Page 22 - 《中国药房》2024年22期

120 PTX对照品 止消化后，将细胞与PBS混合，离心后弃去上清液；将细
100 PTX-PLGA-NPs 胞用结合缓冲液 100 μL 重悬后，依次加入 Annexin
细胞存活率/% 60 a Ⅴ-FITC 染色液、PI 染色液 5 μL，室温避光孵育 15 min，
80
40
20 使用流式细胞仪检测细胞凋亡情况。
0 结果（图6、表2）显示，与对照组比较，PTX组、PTX-
对照组 0.7 1.4 2.8 5.6 11.2
PTX不同质量浓度组/（μg/mL） PLGA-NPs组细胞的凋亡率均显著升高，且PTX-PLGA-
a：与同质量浓度PTX组比较，P＜0.05。 NPs 组显著高于 PTX 组（P＜0.05），提示 PTX 及其纳米
图4 各组细胞存活率的柱形图（x±s，n＝5） 制剂均可促进肺癌细胞凋亡，且PTX-PLGA-NPs的作用

PTX 对照品、PTX-PLGA-NPs（PTX 质量浓度均为 11.2 更强。
μg/mL，参考“2.3.1”项下结果设置，下同）的新鲜培养 10 5 10 5 10 5
10 4 10 4 10 4
基。孵育 24 h 后，弃去培养基，每皿细胞加入 Calcein-
PI 10 3 PI 10 3 PI 10 3
AM/PI 染色工作液，于 37 ℃下避光染色 30 min，以 PBS 10 2 10 2 10 2
0 0 0
清洗3次后，采用激光共聚焦显微镜观察细胞的染色情 －139 3 4 5 －139 3 4 5 －139 3 4 5
－386 0 10 10 10 －386 0 10 10 10 －386 0 10 10 10
况并拍照、分析。 FITC FITC FITC
A.对照组 B. PTX组 C. PTX-PLGA-NPs组
结果（图5）显示，对照组可见明显的绿色荧光，表明
图6 各组细胞凋亡情况的流式细胞图（Annexin Ⅴ-
细胞处于存活状态；PTX 组可见部分红色荧光，表明部
FITC/PI染色法）
分细胞处于死亡状态，提示PTX对细胞具有一定的杀伤
表2 各组细胞凋亡率及 G2 期细胞比例的检测结果
作用；PTX-PLGA-NPs 组可见明显的红色荧光，且绿色
（x±s，n＝3）
荧光减弱，表明有更多的细胞处于死亡状态，提示将
组别 凋亡率/% G 2期细胞比例/%
PTX制成纳米粒后，其细胞杀伤力明显增强。
对照组 2.87±0.64 4.17±2.70
PTX组 15.23±2.40 a 44.77±3.04 a
PTX-PLGA-NPs组 38.23±2.14 ab 72.00±7.47 ab
a：与对照组比较，P＜0.05；b：与PTX组比较，P＜0.05。
对照组 2.3.4 细胞周期分布情况检测

采用PI染色法检测。取对数生长期的LLC细胞，按
5
每孔 2×10 个接种于 12 孔板中，孵育过夜；待细胞贴壁
后，弃去培养基，将细胞分为对照组、PTX 组、PTX-
PLGA-NPs 组，每组设置 3 个复孔。对照组细胞加入新
PTX组 鲜培养基，药物组细胞分别加入含 PTX 对照品、PTX-

PLGA-NPs的新鲜培养基。孵育24 h后，弃去培养基，细
胞用 PBS 清洗后，用胰酶消化 3 min；终止消化后，将细
胞与 PBS 混合，离心后弃去上清液；向细胞中加入预冷
PTX-PLGA-NPs组 的70%乙醇1 mL，边加边涡旋，吹打混匀后于－20 ℃下

静置过夜。次日，取上述细胞悬液，离心后弃去上清液，
向细胞中加入 PI 染色液 500 μL，孵育 15 min，使用流式
细胞仪检测细胞周期分布情况。
Calcein-AM PI 合并 结果（图7、表2）显示，与对照组对比，PTX组、PTX-
图5 各组细胞存活情况的激光共聚焦显微图（Calcein-
PLGA-NPs组G2期细胞比例均显著升高，且PTX-PLGA-
AM/PI双染色法）
NPs 组显著高于 PTX 组（P＜0.05），提示 PTX 及其纳米
2.3.3 细胞凋亡情况检测 制剂均可将肺癌细胞阻滞在G2期，且PTX-PLGA-NPs的
采用Annexin Ⅴ-FITC/PI染色法检测。取对数生长 作用更强。
5
期的LLC细胞，按每孔2×10 个接种于12孔板中，孵育 3 讨论
过夜；待细胞贴壁后，弃去培养基，将细胞分为对照组、 本研究对所制 PTX-PLGA-NPs 进行了理化性质表
PTX组、PTX-PLGA-NPs组，每组设置3个复孔。对照组 征和体外抗肿瘤作用考察。理化性质表征结果表明，所
细胞加入新鲜培养基，药物组细胞分别加入含PTX对照 制PTX-PLGA-NPs呈类球形，粒径均一，分散均匀，性质
品、PTX-PLGA-NPs 的新鲜培养基。孵育 24 h 后，弃去 稳定，EE、DL 分别为（52.32±0.66）%、（7.07±0.18）%，
培养基，将细胞用PBS清洗2次，再用胰酶消化2 min；终 紫外-可见光吸收特性未受载体影响。

· 2724 · China Pharmacy 2024 Vol. 35 No. 22 中国药房 2024年第35卷第22期