                                                                 与 NC 组[（7.53±1.58） mmol/L]相比，Model 组大鼠
          其余各组大鼠仍保持高脂高糖饲料喂养。
                                                             FBG 水平[（17.81±2.16）mmol/L]显著升高（P＜0.05）。
          2.2 大鼠FBG水平检测
                                                             与Model组相比，TAC-L、TAC-M、TAC-H组大鼠FBG水
              末次给药后，检测各组大鼠FBG水平。
          2.3 大鼠血清、心肌组织中 CK、CK-MB、LDH 水平                     平[（13.88±1.59）、（12.26±0.87）、（11.48±0.97） mmol/L]
          检测                                                 均显著降低（P＜0.05）。
              给药前，各组大鼠尾尖取血约 0.5 mL，离心分离血                     3.2 大鼠血清中CK、CK-MB、LDH水平检测结果
          清备用。末次给药后，大鼠腹腔注射 2% 戊巴比妥钠（3                            给药前，与NC组相比，Model组和TAC各剂量组大
          mL/kg）进行麻醉，腹主动脉取血约3 mL，离心分离血清                      鼠 血 清 中 CK、CK-MB、LDH 水 平 均 显 著 升 高（P＜
          备用。随后处死大鼠，取心脏，观察心脏情况后，一部分                          0.05）。给药后，与NC组相比，Model组大鼠血清中CK、
          心肌组织置于－80 ℃冰箱保存，一部分心肌组织置于                          CK-MB、LDH水平均显著升高（P＜0.05）；与Model组相
          4%多聚甲醛固定。取各组大鼠给药前和给药后血清以                           比，TAC各剂量组大鼠血清中CK、CK-MB、LDH水平均
          及冻存的心肌组织适量，按试剂盒说明书方法检测其中                           显著降低（P＜0.05）。结果见表1。
          CK、CK-MB、LDH水平。                                    3.3 大鼠心肌组织中CK、CK-MB、LDH水平检测结果
          2.4 大鼠心肌组织病理学形态、纤维化程度及Cu 沉积                            与 NC 组相比，Model 组大鼠心肌组织中 CK、CK-
                                                    2+
          观察                                                 MB、LDH水平均显著升高（P＜0.05）；与Model组相比，
              取各组大鼠于4%多聚甲醛中固定的心肌组织进行                         TAC 各剂量大鼠心肌组织中 CK、CK-MB、LDH 水平均
          常规脱水、透明、石蜡包埋和切片，取切片分别进行苏木                          显著降低（P＜0.05）。结果见表2。


          中国药房  2025年第36卷第7期                                                 China Pharmacy  2025 Vol. 36  No. 7    · 803 ·
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