Page 34 - 《中国药房》2024年23期

under the microscope； immunofluorescence staining was performed to count the proportion of cells producing pseudopodia， the
relative length of pseudopodia was measured， and the expression levels of CD41 and CD42b mRNA were assessed. Cells from the
solvent control group and the 400 μg/mL LZD group， cultured in differentiation medium for 14 days， were extracted and subjected
to non-targeted metabolomics and targeted energy metabolomics analysis using liquid chromatography-tandem mass spectrometry.
The relative content of pyruvate in cells， after being cultured for 14 days with the addition of pyruvate （10 mmol/L） or LZD （400
μg/mL）+pyruvate （10 mmol/L）， was measured and observed， as well as its effects on cell proliferation and platelet precursor
generation. RESULTS 400 μg/mL LZD could significantly inhibit the proliferation of MEG-01 cells and the generation of platelet
precursors （P＜0.01）. Non-targeted metabolomic analysis of MEG-01 cells after 400 μg/mL LZD treatment revealed significant
changes in energy metabolism-related pathways such as mTOR signaling pathway， alanine， aspartate and glutamate metabolism，
and central carbon metabolism in cancer. Targeted energy metabolomic analysis further showed that the relative contents of
adenosine triphosphate， guanosine triphosphate， and pyruvate in MEG-01 cells were significantly reduced （P＜0.01）， while the
relative contents of lactate were significantly increased （P＜0.01）. Compared with the LZD group， the relative content of pyruvate，
cell count， the proportion of cells producing pseudopodia and the relative length of pseudopodia were significantly increased in the
LZD+pyruvate group （P＜0.01）. CONCLUSIONS LZD may reduce pyruvate production by inhibiting mitochondrial energy
metabolism， thereby suppressing megakaryocyte proliferation and platelet precursor production， ultimately leading to the occurrence
of thrombocytopenia.
KEYWORDS linezolid； thrombocytopenia； platelet precursor； energy metabolism； pyruvate

近年来，耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（methicillin- 成 。但上述文献中的研究对象为肿瘤细胞、T细胞等，
[13]
resistant Staphylococcus aureus，MRSA）的感染率和感染 并非具有生成血小板功能的巨核细胞。本研究以常用
[1]
者病死率居高不下，严重威胁着人类健康 。利奈唑胺 于研究巨核细胞产板功能的MEG-01巨核细胞作为研究
（linezolid，LZD）作为 唑烷酮类药物，因具有良好的抗 对象，利用代谢组学方法研究LZD对巨核细胞代谢的影
菌活性和组织穿透力，已成为临床治疗MRSA感染的主 响，并评估细胞增殖及血小板前体生成情况，旨在进一
[2]
要药物 。但随着 LZD 的广泛使用，关于其不良反应的 步探究LZD在LIT发病机制中的影响。
报 道 逐 渐 增 多 ，其 中 以 LZD 诱 导 的 血 小 板 减 少 症 1 材料
（linezolid-induced thrombocytopenia，LIT）的 发 生 率 最 1.1 主要仪器
高，为 11.8%～43.0% [3―6] 。若 LIT 未及时发现并得到救 本研究所用的主要仪器主要包括 IX71 型倒置显微
治，可危及患者生命。因此，对LIT的发病机制进行深入 镜（日本 Olympus 公司），TC-20 型细胞计数仪、CFX-96
研究，发现并确定其发生的关键机制，可为临床防治 型荧光定量聚合酶链式反应（PCR）仪（美国 Bio-Rad 公

LIT、促进 LZD 的安全合理使用、提高 MRSA 感染的救 司），LSM-880 型激光共聚焦显微镜（德国 Carl Zeiss 公
TM
治水平奠定基础。 司），Varioskan LUX 型多功能酶标仪（美国 Thermo
已有研究发现，LZD对血小板并没有直接毒性，LIT Fisher Scientific公司），TripleTOF 6600型质谱仪（美国
TM
发生的直接原因主要是血小板生成减少 [7―8] 。血小板生 AB SCIEX公司），1290 Infinity LC型超高压液相色谱仪
成受多种因素共同调节，包括信号通路、转录因子及细 （美国Agilent公司）。
胞代谢等 [9―10] 。LZD 通过与核糖体 rRNA 的 50S 亚单位 1.2 主要药品与试剂
[11]
结合，阻止细菌蛋白质的合成从而发挥抗菌作用 。人 LZD标准品（批号HY-10394，纯度≥99%）购自美国
体细胞线粒体蛋白质合成系统与细菌有高度的相似性， MCE公司；二甲基亚砜（dimethyl sulfoxide，DMSO；批号
既往研究证实，LZD 会对细胞的线粒体功能造成损害， D2650）、丙酮酸标准品（批号P8574，纯度≥99%）均购自
引发细胞代谢紊乱，进而影响细胞的增殖、分化和细胞 美国 Sigma 公司；RPMI-1640 培养基（批号 SH30809.01）

因子的生成 [12―14] 。另有学者在针对辅助性 T 细胞 17 的 购自美国 Cytiva 公司；胎牛血清（货号 10099-141）购自
研究中发现，LZD会导致细胞中能量代谢相关产物—— 美国Gibco公司；CCK-8细胞活性检测试剂盒、β-微管蛋
丙酮酸的含量显著减少，而通过添加外源性丙酮酸可以 白（β-tubulin）抗体、DAPI 染色剂（批号分别为 C0037、
恢复 LZD 引起的能量代谢异常，并恢复细胞因子的生 AF2835、C1005）均购自上海碧云天生物技术股份有限

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