Page 26 - 《中国药房》2024年22期
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蔗糖、甘草酸铵质量浓度分别为 91.24、495.90、43.08、 919.00 10 13 16 20
14
4
21
1 573.56 μg/mL 的对照品混合液 A；精密吸取该对照品 1 2 3 5 6 7 8 9 11 12 15 17 18 19 22
S12（样8）
S11（样7）
混合液A 100 μL，置于1 mL容量瓶中，加甲醇稀释并定 mAU 431.22 S10（样5）
S9（样4）
S8（样3）
容，摇匀，即得甘草苷、特女贞苷、3，6′-二芥子酰基蔗 S7（样2）
S6（样1）
S5（221101）
S4（200803）
S3（200802）
糖、甘草酸铵质量浓度分别为 9.12、49.59、4.31、157.36 －56.56 S2（200801）
S1（样6）
μg/mL的对照品混合液B。 0 16.96 33.91 50.87 67.82 84.78 101.74 118.69
t/min
2.2.3 扶正胶囊供试品溶液 图1 12批扶正胶囊样品的HPLC叠加指纹图谱
取扶正胶囊内容物，研匀，取约 1.0 g，精密称定，置
431.22
于 50 mL 三角瓶中，精密加入 70% 甲醇 20 mL，称定质 mAU 1 4 5 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 21
20
量，超声（功率300 W，频率40 kHz）处理30 min；取出，待 －56.56 2 3 6 22
0 16.96 33.91 50.87 67.82 84.78 101.74 118.69
冷却至室温后用70%甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过， t/min
取续滤液，即得。 图2 扶正胶囊样品的对照指纹图谱
2.2.4 扶正胶囊组方单味药材溶液 2.3.5 共有峰的归属与指认
分别取黄花倒水莲、牛大力、扶芳藤、黄根、女贞子、 经自动匹配，12 批扶正胶囊样品有 22 个共有峰。
[1]
甘草饮片适量，按照扶正胶囊制备工艺提取、干燥 ，再 通过将对照指纹图谱（图 2）与混合对照品溶液色谱图
按“2.2.3”项下方法操作，制得各单味药材溶液。 （取“2.2.1”项下混合对照品溶液按“2.1”项下色谱条件进
2.3 扶正胶囊指纹图谱的建立与分析 样分析所得，见图 3）进行比对，共指认出其中 4 个色谱
2.3.1 精密度考察 峰，分别为甘草苷（峰8）、特女贞苷（峰10）、3，6′-二芥子
取扶正胶囊样品（样 6），按“2.2.3”项下方法制备供 酰基蔗糖（峰11）、甘草酸铵（峰21）。通过将扶正胶囊样
试品溶液，再以“2.1”项下色谱条件连续进样 6 次，记录 品（样 6）色谱图与各单味药材溶液色谱图（取“2.2.4”项
峰面积。以峰 10（特女贞苷，保留时间适宜且峰面积较 下各单味药材溶液按“2.1”项下色谱条件进样分析所得，
大，后同）为参照，计算得各共有峰相对保留时间的RSD 见图 4）进行比对，确认峰 1、4、7、11 为黄花倒水莲专属
均不高于 0.3%，相对峰面积的 RSD 均不高于 2.7%（n＝ 峰，峰 2 为扶芳藤专属峰，峰 6、10、17、18 为女贞子专属
6），表明方法精密度良好。 峰，峰 8、12～14、19～21 为甘草专属峰，峰 22 为黄根专
2.3.2 重复性考察 属峰，峰3为女贞子、牛大力共有峰，峰5为黄根、扶芳藤
取扶正胶囊样品（样6），共6份，按“2.2.3”项下方法 共有峰，峰 9 为扶芳藤、甘草共有峰，峰 15 为黄花倒水
制备供试品溶液，再以“2.1”项下色谱条件进样分析，记
莲、甘草共有峰，峰16为黄花倒水莲、女贞子共有峰。
录峰面积。以峰10为参照，计算得各共有峰相对保留时 21
间的 RSD 均不高于 0.2%，相对峰面积的 RSD 均不高于 100 10
80
60
3.0%（n＝6），表明方法重复性良好。 relative abundance/% 40 8 11
20
2.3.3 稳定性考察 0 0 8 16 24 32 40 48 56 64 72 80 88 96 104 112
取扶正胶囊样品（样 6），按“2.2.3”项下方法制备供 t/min
试品溶液，再以“2.1”项下色谱条件，分别于室温下放置 8：甘草苷；10：特女贞苷；11：3，6′-二芥子酰基蔗糖；21：甘草
酸铵。
1、4、8、12、18、24 h时进样分析，记录峰面积。以峰10为
图3 混合对照品溶液的色谱图
参照，计算得各共有峰相对保留时间的 RSD 均不高于
0.3%，相对峰面积的RSD均不高于2.6%（n＝6），表明供 796.62 10
14 16
1 2 3 4 5 6 7 8 9 11 1213 15 17 18 21
试品溶液在室温下放置24 h内稳定性良好。 3 3 19 20 22 样6
牛大力
2.3.4 指纹图谱建立及相似度评价 mAU 397.98 1 4 6 7 10 11 15 16 161718 女贞子
黄花倒水莲
2 5 9 扶芳藤
分别取12批扶正胶囊样品，按“2.2.3”项下方法制备 8 9 13 12 14 15 19 20 21 甘草
－0.65 5 22 黄根
供试品溶液，再以“2.1”项下色谱条件进样分析，记录色 0 16.96 33.91 50.87 67.82 84.78 101.74 118.69
t/min
谱图。将采集到的色谱数据以“AIA”文件格式导入《中
图4 扶正胶囊 HPLC指纹图谱共有峰归属
药色谱指纹图谱相似度评价系统（2004A）》，以扶正胶囊
样品（样6）图谱为参照图谱，设定时间窗宽度为0.2 min， 2.3.6 12批样品的聚类分析和主成分分析
采用平均数法进行多点校正，得扶正胶囊的叠加指纹图 以12批扶正胶囊样品指纹图谱中22个共有峰的峰
谱（图1）及对照指纹图谱（图2），并进行相似度分析。结 面积为变量，采用 SPSS 20.0 软件进行聚类分析。采用
果显示，12批样品的指纹图谱与对照指纹图谱的相似度 类间连接法，以平方欧氏距离为分类依据，得到12批扶
分 别 为 0.983、0.912、0.911、0.912、0.969、0.983、0.985、 正胶囊指纹图谱的聚类树状关系图。结果（图 5）显示，
0.983、0.984、0.980、0.985、0.976，均大于 0.91，表明各样 当 平 方 欧 氏 距 离 为 5 时 ，12 批 样 品 可 被 分 为 3 类 ，
品相似度良好，提示不同批次扶正胶囊的化学组成差异 200801、200802、200803 为 Ⅰ 类 ，样 1～ 样 8 为 Ⅱ 类 ，
小，制备工艺稳定。 221101为Ⅲ类。
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