Page 50 - 《中国药房》2025年4期
P. 50

0.05  or  P<0.01).  In  contrast,  the  inhibitor  group  showed  comparable (P>0.05)  or  worse (P<0.05  or  P<0.01)  indicators
          compared  to  the  model  group.  Conversely,  the  addition  of  AMPK  inhibitor  could  significantly  reverse  the  improvement  of  high-
          dose  paconiflorin (P<0.01).  CONCLUSIONS  Paeoniflorin  can  repair  intestinal  epithelial  cell  damage  in  mice,  improve  tight
          junctions  between  epithelial  cells,  upregulate  the  expression  of  related  proteins,  and  promote  the  expression  and  secretion  of
          antioxidant-promoting  molecules,  thereby  ameliorating  UC;  its  mechanism  may  be  associated  with  activating  AMPK/Nrf2
          antioxidant pathway.
          KEYWORDS     paeoniflorin; ulcerative colitis; oxidative stress; AMPK/Nrf2 pathway



              溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)是一种反复发             多功能酶标仪(德国 BMG Labtech 公司),HT7700 型透
          作的慢性炎症性肠病,可从远端开始向近端延伸直至累                            射电子显微镜(日本Hitachi公司),RM2016型病理切片
          及整个结肠,以腹泻、腹痛、里急后重、黏液脓血便和体                           机(上海徕卡仪器有限公司),PowerPac 型电泳仪、小型
          重减轻等为主要临床表现。近年来,UC 的患病率和复                           电泳槽和转印槽(美国Bio-Rad公司),OI 600MF型全自
          发率逐年上升,尽管其病因尚不清楚,但有研究证实,                            动化学发光凝胶成像系统(广州光仪生物科技有限公
          UC的发生与遗传因素、环境因素、个体因素(机体炎症、                          司)等。
                                    [1]
          氧化应激、免疫失衡)密切相关 。在UC炎症反应期,炎                          1.2 主要药品与试剂
          症细胞可募集到损伤部位,使得耗氧量增加、氧自由基                                芍药苷对照品(批号 S31585,纯度>98%)、AMPK
          生成增多;同时,炎症细胞还可分泌促炎因子,进一步刺                           抑制剂 Compound C 的对照品(批号 S24HS195965,纯
          激活性氧的产生,从而导致机体发生氧化应激反应,致                            度>98%)均购自上海源叶生物科技有限公司;葡聚糖
                             [1]
          使肠道黏膜屏障受损 。腺苷一磷酸活化的蛋白激酶                             硫酸钠(dextran sulfate sodium,DSS;批号S8634)购自美
         (adenosine  monophosphate-activated  protein  kinase,  国 MP 公司;丙二醛(malondialdehyde,MDA)酶联免疫
          AMPK)/核转录因子红系 2 相关因子 2(nuclear factor-              吸附测定(ELISA)试剂盒(批号YX-130401M)购自上海
          erythroid 2-related factor 2,Nrf2)是重要的抗炎和抗氧化        优选生物科技有限公司;超氧化物歧化酶(superoxide
          信号通路,激活此通路可减少促炎因子释放、减轻机体                            dismutase,SOD)试剂盒(批号 S0101M)、谷胱甘肽过氧
                                      [2]
          氧化应激损伤,从而缓解UC症状 。                                   化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)试剂盒(批号
              目前,临床治疗 UC 的常规药物效果有限且毒副作                        S0059S)均购自上海碧云天生物技术股份有限公司;苏
          用大,患者复发率极高,而天然植物及其单体具有疗效                            木精-伊红(HE)染液(批号G1005)购自北京索莱宝科技
                                        [3]
          好、副作用少的优点,备受学界关注 。芍药苷作为中药                           有限公司;BCA蛋白质定量试剂盒(批号AR1110)、鼠源
          白芍的主要活性成分,在多种治疗 UC 的方剂中广泛存                          β-肌动蛋白(β-actin)抗体(批号 BM0627)均购自德国
          在,具有抗炎、抗氧化、调节免疫等药理活性 。本课题                           Boster Biological公司;兔源AMPK、Nrf2、血红素加氧酶
                                                [4]
          组前期研究表明,芍药苷可降低 UC 小鼠血清中肿瘤坏                          1(heme oxygenase-1,HO-1)、闭合蛋白(occludin)、密封
          死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和白细胞介素           蛋白 1(claudin-1)抗体和辣根过氧化物酶(HRP)标记的
          6(interleukin-6,IL-6)等促炎因子水平,上调 AMPK、自              羊 抗 兔 、羊 抗 鼠 IgG 二 抗(批 号 分 别 为 10929-2-AP、
          噬 相 关 蛋 白 Beclin-1、微 管 相 关 蛋 白 1 轻 链 3              16396-1-AP、 10701-1-AP、 27260-1-AP、 10305-1-AP、
         (microtubule-associated  protein  1  light  chain  3,LC3)  SA00001-2、SA00001-1)均购自美国 Proteintech公司;兔
          mRNA的表达,下调哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mamma‐                        源磷酸化 AMPK(phosphorylated AMPK,p-AMPK)抗体
          lian target of rapamycin,mTOR)、p62 mRNA 的表达,增      (批号CY5608)购自美国Abways公司;高灵敏度ECL化
          强细胞自噬,减轻 UC 小鼠的肠黏膜损伤,缓解 UC 症                        学发光试剂盒(批号 20230406)购自南京建成生物工程
            [5]
          状 。考虑到芍药苷具有较强的抗氧化作用,而氧化应                            研究所;电镜固定液(批号G1102)购自武汉谷歌生物科
                                       [1]
          激是UC发生发展的重要因素之一 ,故本研究拟从氧化                           技有限公司。
          应激角度探讨芍药苷对 UC 小鼠的影响及潜在机制,以                          1.3 实验动物
          期为芍药苷用于UC治疗及相关药物研发提供参考。                                 本研究选用 SPF 级雄性 BALB/c 小鼠 56 只,体重为
          1 材料                                               (20±2)g,购自辽宁长生生物技术股份有限公司,动物
          1.1 主要仪器                                            生产许可证号为 SCXK(辽)2020-0001。所有动物均在
              本研究所用主要仪器包括2720 Thermal Cycler型聚                温度(20±5)℃、相对湿度30%~50%、每12 h自然光照/
          合酶链式反应(PCR)仪、7300 型实时荧光定量 PCR 仪                     黑暗循环条件下饲养。本实验方案已通过长春中医药
         (美国 Applied Biosystems 公司),SPECTROstar Nano 型        大学实验动物伦理委员会审批(批准编号2023477)。


          · 428 ·    China Pharmacy  2025 Vol. 36  No. 4                               中国药房  2025年第36卷第4期
   45   46   47   48   49   50   51   52   53   54   55