Page 36 - 《中国药房》2025年3期
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release experiments showed that MTX-oxi-Ms@PTX/ICA released drugs more rapidly in oxidative environments. The half maximal
          inhibitory  concentration  of  MTX-oxi-Ms@PTX/ICA  against  RENCA  cells  was （5.170±0.036）  μmol/L.  In  vitro  cellular  uptake
          experiments  indicated  that  compared  with  unmodified  micelles，  MTX  modified  micelles  had  stronger  targeting  effects  on  cancer
          cells， and also significantly enhanced the inhibitory ability of invasion and migration of RENCA cells （P＜0.05）. CONCLUSIONS
          MTX-oxi-Ms@PTX/ICA  micelles  are  successfully  prepared，  which  exhibit  high  encapsulation  efficiency，  low  critical  micelle
          concentration，  and  good  stability.  These  micelles  demonstrate  significant  cytotoxicity  against  RENCA  cells  and  effectively  inhibit
          cancer cell invasion and migration.
          KEYWORDS     reactive oxygen species-responsive micelles； methotrexate； targeted drug delivery； paclitaxel； icariin


              紫杉醇（paclitaxel，PTX）是一种广泛使用的抗肿瘤                  紫外检测器）购自日本 Shimadzu 公司；LITESIZER500
          药物，主要通过稳定微管、抑制细胞分裂来诱导细胞凋                            型纳米粒度及 Zeta 电位分析仪购自英国 Malvern 公司；
          亡；但PTX存在水溶性低、毒性强、多药耐药性突出等缺                          CKX53 型 倒 置 荧 光 显 微 镜 购 自 日 本 Nikon 公 司 ；
                          [1]
          点，临床应用受限 。淫羊藿苷（icariin，ICA）是一种从                     CLARIOstar 型全波长荧光扫描酶标仪购自德国 BMG
          传统中药淫羊藿中提取的黄酮类化合物，具有显著的抗                            Labtech 公司；HBS-1096A 型酶标仪购自南京德铁生物
                               [2]
          肿瘤、抗炎和抗氧化活性 。研究表明，ICA不仅能抑制                          科技有限公司。
                                                        [3]
          肿瘤细胞的增殖和迁移，还能够增强化疗药物的疗效 。                           1.2 主要药品与试剂
          然而，ICA的临床应用面临着水溶性差和靶向性不足等                               PTX 对照品（批号 D1205C，纯度≥98%）、ICA 对照
          问题。为了克服这些问题，可考虑将ICA与其他抗肿瘤                           品（批号 J0703A，纯度≥98%）、香豆素（coumarin，Cou）
          药物（如 PTX）联合使用，并开发合适的药物递送系统，                         原 料 药（批 号 C104161）、4′，6- 双 脒 基 -2- 苯 基 吲 哚
          以共同改善 ICA 和 PTX 的水溶性、靶向性及生物利                       （DAPI，批号D489987）均购自上海阿拉丁生化科技股份
              [4]
          用度 。                                                有限公司；聚乙烯己内酰胺-聚乙酸乙烯酯-聚乙二醇接
                                                                              ®
              肿瘤细胞代谢异常和快速增殖导致肿瘤微环境中                           枝共聚物（Soluplus ，批号50477909）购自德国BASF SE
          活性氧（reactive oxygen species，ROS）水平较高，因此             公司；维生素 E 琥珀酸酯聚乙二醇 1000（TPGS1000，批
          ROS 响应型药物递送系统能够在肿瘤部位选择性释放                           号MB3962）购自大连美仑生物技术有限公司；二硬脂酰
          药物，从而提高疗效并减少对正常组织的损伤                   [5―6] 。ROS   基 磷 脂 酰 乙 醇 胺 - 聚 乙 二 醇 2000- 甲 氨 蝶 呤（DSPE-
          响应键——酮缩硫醇键（thioketal，TK）能够在高ROS水                    PEG2000-MTX，批号 R-EL-090）、二硬脂酰基磷脂酰乙
          平环境下被氧化从而断裂，被广泛用于设计ROS响应型                           醇胺-聚乙二醇 2000-酮缩硫醇-聚乙二醇 5000（DSPE-
          药物递送系统。含有TK的药物载体可以在肿瘤部位选                            PEG2000-TK-PEG5000，批号 R-EL-089）均购自西安瑞
          择性地裂解，从而实现药物的靶向递送，减毒增效                      [7―8] 。  禧生物科技有限公司；CCK-8 试剂盒（批号 CA1210）、
          此外，甲氨蝶呤（methotrexate，MTX）可以通过叶酸受体                   DMEM 高糖培养基（批号 11995）、1640 培养基（批号
          介导的途径显著增强药物的肿瘤靶向性，从而减少对正                            90023）、磷酸盐缓冲液（PBS，批号 P903593，pH7.4）均购
          常组织的影响      [9―10] 。                                自北京索莱宝科技有限公司；其余常见溶剂均为色谱级
              基于上述背景，本研究制备了一种 ROS 响应型                         纯度。
          MTX修饰PTX/ICA胶束（MTX-oxi-Ms@PTX/ICA）。该                1.3 细胞
          胶束利用疏水核心包载水溶性较差的PTX和ICA；胶束                              小鼠肾癌细胞RENCA购自亿奥邦（北京）生物科技
          的最外层由聚乙二醇5000（PEG5000）形成水化层，隐藏                      研究有限公司。
          主动靶向配体 MTX，以减少正常细胞对胶束的摄取并                           2 方法与结果
          减轻不良反应。本研究通过协同实验确定两药的最优                             2.1 PTX/ICA协同毒性实验的浓度筛选与分析
          配比，采用 Box-Behnken 设计-响应面法优化制剂工艺，                        为了评估 PTX 和 ICA 的协同毒性，将 RENCA 细胞
          对 MTX-oxi-Ms@PTX/ICA 进行表征，并考察了其体外                   以 1×10 个/孔的密度接种到 96 孔板中，并在细胞贴壁
                                                                     4
          靶向性以及体外抗肿瘤作用，旨在为抗肿瘤制剂的研发                            后向细胞孔中加入不同浓度的 PTX 和 ICA 溶液。PTX
          提供参考。                                               的 终 浓 度 分 别 设 置 为 0、0.31、0.62、1.25、2.50、5.00、
          1 材料                                                10.00、15.00 μmol/L，ICA 的终浓度分别设置为 0、0.62、
          1.1 主要仪器                                            1.25、2.50、5.00、10.00、15.00、20.00 μmol/L。根据上述
              FA1004 型电子天平购自上海越平科学仪器有限公                       浓度范围，形成不同的 PTX 和 ICA 浓度组合，每个组合
          司；RE52CS 型旋转蒸发器购自上海亚荣生化仪器厂；                         设置 3 个复孔。培养 48 h 后，每孔加入 10%CCK-8 试剂
          KQ3200E 型超声波清洗器购自昆山市超声仪器有限公                         10 μL，继续培养 1～4 h。采用酶标仪在 450 nm 波长下
          司；JY92-2D 型超声波细胞破碎机购自宁波新芝生物科                        检测各孔光密度（OD）值。采用在线SynergyFinder软件
          技股份有限公司；2010型高效液相色谱（HPLC）仪（包含                      （https：//synergyfinder.fimm.fi）计算药物协同评分（ZIP


          · 286 ·    China Pharmacy  2025 Vol. 36  No. 3                               中国药房  2025年第36卷第3期
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