Page 40 - 《中国药房》2025年3期
P. 40

MTX-oxi-Ms@Cou+H2O2（总 药 物 终 浓 度 均 设 置 为             表4 各组细胞的迁移、侵袭能力考察结果（x±s，n＝3）
          0.032、0.63、1.25、2.50、5.00、10.00、20.00 μmol/L），每个                                        划痕愈合率/%
                                                              组别               迁移细胞数/个 侵袭细胞数/个
          浓度设置5个复孔；并以DMEM培养基为空白对照。加                                                              12 h   24 h
                                                              Blank-Ms组        47.33±4.93  107.00±4.36  41.19±6.24  72.62±6.06
          入各胶束，继续培养 48 h 后弃培养液，向各孔中加入含
                                                              Ms@PTX/ICA组      30.33±3.21 a  57.00±2.65 a  26.88±1.49 a  43.99±2.45 a
          10%CCK-8的培养液100 μL，继续孵育2 h，于450 nm波                 MTX-oxi-Ms@PTX/ICA组  16.67±1.53 b  28.67±3.20 b  23.33±1.25 b  35.45±2.78 b
          长处测定样品吸光度（A），计算细胞存活率[细胞存活率                          MTX-oxi-Ms@PTX/ICA+H 2O 2组  15.33±2.08 b  22.67±6.03 b  18.35±6.34 bc  21.75±9.76 bc
         （％）＝Ax/A y×100％；式中，Ax为给药孔细胞的A，A y为空                     a：与Blank-Ms组比较，P＜0.05；b：与Ms@PTX/ICA组比较，P＜
                                                              0.05；c：与MTX-oxi-Ms@PTX/ICA组比较，P＜0.05。
          白对照孔细胞的A]，并计算各样品对细胞的半数抑制浓
                                                              2.8.2 细胞侵袭实验
          度（half maximal inhibitory concentration，IC50 ）。结果显
                                                                  将 Matrigel 基质胶（5 μmol/L）在冰上融化，吸取 30
          示 ，Ms@PTX/ICA、MTX-Ms@PTX/ICA、MTX-oxi-
                                                              μL加入到Transwell小室上腔室，在37 ℃下孵育1 h；在
          Ms@PTX/ICA 和 MTX-oxi-Ms@PTX/ICA+H2O2 对细胞
                                                              下腔室中加入 600 μL 含 10% 胎牛血清的完全培养基。
          的 IC50依次为（5.990±0.032）、（3.990±0.036）、（5.170±
                                                                                                        4
                                                              用无血清培养基将 RENCA 细胞重悬，并以 5×10 个/孔
          0.036）、（2.930±0.042） μmol/L。
                                                              的密度接种于小室上腔室。实验分组、给药、培养同
          2.8 胶束对RENCA细胞迁移、侵袭能力的影响
                                                             “2.8.1”项下。将小室置于 37 ℃、5%CO2的培养箱中孵
          2.8.1 细胞迁移实验
                                                              育 24 h。用棉签轻轻擦拭上腔室，去除未侵袭的细胞。
              将 Transwell 小室置于 24 孔板中，用无血清 1640 培             随后，将小室置于4%多聚甲醛中固定20 min，并用PBS
          养基重悬 RENCA 细胞，以 1.5×10 个/孔的密度接种于                    清洗2次。用0.1%结晶紫溶液染色15 min，再用PBS清
                                        3
          小室上腔室；同时，在下腔室中加入600 μL含10%胎牛                        洗多余染液。晾干后，在显微镜下观察并计数穿过基质
          血清的培养基。实验分为 Blank-Ms 组（空白对照组）、                      胶到达下腔室的细胞数目。实验重复3次。按“2.6.1”项
          Ms@PTX/ICA 组 、MTX-oxi-Ms@PTX/ICA 组 和 MTX-           下方法进行统计分析。结果见表 4、图 5。结果显示，与
          oxi-Ms@PTX/ICA+H2O2组（给药组的总药物终浓度均为                   Blank-Ms 组相比，Ms@PTX/ICA 组侵袭细胞数显著减
          20.00 μmol/L）。将对应胶束加入各组小室的上腔室后，                     少（P＜0.05）；与 Ms@PTX/ICA 组 相 比 ，MTX-oxi-
          于 37 ℃孵育 12 h。取出小室，用 PBS 清洗 3 次，并用棉                 Ms@PTX/ICA 组、MTX-oxi-Ms@PTX/ICA+H2O2组侵袭
          签刮除未通过膜的细胞。用4%多聚甲醛固定通过膜迁                            细胞数进一步减少（P＜0.05），但 MTX-oxi-Ms@PTX/
          移的细胞 30 min，再用 0.1% 结晶紫溶液在室温下染色                     ICA组与MTX-oxi-Ms@PTX/ICA+H2O2组比较差异无统
          20 min。用 PBS 清洗染液，晾干后在显微镜下观察、拍                      计学意义（P＞0.05）。
          照并计算迁移细胞的平均数量。实验重复 3 次。按
         “2.6.1”项下方法进行统计分析。结果见图4、表4。结果
          显示，与Blank-Ms组相比，Ms@PTX/ICA组迁移细胞数
          显著减少（P＜0.05）；与 Ms@PTX/ICA 组比较，MTX-
          oxi-Ms@PTX/ICA 组 、MTX-oxi-Ms@PTX/ICA+H2O2 组
          迁 移 细 胞 数 进 一 步 减 少（P＜0.05），但 MTX-oxi-
                                                                     A. Blank-Ms组           B. Ms@PTX/ICA组
          Ms@PTX/ICA 组与 MTX-oxi-Ms@PTX/ICA+H2O2 组比
          较差异无统计学意义（P＞0.05）。







                                                                 C. MTX-oxi-Ms@PTX/ICA组  D. MTX-oxi-Ms@PTX/ICA+H2O2组
                                                                 图5 RENCA细胞侵袭显微图（标尺＝50 μm）
                  A. Blank-Ms组          B. Ms@PTX/ICA组        2.8.3 细胞划痕实验
                                                                  将RENCA细胞以1×10 个/孔的密度接种于6孔板
                                                                                      5
                                                              中，置于培养箱中孵育 24 h，使细胞生长形成单层。用
                                                              划痕器在细胞层中央划出一条直线形成划痕模型，用
                                                              PBS 清洗 2 次，去除细胞碎片。实验分组、给药、培养同
                                                             “2.8.1”项下。将细胞置于培养箱中，分别在 0、12、24 h

             C. MTX-oxi-Ms@PTX/ICA组  D. MTX-oxi-Ms@PTX/ICA+H2O2组  时用倒置显微镜拍摄划痕区域的图片，记录细胞愈合过
              图4 RENCA细胞迁移显微图（标尺＝50 μm）                       程。使用 Image J 软件分析并量化划痕区域的宽度，计


          · 290 ·    China Pharmacy  2025 Vol. 36  No. 3                               中国药房  2025年第36卷第3期
   35   36   37   38   39   40   41   42   43   44   45