Page 37 - 《中国药房》2025年3期

Synergy score）。ZIP Synergy score＞0 分被认为具有协 表1 工艺筛选因素与水平（处方量为5 mL）
同作用，＞10 分被认为具有强协同作用 。结果表明， 水平 X 1/mg X 2 X 3/℃
[11]
在协同毒性实验中，PTX/ICA 组合在抑制 RENCA 细胞 －1 60 2∶1 20
0 80 4∶1 35
增 殖 方 面 表 现 出 了 高 度 的 协 同 效 应（ZIP Synergy
1 100 6∶1 50
score＞10分），相较于单独用药，联合应用显著增强了对
表2 工艺筛选实验设计及结果
RENCA细胞的杀伤作用。当PTX浓度在2.5～10 μmol/L
实验号 X 1/mg X 2 X 3/℃ ICA包封率/% PTX包封率/% Y/%
区间、ICA 浓度在 5～15 μmol/L 区间时，表现出最强的
1 100 4∶1 20 51.49 48.67 50.08
协同毒性。 2 100 2∶1 35 81.09 70.18 75.63
2.2 MTX-oxi-Ms@PTX/ICA胶束的制备 3 80 4∶1 35 92.45 94.70 93.57
采用薄膜水合法制备胶束。精密称取处方量的 4 60 2∶1 35 39.76 43.23 41.49
5 80 4∶1 35 92.88 94.46 93.66
DSPE-PEG2000-MTX、DSPE-PEG2000-TK-PEG5000、
6 100 4∶1 50 50.90 48.38 49.64
®
Soluplus 、TPGS1000、PTX、ICA 于圆底烧瓶中，加甲醇 7 80 2∶1 50 38.84 43.19 41.01
溶解，减压除去溶剂，此时圆底烧瓶内壁形成一层均匀 8 80 6∶1 50 38.82 42.16 40.49
的薄膜；向烧瓶中加入 PBS，超声振荡使薄膜溶在 PBS 9 60 4∶1 20 60.93 53.64 57.28
10 80 4∶1 35 90.93 93.79 92.36
中；静置，待溶液透明后，用 0.22 μm 聚碳酸酯膜挤压 2
11 60 4∶1 50 47.97 47.82 47.89
次，即得MTX-oxi-Ms@PTX/ICA。 12 100 6∶1 35 60.57 53.22 56.89
采 用 相 同 方 法 制 备 不 加 DSPE-PEG2000-TK- 13 80 6∶1 20 84.69 81.28 82.98
PEG5000 的 MTX 修 饰 的 PTX/ICA 胶 束（MTX- 14 80 2∶1 20 32.85 31.29 32.07
15 80 4∶1 35 90.28 93.73 92.00
Ms@PTX/ICA）、不 加 DSPE-PEG2000-MTX 和 DSPE- 16 80 4∶1 35 88.07 84.86 86.46
PEG2000-TK-PEG5000 的 PTX/ICA 胶 束（Ms@PTX/ 17 60 6∶1 35 86.91 83.59 85.24
ICA）、不加PTX和ICA的空白胶束（Blank-Ms）。
利用 Design-Expert 8.0.6.1 软件，根据表 2 数据进行
2.3 MTX-oxi-Ms@PTX/ICA工艺优选
多元二次项拟合，得到拟合方程为 Y＝91.61+0.042X1+
2.3.1 色谱条件 2
9.43X2－5.42X3－15.62X1X2+2.24X1X3－12.86X2X3－12.36X1 －
参考文献[12―13]设置本研究中 HPLC 检测条件：
2
2
14.44X2 －28.03X3（R ＝0.975 1，P＜0.05）。方差分析结
2
色谱柱为 Agilent C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流速
果（表 3）显示，所建模型具有极高的显著性（P＜0.01），
为 1.0 mL/min，柱温为 27 ℃；PTX 以乙腈-甲醇-水（42∶
而失拟项的 P＞0.05，实验模型相关系数为 0.943 0。这
28∶30，V/V/V）为流动相，检测波长为 227 nm；ICA 以乙
提示该模型能较好地反映出响应值的变化，可用于筛选
腈-水（25∶75，V/V）为流动相，检测波长为 275 nm；进样
MTX-oxi-Ms@PTX/ICA的最优工艺。
量为20 μL。
表3 回归模型的方差分析结果
2.3.2 包封率测定
方差来源 平方和 自由度 MS F P
参考文献[14]进行包封率测定。取0.5 mL胶束溶液
模型 7 898.67 9 877.63 30.42 ＜0.000 1
至5 mL容量瓶中，以甲醇定容，过0.45 μm微孔滤膜，收 －4
X 1 0.01 1 0.01 5.01×10 0.982 8
集滤液，得过柱前溶液；取 0.5 mL 胶束溶液至葡聚糖凝 X 2 710.64 1 710.64 24.64 0.001 6
胶柱顶部，加入0.5 mL PBS洗脱2次，合并洗脱液，以甲 X 3 235.23 1 235.23 8.15 0.024 5
X 1X 2 976.25 1 976.25 33.84 0.000 7
醇定容至5 mL，过0.45 μm微孔滤膜，收集滤液，得过柱
X 1X 3 20.03 1 20.03 0.69 0.432 2
后溶液。采用HPLC法测定药物含量，并参照2020年版 X 2X 3 661.26 1 661.26 22.92 0.002 0
《中国药典》（四部）相关通则要求进行含量测定方法学 X 1 2 642.85 1 642.85 22.29 0.002 2
2 878.10 1 878.10 30.44 0.000 9
考察。考察符合要求后，按“2.3.1”项下色谱条件进样测 X 2
2 3 308.43 1 3 308.43 114.69 ＜0.000 1
X 3
定，记录过柱前后溶液中 PTX 和 ICA 含量，根据下式计 残差 201.92 7 28.85
算胶束中PTX和ICA的包封率：PTX包封率（%）＝胶束 失拟项 166.64 3 55.55 6.30 0.053 8
中 PTX 的 质 量/总 PTX 的 质 量 ×100%，ICA 包 封 率 误差 35.28 4 8.82
总离差 8 100.60 16
（%）＝胶束中ICA的质量/总ICA的质量×100%。
2.3.3 工艺优化 由表 3 可知，因素 X1对 Y 无显著影响（P＞0.05），因
2
2
本研究在前期预实验基础上，确定以Soluplus 质量 素X3对Y影响显著（P＜0.05），因素X2、 X1X2、X2X3、X1 、X2 、
®
®
2
（X1 ）、Soluplus 与TPGS1000的质量比（X2，mg/mg）、水合 X3 对 Y 有极显著影响（P＜0.01）。通过 Design-Expert
温度（X3 ）为考察因素，以PTX和ICA包封率的综合评分 8.0.6.1软件对各因素之间的交互作用进行效应面分析，
Y[Y（%）＝PTX 包封率×0.5+ICA 包封率×0.5]为响应 结果见图 1。根据图 1 结果，再结合胶束制备经验及胶
值，利用Design-Expert 8.0.6.1软件进行响应面分析。因 束制备的实际情况，最终确定 MTX-oxi-Ms@PTX/ICA
素与水平表见表1，实验设计及结果见表2。 的最优工艺如下：X1 为 80 mg，X2 为 4∶1，X3 为 35 ℃，
中国药房 2025年第36卷第3期 China Pharmacy 2025 Vol. 36 No. 3 · 287 ·